| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Click chemistry reagent
Halo-DBCO targets HaloTag, a protein tag used in protein labeling and purification. The DBCO group enables strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) with azide-containing molecules, while the halogenated moiety facilitates covalent binding to HaloTag. By forming covalent HaloTag ligand couples, the compound enables the labeling and purification of HaloTag-fused proteins. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
生物正交反应，包括应变促进的叠氮-炔环加成反应（SPAAC）和逆电子需求Diels-Alder反应（iEDDA），在活细胞成像应用中日益普及。然而，试剂在活细胞中的稳定性和反应活性尚未得到系统研究。本文报道了一种基于HaloTag蛋白技术的通用型、可靶向细胞器的系统，该系统利用可点击的HaloTag配体，在不同亚细胞区室中直接比较生物正交试剂的反应活性、特异性和稳定性。该系统能够对活细胞中的生物正交反应进行详细比较，并为活细胞成像研究选择最佳试剂和反应条件提供依据。我们发现sTCO与单取代四嗪的反应是细胞内最快的反应；然而，两种试剂均存在稳定性问题。为了解决这一问题，我们引入了一种新的sTCO变体Ag-sTCO，其稳定性显著提高，可直接用于细胞内与四嗪的快速生物正交反应。利用构象张力较大的反式环辛烯的银配合物，尤其是在与反应活性较低、稳定性更高的四嗪类化合物联用时，将极大地拓展其应用范围。[1]在无细胞生化体系中，Halo-DBCO可通过SPAAC反应与含叠氮基团的分子以及HaloTag反应，形成共价配体对。该化合物的DBCO基团能够进行生物正交点击化学反应。该化合物形成共价HaloTag配体对的能力可通过SDS-PAGE、质谱或荧光分析进行评估。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
在基于细胞的检测中，Halo-DBCO 用于标记活细胞中的 HaloTag 融合蛋白。该化合物与 HaloTag 反应形成共价键，从而实现对融合蛋白的特异性标记。DBCO 基团随后可用于与含叠氮基团的分子进行进一步的点击化学标记。这使得研究细胞内蛋白质的定位、运输和相互作用成为可能。
|
| 酶活实验 |
用于 HaloTag 标记的无细胞检测方法是将化合物与纯化的 HaloTag 蛋白或含有 HaloTag 融合蛋白的细胞裂解液孵育。通过 SDS-PAGE 电泳结合荧光扫描或蛋白质印迹法评估 HaloTag 配体共价偶联物的形成。标记效率通过测量标记蛋白的百分比来确定。使用质谱或高效液相色谱法 (HPLC) 可以评估含叠氮分子的 SPAAC 反应。
|
| 细胞实验 |
利用生物正交配体标记HaloTag融合蛋白并评估活细胞中的SPAAC和iEDDA反应[1]
将表达HaloTag构建体的HeLa细胞接种于6孔板中，并用1 mL浓度为10 μM的HaloTag配体1-12的生长培养基在37 °C/5% CO2条件下处理0.5小时。用配体12标记的样品作为阳性对照，用于确定每次实验中HaloTag蛋白的最大标记量。用DPBS洗涤细胞三次，并在2 mL新鲜培养基中孵育1小时，期间更换一次培养基以去除未结合的HaloTag配体。对于SPAAC反应，HeLa细胞先用氯代烷烃配体1-3标记，随后在培养基中分别用50 nM至250 μM的荧光染料15-17处理2小时，或在培养基中用25 μM的荧光染料处理30秒至4小时。反应立即用500 μM叠氮胺24、DBCO胺26（Click Chemistry Tools）或BCN胺25的PBS溶液（SPAAC淬灭缓冲液）洗涤细胞两次以终止反应。对于iEDDA反应，用氯代烷烃配体2和4-11标记的HeLa细胞在培养基中分别用1 nM至20 μM的荧光染料13、14、17和18处理1小时，或在培养基中用2 μM的荧光染料处理10秒至2小时。细胞用 100 μM Tz-amine 27（Click Chemistry Tools）或 TCO-amine 28 的 PBS 溶液（iEDDA 淬灭缓冲液）洗涤两次以进行淬灭。将细胞刮入 1 mL 淬灭缓冲液中，以 2000 g 离心 3 分钟，吸出缓冲液，并将细胞沉淀立即置于干冰上冷冻。 Halo-DBCO 的细胞检测方法包括培养表达 HaloTag 融合蛋白的细胞，并用浓度范围为 0.1 至 10 μM 的化合物处理细胞。细胞孵育 15-60 分钟以使 HaloTag 进行共价标记。标记的蛋白可通过荧光显微镜、流式细胞术或 SDS-PAGE 电泳进行可视化。该化合物的 DBCO 基团可用于进一步的点击化学标记。 |
| 动物实验 |
Halo-DBCO 是一种用于标记的化学试剂，因此不用于动物实验。用该化合物标记的 HaloTag 融合蛋白可在动物模型中评估其在各种应用中的潜力。典型的研究包括通过适当的途径将标记蛋白注射到动物体内。如果条件合适，DBCO 基团可用于体内点击化学标记。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种化学试剂，Halo-DBCO 尚未确定其药代动力学性质。该化合物用于体外蛋白质标记和生物偶联。其稳定性、溶解度和反应活性对于其在化学生物学中的应用至关重要。该化合物通常在低温下储存以供研究使用，不适用于治疗用途。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该化合物不适用于治疗用途，且缺乏已确定的毒性信息。处理该化学试剂时应遵守标准的实验室安全预防措施。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
总体而言，HaloTag模型系统提供了一种独特且无偏倚的方法，可直接在活体哺乳动物细胞及其各种亚细胞器内系统地评估生物正交标记策略。该方法使研究人员能够快速评估各种生物正交基团，以实现快速、高效且选择性的SPAAC和iEDDA偶联，从而进行活细胞成像。虽然SPAAC反应通常较慢，但研究人员仍然能够使用TAMRA荧光染料（用于BCN和DBCO）确定细胞内活细胞成像研究的条件。然而，在许多情况下，活细胞标记研究所需的高浓度荧光染料会因背景荧光积累而限制荧光染料的选择。令人惊讶的是，研究人员发现，当DBCO 1与HaloTag蛋白偶联时，其在活细胞不同亚细胞器中的SPAAC反应速度几乎与使用反应较慢的亲二烯体TCO和BCN的iEDDA反应速度一样快。反应速率的提高使得可以使用浓度更低的荧光团-叠氮化物报告分子，这表明该SPAAC反应可能适用于以DBCO为标记物的细胞内成像应用。当DBCO与报告分子连接时，研究人员观察到在SPAAC反应所需的高浓度下存在多种背景标记物，这限制了其在这些应用中的使用。[1]
Halo-DBCO是一种研究级化学品，用于点击化学和蛋白质标记应用。它并非已获批准的药物，也没有临床试验历史。该化合物是一种含DBCO的点击化学试剂，可用作配体与HaloTag反应。本产品仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C29H35CLN2O4
|
|---|---|
| 分子量 |
511.06
|
| 精确质量 |
510.2285
|
| 元素分析 |
C, 68.16; H, 6.90; Cl, 6.94; N, 5.48; O, 12.52
|
| CAS号 |
1808119-16-5
|
| PubChem CID |
156484476
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
3.8
|
| tPSA |
67.9Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
15
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
733
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C(NCCOCCOCCCCCCCl)CCC(N1C2=CC=CC=C2C#CC3=CC=CC=C3C1)=O
|
| InChi Key |
IPBMADSLMZUFQN-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H35ClN2O4/c30-17-7-1-2-8-19-35-21-22-36-20-18-31-28(33)15-16-29(34)32-23-26-11-4-3-9-24(26)13-14-25-10-5-6-12-27(25)32/h3-6,9-12H,1-2,7-8,15-23H2,(H,31,33)
|
| 化学名 |
4-(2-Azatricyclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(16),4,6,8,12,14-hexaen-10-yn-2-yl)-N-[2-[2-(6-chlorohexoxy)ethoxy]ethyl]-4-oxobutanamide
|
| 别名 |
Halo-DBCO; 1808119-16-5; 4-(2-azatricyclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(16),4,6,8,12,14-hexaen-10-yn-2-yl)-N-[2-[2-(6-chlorohexoxy)ethoxy]ethyl]-4-oxobutanamide; HaloTag DBCO Ligand; SCHEMBL23511160;
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9567 mL | 9.7836 mL | 19.5672 mL | |
| 5 mM | 0.3913 mL | 1.9567 mL | 3.9134 mL | |
| 10 mM | 0.1957 mL | 0.9784 mL | 1.9567 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
