| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
beta-lactamase[1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
化合物36（Ledaobactam etzadroxil（VNRX-7145））在不同物种的不同基质中几乎完全水解为5[Ledaobartam（VNRX-5236）]
为了制备一种前药，使其在吸收后能够完全生物转化为活性BLI，在体外评估了36在肠道S9、肝脏S9和CD-1小鼠、Sprague-Dawley大鼠、比格犬、食蟹猴和人类血浆中的代谢稳定性。[1]
在肠道S9中，除比格犬外，所有物种的36只都被快速切割，半衰期很短（表7）。在所有物种的肝S9中也观察到非常短的半衰期。在肠道S9或肝脏S9中加入或排除NADPH时，未观察到对36半衰期的影响，表明细胞色素P450酶在水解中不起作用。人血浆中的半衰期较短，约为11分钟，与狗（43.9分钟）和猴子（22.0分钟）的较长半衰期相比，更接近啮齿动物的半衰期。此外，5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]在所有物种的肠道S9、肝脏S9和血浆中显示出较长的半衰期（>120分钟）（数据未显示）。总体而言，在所有物种的所有测试基质中，36几乎完全水解为5。 化合物36（Ledaborbactam etzadroxil（VNRX-7145））在不同物种的肝细胞中仅产生一种代谢产物5[Ledaborbatam（VNRX-5236）] 进行了一项体外研究，以调查36在小鼠、大鼠、兔子、比格犬、食蟹猴和人类冷冻肝细胞中的生物转化。孵育后，检测到一种由36水解产生的代谢物。所有物种的新陈代谢都很广泛，剩下0-5%36。通过将观察到的代谢物准确质量与5的真实化学标准的观察到的准确质量进行比较，代谢物的结构被明确鉴定为5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]。在所有受试物种中均未检测到其他代谢物。 化合物36（Ledaborbactam etzadroxil（VNRX-7145））显示出对Caco-2单层的高渗透性[1] 为了深入了解36在人体中的吸收潜力，进行了Caco-2细胞通透性研究 36的表观渗透率（Papp）平均为9.22×10-6cm/s，这表明它在人体内具有很高的吸收潜力（表8）。活性BLI（5/[Ledaborbactam（VNRX-5236）]）表现出较差的吸收潜力，这进一步强调了口服前药方法的必要性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
当在小鼠、狗和猴子体内给药时（VNRX-7145），Ledaborbactam etzadroxil（5-10mg/kg）在不同物种之间表现出最一致的口服生物利用度（F=61-82%）[1]。Ledaborbactam etzadroxil在肠道S9中迅速裂解，除比格犬外，所有物种的半衰期都很短。人血浆的半衰期较短，约为11分钟，与啮齿动物的半衰期相当，而狗（43.9分钟）和猴子（22.0分钟）的半衰期更长[1]。Ledaborbactam etzadroxil与头孢噻啶联合口服，以在致命的小鼠败血症模型中证明体内疗效。12.9mg/kg的ED50值[1]
在致死性小鼠败血症模型中，通过给药5[莱达博巴坦（VNRX-5236）]（皮下）和36（Ledaobactam-etzadroxil（VNRX-7145），口服）头孢布滕（皮下和口服5[Ledabbatam（VNRX-5 236）]和36）证明了体内疗效。皮下注射头孢布滕/5[莱多巴坦（VNRX-5236）]和口服头孢布滕/36的比较表明，其活性相似，ED50（中位有效剂量）值分别为13.5和12.9mg/kg。此外，还探索了在更接近人类靶向cUTI适应症的UTI模型中证明体内疗效的能力。进行PK研究以指导cUTI疗效研究的给药方案选择。小鼠口服10 mg/kg和90 mg/kg的36，分别导致5[莱多巴坦（VNRX-5236）]的F=72%和F=38%。口服给药缺乏5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]的剂量比例，促使体内疗效研究转向皮下给药。一项PK研究使用皮下注射1.2、12和38 mg/kg的5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]显示AUC的剂量比例（分别为7.8、76和250 mg∗h/L）。这些结果将有助于在疗效研究中更好地控制5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]的暴露量[1]。 |
| 酶活实验 |
抑制试验方法。[1]
为了测定β-内酰胺酶的抑制水平，将化合物在pH 7.4的PBS中稀释，在96孔微量滴定板中得到100至0.00005µM的浓度。加入等体积的稀释酶原液，将平板在37℃下孵育15分钟。底物为：1）p99AmpC的硝基头孢和OXA-48；2） 头孢噻肟治疗SHV-5；3） 亚胺培南用于KPC-2。将底物以100µM的最终浓度分配到每个孔中。使用Biotek Powerwave XS2微孔板分光光度计，使用GEN5软件包，在486 nm（硝基头孢烯）、300 nm（亚胺培南）或260 nm（头孢噻肟）下监测底物的水解10分钟。将初始水解速率与对照孔（无抑制剂）中的水解速率进行比较，并计算每种抑制剂浓度的酶抑制百分比。使用GraFit 7版动力学软件包，根据β-内酰胺酶在486 nm处的残余活性计算出将底物初始水解速率降低50%所需的抑制剂浓度（IC50）。 代谢稳定性测定方法。[1] 将化合物（3µM）与人、食蟹猴、比格犬、SpragueDawley大鼠和CD-1小鼠的肠S9、肝S9和血浆在37℃下孵育2小时。此外，还包括和排除NADPH（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸），以检查细胞色素P450在水解中的作用。在整个潜伏期内采集了重复样本。蛋白质沉淀后，在40℃的氮气下将上清液浓缩至干。样品在300µL 0.1%甲酸水溶液中复溶，并通过超高效液相色谱/串联质谱（UPLC-MS/MS）进行分析。 |
| 细胞实验 |
不同物种代谢物分析方法。[1]
使用来自小鼠、大鼠、兔子、比格犬、食蟹猴和人类的冷冻保存肝细胞。将肝细胞悬浮液与2µM和20µM的36在37℃下孵育240分钟，一式三份。S5总孵育体积为1.0 mL，含1 x 106个细胞。同时进行与阳性对照维拉帕米（2µM）的孵育，以评估I期和II期代谢活动。采用反相色谱的UPLC-HR-MS/MS（高分辨率串联质谱）通过正负电离进行代谢物鉴定。通过使用提取的离子色谱图和分数质量过滤对全扫描数据进行分析，以确定相关成分与假阳性，从而鉴定试验化合物的推测代谢物。 Caco-2单层双向渗透性的方法。[1] 将5µM供试品在测定缓冲液中的溶液（Hanks平衡盐溶液，含有10 mM HEPES和15 mM葡萄糖，pH 7.4）加入Caco-2细胞单层的顶端侧（A-to-B）或基底外侧侧（B-to-A），并在37℃和5%CO2的加湿培养箱中孵育。在120分钟时从供体和受体室中取样，并通过LCMS/MS对36和5[Ledaborbactam（VNRX-5236）]进行检测。 抗菌药物敏感性试验方法。[1] 为了确定受试化合物增强抑制产生β-内酰胺酶的细菌菌株生长的能力，采用了经典的基于细胞的肉汤微量稀释MIC测定法。该测定在阳离子调节的Mueller Hinton肉汤中进行。细菌菌株在CAMHB中生长3-5小时。将受试化合物以两倍连续稀释的方式加入到96孔微量滴定板中，在CAMHB中以3倍的最终浓度范围32μg/mL至0.002μg/mL加入。以3倍于1μg/mL的最终静态浓度加入含头孢布烯S3的CAMHB覆盖物。用MIC读数滴定受试化合物，表明充分抑制β-内酰胺酶活性和保护β-内酰胺固有抗菌活性所需的供试品浓度。除了滴定测试化合物外，还测试了一组对照β-内酰胺酶抑制剂的MIC，以确保菌株在实验之间表现一致。加入试验化合物和抗生素后，按照CLSI肉汤微量稀释法接种平板，使最终细菌浓度为5 x 105 CFU/mL。接种后，在37°C的环境空气中孵育平板16-20小时。目视测定试验化合物的MIC。 |
| 动物实验 |
用于药代动力学筛选的口服生物利用度测定方法。[1]
\n将母体BLI溶解于DMSO中（最终制剂中浓度为5%），并用pH值约为5.0的醋酸钠/醋酸缓冲液配制，然后进行静脉注射（IV）。烷基酯和酰氧基酯也以类似方式溶解于DMSO中，并用pH值约为5.0的醋酸钠/醋酸缓冲液配制，其中含有0.5%的吐温80（聚山梨醇酯80），然后进行灌胃（PO）。初始药代动力学筛选的给药组包含三只大鼠。在比较化合物20和36的药代动力学时，给药组包含十只大鼠、三至四只小鼠、五至十只犬和五至十只猴。在给药后不同时间点采集血样，并使用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）分析母体化合物和酯类化合物的含量。口服生物利用度通过母体药物（PO）的 AUC0-t 除以母体药物（IV）的 AUC0-t 计算得出。\n \n小鼠口服生物利用度的测定方法。[1] \n化合物 5 [Ledaborbactam (VNRX-5236)] 的静脉给药制剂的制备方法为：先将其溶解于二甲基乙酰胺 (DMA) 中，然后用 CMC/Tween 80 稀释至浓度为 2.5 mg/mL [最终制剂为 5% DMA:95% (0.5%CMC/0.5% Tween 80)]。化合物 36 的口服给药制剂制备方法如下：先用二甲基乙酰胺 (DMA) 溶解，然后用丙二醇 (PG) 稀释，再用羧甲基纤维素钠/吐温 80 稀释，直至达到所需的浓度 1.25 mg/mL（10 mg/kg 剂量）和 11.25 mg/mL（90 mg/kg 剂量）[最终制剂为 5% DMA: 45% PG (0.5% CMC/0.5% Tween 80)]。化合物 5 通过尾静脉推注给药，化合物 36 通过金属灌胃针进行口服给药。静脉注射组每组 3 只小鼠，口服给药组每组 4 只小鼠。在给药后不同时间点采集血样，并用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析母体化合物和酯类化合物的含量。口服生物利用度通过母体化合物（口服）的 AUC0-t 除以母体化合物（静脉注射）的 AUC0-t 计算得出。 \n \n皮下注射后小鼠体内药代动力学测定方法。[1] \n化合物 5 [Ledaborbactam (VNRX-5236)] 配制于磷酸钠缓冲液（50 mM，pH 7）中，浓度范围为 0.3 至 3.5 mg/mL，具体浓度取决于预期剂量。根据研究小鼠群体的平均体重，通过必要的缓冲液稀释，最终浓度达到预期剂量 1.2、12 和 38 mg/kg。化合物 5 [Ledaborbactam (VNRX-5236)] 以皮下注射的方式给药，每个剂量组 0.1-0.2 mL，每组 6 只小鼠。在给药后不同时间点采集血样，分析母体药物和酯类药物，并采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定血浆药物浓度。\n \n小鼠尿路感染模型方法。[1] \n为建立上行性尿路感染模型，将5只雌性C3H/HeJ小鼠置于5%葡萄糖水中6天，然后经尿道感染约9 log10 CFU/只小鼠的大肠杆菌UNT167-1、UNT204-1和UNT057-1。小鼠用0.15 mL PBS配制的氯胺酮（40 mg/kg）和赛拉嗪（6 mg/kg）混合液进行腹腔注射麻醉。使用10倍放大倍率的解剖镜定位尿道口，插入锥形PE10导管，缓慢注入50 µL接种物。感染后第4天开始分别给予小鼠头孢布汀单药治疗（1-300 mg/kg）、头孢布汀联合化合物5 [雷达博巴坦 (VNRX-5236)] 1:1（1-300 mg/kg）以及阿莫西林-克拉维酸钾 2:1（10-300 mg/kg）治疗，每12小时皮下注射一次，持续3天。在治疗开始时，处死一组未治疗的对照组小鼠，以测量治疗开始时的细菌载量。感染后第7天，所有小鼠在末次给药后约18小时处死。收集肾脏和膀胱组织，置于无菌PBS缓冲液中，进行S6匀浆、稀释，并接种于培养皿中以测定细菌菌落形成单位（CFU）滴度。尿液经手工挤压后直接接种于培养皿中。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠、犬和猴中分别给予匹伐氧基（20）和3-戊酰氧基（36或雷达博巴坦乙唑醇(VNRX-7145)）前药后，36在不同物种中表现出最稳定的口服生物利用度（表6）。虽然20在大鼠中表现出极佳的口服生物利用度（F = 99%），但在其他三种受试物种中生物利用度则显著较低。此外，水解后释放匹伐酸酯（三甲基乙酸）的前药会生成匹伐酰肉碱，后者经尿液排出后会导致体内有限的肉碱池耗竭。虽然肉碱耗竭导致的潜在毒性取决于新戊酸酯的剂量/生成量，但化合物 36 没有这种风险，因此，基于这些数据以及其在不同物种中一致且高的口服生物利用度数据，被选为进一步开发的候选药物。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
革兰氏阴性菌的主要耐药机制之一是产生β-内酰胺酶。产β-内酰胺酶的多重耐药“超级细菌”的日益出现，导致急诊就诊和住院治疗费用不断增加，因为这些难治性细菌引起的感染需要肠外抗生素治疗。为了解决门诊治疗不足的问题，我们启动了一项迭代项目，结合了药物化学、生化测试、微生物学分析和口服药代动力学评估。首先，我们优化了多种较小、亲脂性更强的活性化合物，然后探索了其各种前药的口服生物利用度，最终获得了化合物36（VNRX-7145/VNRX-5236 依扎羟嗪），它是含硼酸的β-内酰胺酶抑制剂5（VNRX-5236）的前药。体外和体内研究表明，化合物 5 可恢复口服头孢菌素类抗生素头孢布烯对表达 Ambler A 类超广谱 β-内酰胺酶、A 类碳青霉烯酶、C 类头孢菌素酶和 D 类苯唑西林酶的肠杆菌科细菌的活性。[1]
我们从环状硼酸酯模板出发，发现了一系列高效的 Ambler A、C 和 D 类 β-内酰胺酶抑制剂，这些抑制剂能够恢复口服头孢菌素类抗生素头孢布烯对耐头孢布烯的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌（两种常见的引起临床感染的肠杆菌科细菌）的活性。合成这些活性 BLI 的前药，并比较其在大鼠体内的口服生物利用度，最终筛选出化合物 36。化合物 36 在大鼠、犬和猴体内均表现出优异的口服生物利用度。在多种动物模型中均证实，前药酯水解可释放活性BLI 5。化合物5在由产ESBL和KPC碳青霉烯酶的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌菌株引起的尿路感染小鼠模型中恢复了头孢布烯的活性。化合物36正在进行I期临床试验（ClinicalTrials.gov注册号：NCT04243863）。[1] |
| 分子式 |
C12H14BNO5
|
|---|---|
| 分子量 |
263.05
|
| 精确质量 |
263.096
|
| 元素分析 |
C, 54.79; H, 5.36; B, 4.11; N, 5.32; O, 30.41
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| CAS号 |
1842397-36-7
|
| 相关CAS号 |
1842397-36-7 (free);1842399-68-1 (etzadroxil);
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| PubChem CID |
138455079
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.579
|
| tPSA |
95.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
19
|
| 分子复杂度/Complexity |
364
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
O1B([C@H](CC2C=CC=C(C(=O)O)C1=2)NC(CC)=O)O
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| InChi Key |
QAGGLFCWUVSERJ-VIFPVBQESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C12H14BNO5/c1-2-10(15)14-9-6-7-4-3-5-8(12(16)17)11(7)19-13(9)18/h3-5,9,18H,2,6H2,1H3,(H,14,15)(H,16,17)/t9-/m0/s1
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| 化学名 |
(3R)-2-hydroxy-3-(propanoylamino)-3,4-dihydro-1,2-benzoxaborinine-8-carboxylic acid
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| 别名 |
Ledaborbactam; UNII-G2WGD69BLI; VNRX-7145 acid; 1842397-36-7; G2WGD69BLI; VNRX-5236; VNRX-7145 active metabolite; LEDABORBACTAM [INN];
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8016 mL | 19.0078 mL | 38.0156 mL | |
| 5 mM | 0.7603 mL | 3.8016 mL | 7.6031 mL | |
| 10 mM | 0.3802 mL | 1.9008 mL | 3.8016 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Antibacterial agent 166
LasB-IN-1
Ticarcillin monosodium
G0775
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