| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
SARS-CoV PLpro
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC targets SARS-CoV PLpro (papain-like protease), a viral protease essential for SARS-CoV replication. PLpro is a cysteine protease that cleaves the viral polyprotein and also has deubiquitinating activity. As a substrate for PLpro, this peptide is used to measure PLpro enzymatic activity in biochemical assays. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）属于β冠状病毒属，可引起严重的呼吸系统疾病，伴有肺炎、多器官衰竭，最终导致死亡。冠状病毒能够突破物种屏障，迅速传播到新的宿主物种，并通过人际传播引发流行性疾病。尽管MERS-CoV对公共卫生构成严重威胁，但目前尚无疫苗或药物可用于治疗。MERS-CoV木瓜蛋白酶样蛋白酶（PLpro）是一种关键酶，在其复制过程中发挥重要作用。本研究采用蛋白酶抑制实验评估了阿霉素（DOX）对重组MERS-CoV PLpro的抑制活性。在DOX存在下，Z-RLRGG-AMC肽键水解荧光肽的IC50值为1.67 μM（30分钟）。随后，我们通过热位移分析（TSA）证实了阿霉素（DOX）与MERS-CoV PLpro的相互作用，DOX使ΔTm升高约20 °C，这清楚地表明MERS-CoV PL蛋白酶与DOX之间存在协同作用。我们利用分子对接技术和分子动力学（MD）模拟评估了DOX在MERS-CoV PLpro上的结合位点。结果表明，DOX结合于MERS-CoV PLpro催化结构域的拇指区域。MD模拟结果显示，MERS-CoV PLpro的BL2环具有柔性，此外还存在其他潜在残基，例如R231、R233和G276。药物重定位为快速检验不同疗法在治疗各种疾病方面的疗效提供了一个绝佳的机会。迄今为止，蛋白酶抑制剂已被证实对MERS-CoV有效，并且目前有许多候选药物正在进行临床试验以验证其疗效。我们的研究方向与此类似[1]。在无细胞生化系统中，Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC 可作为 SARS-CoV PLpro 的底物。PLpro 可切割 Gly-Gly-AMC 键，释放出荧光标记的 AMC 部分。荧光强度的增加与 PLpro 的活性成正比。该检测方法可用于筛选 PLpro 抑制剂并研究 PLpro 的酶学性质。
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| 体内研究 (In Vivo) |
该化合物本身不具有直接的细胞活性，因为它是一种肽底物而非生物活性分子。它用于细胞裂解液或生化分析中，以测量病毒感染细胞中的PLpro活性。可将该肽添加到表达PLpro的细胞的裂解液中，并通过测量AMC释放产生的荧光来量化PLpro活性。
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| 酶活实验 |
MERS-CoV PLpro抑制试验[1]
使用基于平板的平底黑色测试384测定了不同浓度和持续时间的DOX的IC50值。简而言之，水解的荧光肽Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly肽键7-氨基甲基香豆素（Z-RLRGG-AMC）显著增强了AMC组分的荧光，从而可以精确测量转化率。反应体系总体积为50 µL，包含以下成分：20 mM Tris缓冲液（pH 8.0）、30 µM Z-RLRGG-AMC和不同浓度的抑制剂（DOX）（1.84 pM–183.98 µM）。加入PLpro启动试验，使最终酶浓度达到60 nM。将微孔板轻轻摇晃 30 秒，然后在 Biotek HT 微孔板读数仪上记录肽释放 AMC 的荧光强度，持续 60 分钟（激发波长 γ = 360 nm；发射波长 γ = 460 nm；增益 = 40）。使用 Graphpad Prism 软件中的剂量-反应-抑制函数，通过抑制剂浓度与归一化反应方程计算 IC50 值。实验重复三次。阳性对照孔（代表 100% 抑制）包含 10 μg/mL DOX；阴性对照孔（代表零抑制）仅包含缓冲液。 热位移分析 (TSA)[1] 使用 Applied Biosystems™ PCR 仪，通过差示扫描荧光法 (DSF) 评估阿霉素与 MERS-CoV PLpro 蛋白的结合情况，具体方法如前所述。我们还测试了阿昔洛韦（一种已知的抗病毒药物）与 MERS-CoV PLpro 蛋白的相互作用，其作用机制与阿霉素类似。简而言之，以反应缓冲液作为对照，将MERS-CoV-PLpro蛋白稀释至终浓度为2 mol/L，然后在25 °C下用0.29–18.4 μM的DOX处理30分钟。使用SYPRO Orange荧光染料，以1 °C/分钟的升温速率将温度从25 °C升至95 °C，并记录荧光信号。熔解温度(Tm)采用TSA CRAFT软件测定，该软件稳健且对噪声不敏感（Lee et al., 2019）。TSA-CRAFT通过Boltzmann方程进行曲线拟合来确定熔解温度(Tm)。 Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC的无细胞检测方法是将肽底物与纯化的SARS-CoV PLpro酶在检测缓冲液中孵育。反应在 37°C 下孵育 30-60 分钟，并在适用于 AMC 的激发/发射波长（通常为 360/460 nm）下测量荧光强度。荧光强度随时间增加与 PLpro 活性成正比。该检测方法可用于测定 PLpro 的动力学参数或筛选抑制剂。 |
| 细胞实验 |
SDS-PAGE[1]
使用 BioRad Mini-protean 进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳：将蛋白质样品与含有 2X Laemmlli 缓冲液的缓冲液混合，总体积为 20 μL。样品在 95 °C 水浴中加热 5 分钟，然后立即置于冰上冷却，之后进行 SDS-PAGE 电泳。初始电压为 60 V，待蛋白质通过浓缩胶后，将电压提高至 100 V。电泳结束后，用考马斯亮蓝染色液对凝胶进行染色，然后用 50% H2O、10% 乙酸和 40% 甲醇的脱色液轻轻摇动脱色。使用凝胶成像系统拍摄并裁剪SDS-PAGE凝胶图像，并在Microsoft PowerPoint中进行编辑，无需任何颜色或对比度校正即可用于发表。 蛋白质印迹[1] 如前所述，使用单克隆His抗体进行蛋白质印迹实验，以确认N端6xHis标签的存在。将超声分离的全细胞蛋白（10 μL）与2× Laemmli染料混合，并在10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。电泳后，使用转印仪将蛋白转移至硝酸纤维素膜上，然后在室温下用Every Blot封闭缓冲液封闭10分钟。用TBST缓冲液洗涤膜5次，每次5分钟，然后在4℃下与一抗（poly-His抗体）孵育过夜。用TBST缓冲液连续洗涤5次，每次间隔5分钟后，将膜与二抗在室温下孵育2小时，然后用TBST缓冲液洗涤5次，每次5分钟。使用Luminata™ Western化学发光辣根过氧化物酶底物，随后使用凝胶成像系统扫描条带。 Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC的细胞检测方法包括制备表达PLpro的细胞或病毒感染细胞的细胞裂解液。将裂解液与肽底物孵育，并测量AMC释放产生的荧光。该检测方法可用于定量细胞中的PLpro活性，并评估PLpro抑制剂在细胞环境中的作用。 |
| 动物实验 |
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC 不用于动物实验，因为它是一种用于体外试验的肽底物。该化合物仅用于生化和细胞实验，以测定 PLpro 活性。它不用于治疗用途，也不用于动物药理学研究。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种肽底物，该化合物尚未确定其药代动力学性质。该化合物用于体外酶活性测定，不适用于全身给药。它可溶于DMSO，通常储存于-20°C。在开发检测方法时，应考虑该化合物在溶液中的稳定性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该化合物不适用于治疗用途，且缺乏已确定的毒性信息。处理该肽底物时应遵守标准的实验室安全预防措施。作为一种肽，它通常被认为毒性较低。该化合物仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Z-Arg-Leu-Arg-Gly-Gly-AMC 是一种用于蛋白酶活性研究的研究级肽底物。它并非已获批准的药物，也没有临床试验历史。该化合物是 SARS-CoV PLpro 的肽底物。水解后的荧光肽可用于精确测量蛋白酶活性。本产品仅供研究使用。
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| 分子式 |
C40H56N12O9
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|---|---|
| 分子量 |
848.947648048401
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| 精确质量 |
848.429
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| CAS号 |
167698-69-3
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| PubChem CID |
156612994
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
1056.1±75.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
592.5±37.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±0.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.646
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| LogP |
4.91
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| tPSA |
339Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
10
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
24
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| 重原子数目 |
61
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| 分子复杂度/Complexity |
1610
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C([C@H](CC(C)C)NC([C@H](CCC/N=C(\N)/N)NC(=O)OCC1C=CC=CC=1)=O)N[C@H](C(NCC(NCC(NC1C=CC2C(C)=CC(=O)OC=2C=1)=O)=O)=O)CCC/N=C(\N)/N
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| InChi Key |
BOVMHLIAYDDKAY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C40H56N12O9/c1-23(2)17-30(51-36(57)29(12-8-16-46-39(43)44)52-40(59)60-22-25-9-5-4-6-10-25)37(58)50-28(11-7-15-45-38(41)42)35(56)48-20-32(53)47-21-33(54)49-26-13-14-27-24(3)18-34(55)61-31(27)19-26/h4-6,9-10,13-14,18-19,23,28-30H,7-8,11-12,15-17,20-22H2,1-3H3,(H,47,53)(H,48,56)(H,49,54)(H,50,58)(H,51,57)(H,52,59)(H4,41,42,45)(H4,43,44,46)
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| 化学名 |
benzyl N-[5-(diaminomethylideneamino)-1-[[1-[[5-(diaminomethylideneamino)-1-[[2-[[2-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]carbamate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1779 mL | 5.8896 mL | 11.7793 mL | |
| 5 mM | 0.2356 mL | 1.1779 mL | 2.3559 mL | |
| 10 mM | 0.1178 mL | 0.5890 mL | 1.1779 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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