MurA-IN-4 中文名称: N-氯乙酰异六氢烟碱酸

别名: N-氯乙酰异六氢烟碱酸;1-(2-氯乙酰基)-4-哌啶羧酸

目录号: V53514 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

MurA-IN-4具有抗菌作用，是一种MurA抑制剂，可以抑制细菌细胞壁的合成。

MurA-IN-4 CAS号: 318280-69-2
产品类别: Bacterial

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器

产品描述

MurA-IN-4 具有抗菌作用，是一种 MurA 抑制剂，可以抑制细菌细胞壁的合成。
MurA-IN-4 是一种 MurA（UDP-N-乙酰氨基葡萄糖烯醇丙酮酰转移酶）小分子抑制剂，MurA 是细菌细胞壁合成中一种重要的酶。它是一种具有抗菌特性的研究化合物，用于抗菌剂的研究以及作为研究肽聚糖生物合成的工具。分子式：C8H12ClNO3；分子量：205.64。

生物活性&实验参考方法

靶点	MurA (UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase). MurA-IN-4 is a covalent inhibitor of MurA, an essential enzyme that catalyzes the first committed step in peptidoglycan biosynthesis: the transfer of enolpyruvate from phosphoenolpyruvate (PEP) to UDP-N-acetylglucosamine (UNAG). Inhibition of MurA disrupts bacterial cell wall synthesis, leading to bacterial cell death. The chloroacetamide warhead covalently binds to a cysteine residue in the active site.
体外研究 (In Vitro)	MurA-IN-4 通过抑制细菌细胞壁合成酶 MurA 发挥抗菌活性。它能抑制 MurA 酶的活性，并对多种细菌菌株，特别是表达 MurA 的菌株，表现出抗菌作用。虽然未提供具体的 IC50 值，但该化合物在生化试验中已证实对 MurA 具有强效抑制作用，并在细胞试验中也显示出抗菌活性。
体内研究 (In Vivo)	目前尚未有具体的体内活性数据报道。作为一种具有抗菌活性的MurA抑制剂，MurA-IN-4将在细菌感染动物模型中进行评估，例如小鼠大腿感染模型或腹膜炎模型。预计它能够降低感染组织中的细菌载量。
酶活实验	对于无细胞MurA抑制实验，将纯化的重组MurA（例如，来自大肠杆菌）与浓度递增的MurA-IN-4（0.1 nM-100 uM）在含有1 mM DTT、5 mM MgCl2和0.1% BSA的50 mM HEPES缓冲液（pH 7.5）中于25℃孵育10-30分钟。加入UDP-N-乙酰氨基葡萄糖（UNAG，50 uM）和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP，100 uM）启动反应。反应在37℃下进行30-60分钟，并加入0.5 M HCl终止反应。产物烯醇式丙酮酸-UNAG（EP-UNAG）可通过分光光度计或高效液相色谱法（HPLC）在232 nm处测定吸光度进行定量。 IC50值是通过绘制抑制率与抑制剂浓度的关系图来确定的。氯乙酰胺基团与活性位点中的半胱氨酸残基形成共价键，这可以通过质谱分析来证实。
细胞实验	体外抗菌活性测定中，标准菌株（例如大肠杆菌 ATCC 25922、金黄色葡萄球菌 ATCC 29213 或表达 MurA 的菌株）在 Mueller-Hinton 肉汤中过夜培养。将培养物稀释至 0.5 McFarland 标准浊度（约 10⁶ CFU/mL）。将 MurA-IN-4 在 96 孔板中用 Mueller-Hinton 肉汤进行系列稀释（0.1-100 ug/mL）。加入细菌，使最终接种量达到 5×10⁵ CFU/mL。将培养板置于 37℃ 培养 18-24 小时。最小抑菌浓度 (MIC) 定义为抑制可见细菌生长的最低浓度。对于时间-杀菌动力学研究，将用 1×、2× 和 4× MIC 浓度的 MurA-IN-4 处理的培养物分别在 0、2、4、6、12 和 24 小时取样，并通过平板计数法统计活菌落数。细菌细胞壁的完整性可通过测量胞质酶（例如乳酸脱氢酶）的泄漏或通过电子显微镜观察来评估。
动物实验	目前尚无具体的体内动物实验方案记录。评估 MurA 抑制剂的典型方案包括建立小鼠全身感染模型。将 6-8 周龄的雌性 BALB/c 小鼠腹腔注射致死剂量的大肠杆菌或金黄色葡萄球菌（约 5×10⁷ CFU/只），菌液悬浮于 10% 粘蛋白中。感染 1 小时后，通过静脉或腹腔注射给予 MurA-IN-4，剂量范围为 1-50 mg/kg。阳性对照组接受标准抗生素（例如环丙沙星或万古霉素）治疗。监测小鼠存活 7-14 天。或者，在嗜中性粒细胞减少的小鼠大腿感染模型中，通过腹腔注射环磷酰胺（150 mg/kg，分别在感染前 4 天和 1 天给药）使小鼠处于嗜中性粒细胞减少状态。将 10⁵-10⁶ CFU 的细菌注射到小鼠大腿。感染后 2 小时，皮下注射不同剂量（0.1-100 mg/kg）的 MurA-IN-4。24 小时后，处死小鼠，并匀浆大腿肌肉进行细菌菌落计数。疗效以与未治疗对照组相比的 log10 CFU/g 值降低表示。
药代性质 (ADME/PK)	目前尚未报道 MurA-IN-4 的药代动力学数据。该化合物为小分子，分子量为 205.64 g/mol，分子式为 C8H12ClNO3，可能具有中等的口服生物利用度。其 ADME（吸收、分布、代谢、排泄）特性尚未明确。氯乙酰胺基团提示其可能与血清蛋白发生共价结合，这可能会影响其药代动力学特征。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	目前尚未有具体的毒性数据报告。该化合物是一种带有氯乙酰胺基团的MurA抑制剂，具有潜在的烷基化作用，在高浓度下可能表现出遗传毒性或细胞毒性。尚未进行正式的毒理学评估（急性、亚慢性、遗传毒性）。处理该化合物时应采取标准的化学品安全防护措施（佩戴手套、护目镜、通风橱）。不建议用于人体。
参考文献	[1]. Grabrijan K, et al. Covalent inhibitors of bacterial peptidoglycan biosynthesis enzyme MurA with chloroacetamide warhead. Eur J Med Chem. 2022 Dec 5;243:114752.
其他信息	MurA-IN-4 又名 1-(2-氯乙酰基)哌啶-4-羧酸。其分子式为 C8H12ClNO3，分子量为 205.64。IUPAC 名称为 1-(2-氯乙酰基)哌啶-4-羧酸。该化合物含有一个氯乙酰胺基团，可与 MurA 活性位点中的半胱氨酸残基共价结合，从而不可逆地抑制该酶的活性。它是一种用于抗菌和抗感染研究的科研化学品，尚未获准用于临床或兽医用途。该化合物应以粉末形式储存于 -20℃，可稳定保存长达 3 年。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C8H12CLNO3
分子量	205.64
精确质量	205.051
CAS号	318280-69-2
PubChem CID	1991140
外观&性状	Typically exists as solid at room temperature
密度	1.349g/cm3
沸点	406.2ºC at 760 mmHg
熔点	109-111ºC
闪点	199.4ºC
折射率	1.526
LogP	0.486
tPSA	57.61
氢键供体(HBD)数目	1
氢键受体(HBA)数目	3
可旋转键数目(RBC)	2
重原子数目	13
分子复杂度/Complexity	211
定义原子立体中心数目	0
SMILES	C1CN(CCC1C(=O)O)C(=O)CCl
InChi Key	PEQVHRULPWCLOJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C8H12ClNO3/c9-5-7(11)10-3-1-6(2-4-10)8(12)13/h6H,1-5H2,(H,12,13)
化学名	1-(2-chloroacetyl)piperidine-4-carboxylic acid
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)	注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。注射用配方 (IP/IV/IM/SC等) 注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline) 生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。注射用配方 2:* DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More 注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。注射用配方 5:* 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline) 注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline) 注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline) 注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil) 注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 口服配方口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More 口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 口服配方 6: 做成粉末与食物混合注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

溶解度 (体内实验)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	4.8629 mL	24.3143 mL	48.6287 mL
	5 mM	0.9726 mL	4.8629 mL	9.7257 mL
	10 mM	0.4863 mL	2.4314 mL	4.8629 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。