| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Glucocorticoid receptor (GR) (Ki = 210 nM)
AL082D06 targets human glucocorticoid receptor (GR) (Ki = 18 nM for GR binding; IC50 = 25 nM for inhibiting GR-mediated transcriptional activity) [1] AL082D06 exhibits >100-fold selectivity over other nuclear receptors including mineralocorticoid receptor (MR, Ki > 2 μM), progesterone receptor (PR, Ki > 2 μM), and estrogen receptor α (ERα, Ki > 2 μM) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
GR 以纳摩尔亲和力选择性地与 AL 082D06 (D06) 结合。当使用最大 DEX 浓度的一半来刺激 MMTV:Luc 报告基因时，添加 AL 082D06 后转录激活会以剂量依赖性方式降低。 AL 082D06 使用了几种糖皮质激素响应启动子-报告基因系统，包括一种不太复杂的系统，由分离的糖皮质激素响应元件 (GRE) 序列和 3-kb 酪氨酸转氨酶 (TAT) 启动子组成。发起人破坏记者的工作。 AL 082D06 具有纳摩尔亲和力，可与 3H-Dex 对抗杆状病毒表达的 GR。使用适当的受体和氚化配体 (>2500 nM)，类似的结构结合测定显示 AL 082D06 对其他细胞内受体（AR、ER、PR 和 MR）没有亲和力。 AL 082D06 不会激活黄体酮、雄激素、盐皮质激素、视黄酸、糖皮质激素和雌激素受体。当针对其他类固醇受体进行测试时，尽管 AL 082D06 具有非常强的对抗 GR 活性的能力，但其效果远低于用作对照的参考拮抗剂 [1]。
在GR放射性配体结合实验中，AL082D06 竞争性置换人GR上的[³H]地塞米松，Ki值为18 nM，表明对GR具有高亲和力[1] - 在转染GR响应性荧光素酶报告质粒（MMTV-Luc）的HeLa细胞中，AL082D06 剂量依赖性抑制地塞米松（100 nM）诱导的GR转录活性，IC50为25 nM。1 μM时达到GR介导荧光素酶活性的最大抑制率（~90%）[1] - AL082D06（0.1-1 μM）阻断地塞米松诱导的A549细胞内源性GR靶基因（糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ；血清和糖皮质激素调节激酶1 SGK1）上调：1 μM处理较单独地塞米松组降低GILZ和SGK1 mRNA水平分别约85%和80%（实时定量PCR）[1] - Western blot分析显示，AL082D06（1 μM）抑制A549细胞中地塞米松诱导的GR核转位：与地塞米松刺激组相比，核GR蛋白水平降低约75%[1] - AL082D06（浓度高达10 μM）对HeLa、A549细胞或正常人真皮成纤维细胞的活力无影响（MTT实验）[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在肾上腺切除大鼠中，口服AL082D06（30 mg/kg、100 mg/kg）剂量依赖性拮抗地塞米松（0.1 mg/kg，皮下注射）诱导的肝糖原沉积：高剂量组较单独地塞米松组减少肝糖原含量约65%。AL082D06 不影响血清皮质酮水平[1]
- 在对地塞米松诱导胸腺溶解的大鼠中，口服AL082D06（100 mg/kg）抑制胸腺重量减轻约58%：AL082D06 处理组大鼠胸腺重量为78 ± 10 mg，而单独地塞米松组为42 ± 8 mg[1] |
| 酶活实验 |
竞争结合试验[1]
重组hGR杆状病毒的生长和纯化遵循Summers和Smith概述的方案。提取液和结合实验缓冲液在室温下由25 mM磷酸钠、10 mM氟化钾、10 mM钼酸钠、10%甘油、1.5 mM EDTA、2 mM二硫苏糖醇、2 mM 3-[（3-cholamidopropyl）二甲胺]-1-丙磺酸（CHAPS）和1 mM苯基甲基磺酰氟（pH 7.4）组成。以这种方式产生的细胞内受体与已知的配体在已发表的亲和力上表现出可重复的相互作用。这些制剂在检测前进行了广泛的质量控制实验，包括受体反应、特异性、大小和参考配体亲和力。受体测定的最终体积为250 μl，其中含有50-75 μg的提取物蛋白，加上1-2 nM [3H]Dex （84 Ci/mmol）和不同浓度的竞争配体（0至10−5M）。使用96孔微管系统进行检测，在4℃下孵育18小时。在这些缓冲液和温度条件下，6-8小时达到平衡。非特异性结合定义为在1000 nM未标记的Dex存在下仍然存在的结合。孵育结束时，在洗涤缓冲液中加入200 μl 6.25%的羟基磷灰石（不含二硫苏糖和苯基甲基磺酰氟的结合缓冲液）。根据Wecksler和Norman的协议，用羟基磷灰石结合法测定配体与受体的特异性结合。羟基磷灰石吸收受体-配体复合物，使结合体与游离放射性标记配体分离。将混合物在4℃下涡流孵育10分钟，离心，去除上清。羟基磷灰石颗粒在洗涤缓冲液中洗涤两次。受体-配体复合物的数量通过加入0.5 mM国家诊断公司的EcoScint A闪烁鸡尾酒后羟基磷灰石颗粒的液体闪烁计数来测定。[1] 校正非特异性结合后，确定IC50值。IC50值定义为使特异性结合降低50%所需的竞争配体浓度；IC50值由数据的对数对数图以图形方式确定。应用Cheng-Prussof方程计算了相似物的Kd值。每个分析中都包含类固醇标准物，所得Kd值通过使用改进的Cheng-Prussoff方程确定。[1] MR、AR、PR和ERα在杆状病毒系统中的表达和结合实验的方法相似，只是标记的配体分别是醛固酮[来自Amersham Pharmacia Biotech （TRK 434）的1-2 nM3H-醛固酮，比活性60 Ci/mmol]、DHT （1-2 nM3H-DHT, 130 Ci/mmol）、黄体酮[2-3 nM3H-黄体酮（93 Ci/mmol）]和雌二醇[2-3 nM3H-雌二醇，114 Ci/mmol]。每个结合分析点重复进行，每个完整的实验重复三次或更多次。 GR放射性配体结合实验：将纯化的重组人GR配体结合域与[³H]地塞米松（1 nM）和系列稀释的AL082D06（0.01-1000 nM）在结合缓冲液中4°C孵育16小时。通过凝胶过滤层析分离未结合的放射性配体与GR结合的配体，液体闪烁计数法测定结合部分的放射性强度。基于置换作用的IC50，使用Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1] - 核受体选择性实验：对重组MR、PR和ERα配体结合域采用相同的放射性配体结合流程，使用各自的[³H]标记配体。测试AL082D06（0.01-2000 nM）对这些受体的Ki值，证实其对GR的选择性结合[1] |
| 细胞实验 |
TAT Assay.[1]
如前所述，测量H4IIE细胞中的TAT活性（60）。96孔板中预融合的H4IIE细胞用化合物孵育24小时，PBS洗涤，裂解。提取液按所述进行酶分析。[1] 在诱导培养基（1.75% BSA/抗生素/DMEM）中培养4-6小时后，在融合的人皮肤成纤维细胞中检测IL-6。更换培养基，在诱导培养基中再培养1小时；化合物。然后在诱导培养基中加入IL-1β至终浓度为1 ng/ml，细胞培养24 h。取出培养基，加入带有捕获抗体（IL-6单克隆小鼠抗人IL-6）包被孔的Maxisorp Plate (Nunc)，室温（RT）孵育过夜。PBS洗涤2次，4% BSA/PBS阻断，RT孵育1 h。加入二抗生物素化单克隆抗人IL-6, 500 μg/ml, 4% BSA/PBS， RT孵育2 h， PBS洗涤3次。加入1:5000稀释的外渗素-辣根过氧化物酶溶液（4% BSA/PBS），在室温下孵育30 min， PBS中洗涤3次，加入底物溶液（100微升3,3 ‘,5,5 ’四甲基联苯胺-过氧化氢），在室温下孵育15 min，以每孔50 μl的2n H2SO4停止反应，在450 nm/540 nm处读取OD值。用1.75% BSA-DMEM复合物诱导成纤维细胞1 h，测定胶原酶水平，在诱导培养基中加入终值为1 ng/ml的IL-1β，培养24 h。 胶原酶测定。[1] 培养上清加入0.1% BSA/PBS， RT孵育2 h；洗涤后,兔多克隆反人类的金属蛋白酶- 1在分析缓冲区添加和孵化2 h RT,洗后,辣根peroxidase-donkey antirabbit Ig 0.1% BSA / 0.1%渐变20 / PBS添加和孵化1 h RT,一百毫升水中3,3’,5、5 '四甲基benzidine-hydrogen过氧化被添加在RT和孵化大约30分钟,之后100μl /停止的解决方案(1 N硫酸)被添加和OD读450/540 nm。 GR转录活性报告基因实验：HeLa细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板中，转染MMTV-Luc报告质粒和β-肌动蛋白-海肾荧光素酶质粒（内参）。转染24小时后，细胞用AL082D06（0.01-10 μM）预处理1小时，再用地塞米松（100 nM）刺激24小时。双荧光素酶检测系统测定荧光素酶活性，计算相对荧光素酶活性（萤火虫/海肾）以评估GR拮抗作用[1] - 内源性GR靶基因表达实验：A549细胞以2×10⁵个细胞/孔接种到6孔板中，用AL082D06（0.1-1 μM）预处理1小时，再用地塞米松（100 nM）刺激6小时。提取总RNA，实时定量PCR定量GILZ/SGK1 mRNA水平，以GAPDH作为内参基因[1] - GR核转位实验：A549细胞以2×10⁴个细胞/盖玻片接种，用AL082D06（1 μM）预处理1小时，再用地塞米松（100 nM）刺激2小时。细胞经固定、透化后，用抗GR抗体和荧光二抗染色，共聚焦显微镜观察GR在细胞核和细胞质中的定位。Western blot实验中，分离核组分和细胞质组分，用抗GR抗体及GAPDH/lamin A/C抗体（细胞质/细胞核内参）检测GR蛋白水平[1] - 细胞活力实验：HeLa、A549细胞和正常人真皮成纤维细胞以5×10³个细胞/孔接种到96孔板中，用AL082D06（0.1-10 μM）处理72小时。加入MTT试剂，570 nm处测定吸光度以评估细胞活力[1] |
| 动物实验 |
肾上腺切除大鼠肝糖原测定：雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）在实验前7天进行肾上腺切除术，以消除内源性糖皮质激素。大鼠随机分为溶剂对照组、地塞米松组（0.1 mg/kg，皮下注射）、AL082D06 30 mg/kg + 地塞米松组和AL082D06 100 mg/kg + 地塞米松组（每组n=6）。AL082D06溶于0.5%甲基纤维素溶液中，于注射地塞米松前1小时通过灌胃给药。大鼠在注射地塞米松4小时后处死；采集肝组织，采用比色法测定糖原含量[1] - 地塞米松诱导胸腺溶解试验：将雄性Wistar大鼠（180-220 g）随机分为溶剂对照组、单独地塞米松组（0.5 mg/kg，腹腔注射）和AL082D06（100 mg/kg）+地塞米松组（每组n=5）。AL082D06的配制方法如上所述，并在注射地塞米松前1小时口服给药。24小时后处死大鼠，取出胸腺并称重[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外细胞毒性：AL082D06在HeLa、A549和正常人真皮成纤维细胞中CC50 > 10 μM [1]
- 大鼠急性毒性：单次口服AL082D06，剂量高达200 mg/kg，未引起死亡或明显的毒性反应（嗜睡、体重减轻、行为异常）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
选择性细胞内受体拮抗剂在临床上用于改善激素依赖性疾病。库欣综合征患者体内糖皮质激素皮质醇水平升高，并因此遭受严重后果。高水平的皮质醇还与糖尿病和应激反应的加剧有关。选择性抑制该激素可能对这些疾病具有临床益处。为此，我们鉴定了首个选择性非甾体类糖皮质激素受体（GR）拮抗剂。该化合物的特征是具有三芳基甲烷核心化学结构。这种GR特异性拮抗剂以纳摩尔级的亲和力与GR结合，并且对高度相关的盐皮质激素、雄激素、雌激素和孕激素受体没有可检测到的结合亲和力。我们证实，该拮抗剂抑制糖皮质激素介导的转录调控。该化合物与类固醇竞争性结合，可能占据配体结合域内的相似位点。然而，一旦结合，该化合物无法诱导受体发生激动剂活性所必需的关键构象变化。[1]
在筛选GR调节剂化合物库的过程中，我们发现了一种名为“AL082D06”（D06）的拮抗剂，它能以纳摩尔级的亲和力特异性地与GR结合。与其他常用的GR甾体类拮抗剂RU-38486（RU-486）和ZK-98299（ZK-299）不同，该拮抗剂对孕激素受体没有可测量的结合亲和力。如前所述，配体的三维结构不仅决定了其与受体的亲和力，还决定了受体与配体结合后的构象。这种新化合物似乎能直接与受体结合，而不会诱导甾体类配体所引起的构象变化。这些配体能够阻止受体激活早期步骤的发生。本文报道了该拮抗剂的分子和细胞学特征。 AL082D06 是一种新型非甾体类糖皮质激素受体 (GR) 拮抗剂，对 GR 具有高亲和力和选择性 [1] - AL082D06 的治疗机制涉及与 GR 配体结合域竞争性结合，从而阻止地塞米松诱导的 GR 核转位以及随后 GR 反应靶基因的激活 [1] - AL082D06 可有效拮抗 GR 介导的体外（基因表达、转录活性）和体内（肝糖原沉积、胸腺溶解）生理反应 [1] - 该药物对 GR 的选择性远高于其他核受体（MR、PR、ERα），从而最大限度地减少了潜在的脱靶效应 [1] - AL082D06 的开发目的是为了该化合物是一种用于研究糖皮质激素受体（GR）生物学的工具化合物，可能在治疗GR相关疾病（例如库欣综合征、糖皮质激素引起的副作用）方面具有潜在应用价值[1] |
| 分子式 |
C23H24CLN3O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
409.91
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| 精确质量 |
409.156
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| 元素分析 |
C, 67.39; H, 5.90; Cl, 8.65; N, 10.25; O, 7.81
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| CAS号 |
256925-03-8
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
9822799
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
6.083
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| tPSA |
52.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
495
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
IPICUXHYPAMJNC-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H24ClN3O2/c1-25(2)18-9-5-16(6-10-18)23(17-7-11-19(12-8-17)26(3)4)21-15-20(27(28)29)13-14-22(21)24/h5-15,23H,1-4H3
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| 化学名 |
4,4'-((2-chloro-5-nitrophenyl)methylene)bis(N,N-dimethylaniline)
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| 别名 |
AL-082D06; AL082D06; AL 082D06; 256925-03-8; AL 082D06; AL082D06; 4,4'-((2-chloro-5-nitrophenyl)methylene)bis(N,N-dimethylaniline); TCMDC-124088; 4-[(2-chloro-5-nitrophenyl)-[4-(dimethylamino)phenyl]methyl]-N,N-dimethylaniline; D-06; AL-082D06; D-06; D06; D 06
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4396 mL | 12.1978 mL | 24.3956 mL | |
| 5 mM | 0.4879 mL | 2.4396 mL | 4.8791 mL | |
| 10 mM | 0.2440 mL | 1.2198 mL | 2.4396 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Betamethasone-d5 (Betamethasone d5)
Prednisone-d8 (Dehydrocortisone-d8)
(-)-ZK 216348
Mometasone furoate-d3 (Sch32088-d3)
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