| 规格 | 价格 | |
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| 1mg | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
CK2/casein kinase 2
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| 体外研究 (In Vitro) |
IQA[[5-氧代-5,6-二氢吲哚(1,2-a)喹唑啉-7-基]乙酸]是一种新型的ATP/GTP位点定向的CK2抑制剂(“酪蛋白激酶2”),CK2是一种多效性和组成型活性的蛋白激酶,其活性在转化细胞中异常高。IQA的K(i)值(0.17微M)低于迄今为止报道的其他CK2抑制剂的K(i)值。在100μM ATP存在下以10μM浓度进行测试,IQA在体外几乎抑制CK2活性,而它对44种蛋白激酶和磷酸肌醇3-激酶无效或弱有效。相比之下,其他CK2抑制剂,尤其是芹菜素和槲皮素,更为混杂。IQA的体内功效已经通过使用IQA处理Jurkat细胞以剂量依赖性方式抑制内源性CK2的事实来评估。IQA已与玉米CK2α共结晶,其与人类同源物的同源性>70%,并以1.68A(1A=0.1nm)的分辨率测定了复合物的结构。抑制剂位于ATP嘌呤部分占据的同一平面上,其更疏水的一侧面向铰链区。对相互作用的主要贡献是疏水力和非极性相互作用,涉及抑制剂的芳香部分和ATP结合口袋周围的疏水残基,特别是V53(Val53)、I66、M163和I174的侧链。因此,与野生型相比,其中V66(玉米CK2αI66的同源物)或I174被丙氨酸取代的人CK2α突变体对IQA抑制的敏感性显著降低。这些结果为破解CK2在活细胞中的神秘作用提供了新的工具,并可能为开发依赖CK2活性的药物铺平道路[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
IQA的体内疗效是通过使用IQA处理Jurkat细胞以剂量依赖性方式抑制内源性CK2的事实来评估的[2]。
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| 酶活实验 |
蛋白激酶的来源和纯化[2]
从大鼠肝脏中纯化天然CK1和CK2。G-CK(Golgi CK)是a.M.Brunati博士(意大利帕多瓦帕多瓦大学)赠送的礼物,从大鼠哺乳期乳腺中纯化而成。从大鼠脾脏中纯化蛋白酪氨酸激酶Lyn、c-Fgr和Syk(也称为TPK-IIB)。人重组CK2的α和β亚基在大肠杆菌中表达,并如前所述重组和纯化全酶。CK2α突变体V66A通过使用寡核苷酸5-AAAAA GTTGCTGTTAAAAT-3中描述的方法获得。使用QuikChange定点突变试剂盒获得S51G和I174A突变体。每个突变体使用两个合成寡核苷酸引物产生,每个引物与插入pT7-7载体中的人αcDNA的相反链互补,即分别用于S51G和I174A的5-GGCCGAGGTAAATACGGAAGTATTGAGCC-3和5-GCACAGAAAGCTACGACTAGCAGACTGGTTTGGC-3。通过测序确认突变体,并将其用于转化有能力的大肠杆菌BL21(DE3)细胞。如所述进行αV66A、αS51G和αI174A的表达和纯化。用含有50%(v/v)甘油的25mM Tris/HCl(pH 7.5)透析催化α亚基,并将其储存在−20◦C.酿酒酵母piD261由S.Facchin博士提供 磷酸化实验[2] 在每次孵育中,所有蛋白激酶活性都与时间和酶浓度呈线性关系。CK2、CK1、G-CK、piD261和酪氨酸激酶Lyn、c-Fgr和Syk的磷酸化条件和掺入的磷酸盐的评估如[20]中所述。所有其他特异性测定均使用自动多通道移液管系统在室温下进行(25◦C) 总测定体积为25µl。详细地说,向含有0.5µl化合物、DMSO对照(不含抑制剂)或酸空白的平板中,加入15µl缓冲液中含有酶和肽/蛋白质底物的酶混合物。在反应开始前,通过加入10µl ATP(所有酶的最终浓度为100µM),将化合物在酶和肽/蛋白质底物的存在下预孵育5分钟。在终止前,在室温下加入5µl正磷酸进行40分钟的测定。混合后,将10µl反应混合物点在P30过滤垫上,然后在磷酸中洗涤。对过滤器进行1×3分钟的洗涤,然后进行3×8分钟的洗涤。 |
| 细胞实验 |
将人白血病Jurkat T细胞系维持在RPMI 1640中,在含有5%CO2的气氛中补充10%(v/v)胎牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100µg/ml链霉素。在处理之前,将细胞洗涤,以约106个细胞/ml的密度重悬于含有1%胎牛血清的培养基中,然后在37◦如图图例所示,在不同时间段内,以指示浓度的化合物存在。对照细胞用等量的溶剂处理。孵育结束时,通过加入冰冷的低渗透缓冲液对细胞进行离心、洗涤和裂解,该缓冲液由10mM Hepes(pH 7.9)、10mM KCl、0.1mM EDTA、0.1mM EGTA、1mM二硫苏糖醇、蛋白酶抑制剂混合物、10mM NaF和1µM冈田酸组成。如所述制备细胞溶胶和细胞核提取物。HS1(造血细胞特异性蛋白1)的免疫沉淀和使用所述的抗HS1总蛋白抗血清对胞质部分进行蛋白质印迹分析。用增加浓度的IQA预处理的细胞的裂解物中CK2活性的测定如前所述进行[2]。
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| 动物实验 |
目前已有多种针对蛋白激酶CK2的特异性强且效力较高的抑制剂,它们属于稠合多酚类化合物、四溴苯并咪唑/三唑衍生物和吲哚喹唑啉类化合物。这些抑制剂选择性的结构基础在于ATP/GTP结合位点附近的疏水性口袋。由于CK2中存在许多残基,其庞大的侧链通常被较小的侧链所取代,因此CK2的该疏水性口袋比大多数其他蛋白激酶的要小。因此,双取代的CK2突变体V66A,I174A对这类抑制剂的敏感性远低于CK2野生型。效力和选择性最高的抑制剂是 4,5,6,7-四溴-1H-苯并三唑,TBB(Ki = 0.4 μM),TBB 衍生物 2-二甲氨基-4,5,6,7-四溴-1H-苯并咪唑,DMAT(Ki = 0.040 μM),大黄素相关香豆素化合物 8-羟基-4-甲基-9-硝基苯并[g]色烯-2-酮,NBC(Ki = 0.22 μM)和吲哚喹唑啉衍生物([5-氧代-5,6-二氢吲哚-(1,2a)喹唑啉-7-基]乙酸),IQA(Ki = 0.17 μM)。这些抑制剂具有细胞渗透性,能够阻断活细胞中的 CK2 活性。它们已被成功用于单独或与对抑制不敏感的 CK2 突变体联合使用,以解析受 CK2 影响的信号通路并鉴定这种多效性激酶的内源性底物。通过阻断 CK2,这些抑制剂对多种肿瘤细胞系表现出显著的促凋亡作用,这一特性有望用于开发抗肿瘤药物[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Biochemical and three-dimensional-structural study of the specific inhibition of protein kinase CK2 by [5-oxo-5,6-dihydroindolo-(1,2-a)quinazolin-7-yl]acetic acid (IQA). Biochem J. 2003 Sep 15; 374(Pt 3): 639–646.
[2]. Development and exploitation of CK2 inhibitors. Mol Cell Biochem . 2005 Jun;274(1-2):69-76. doi: 10.1007/s11010-005-3079-z [3]. Liu J, et al. Cascade Reaction of Morita-Baylis-Hillman Acetates with 1,1-Enediamines or Heterocyclic Ketene Aminals: Synthesis of Highly Functionalized 2-Aminopyrroles. J Org Chem. 2019 Feb 15;84(4):1797-1807. |
| 分子式 |
C17H12N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
292.29
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| 精确质量 |
292.085
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| 元素分析 |
C, 69.86; H, 4.14; N, 9.58; O, 16.42
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| CAS号 |
391670-48-7
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| PubChem CID |
447682
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| 密度 |
1.46
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| LogP |
2.973
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| tPSA |
74.83
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
481
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC=C2C(=C1)C(=C3N2C4=CC=CC=C4C(=O)N3)CC(=O)O
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| InChi Key |
INSBKYCYLCEBOD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H12N2O3/c20-15(21)9-12-10-5-1-3-7-13(10)19-14-8-4-2-6-11(14)17(22)18-16(12)19/h1-8H,9H2,(H,18,22)(H,20,21)
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| 化学名 |
2-(5-oxo-5,6-dihydroindolo[1,2-a]quinazolin-7-yl)acetic acid
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| 别名 |
CGP 029482; CGP029482; CGP-029482
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. > 10 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4213 mL | 17.1063 mL | 34.2126 mL | |
| 5 mM | 0.6843 mL | 3.4213 mL | 6.8425 mL | |
| 10 mM | 0.3421 mL | 1.7106 mL | 3.4213 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。