Angelylalkannin

Natural naphthoquinone

我们从Alkanna tinctoria（L.）Tausch的根中寻找抗人类结直肠癌癌症的活性化合物的研究导致分离出两种萘醌，alkannin（1）和angelylkannin（2）。用MTS法测定了两种化合物对人结肠癌细胞株HCT-116和SW-480的增殖抑制作用。使用流式细胞术测定细胞周期特征和细胞凋亡。两种化合物对癌症细胞均有明显的抑制作用。对于链烷宁（1）和天使基链烷素（2），HCT-116细胞的IC50值分别为2.38和4.76µM，而对于SW-480细胞，它们分别为4.53和7.03µM。还探讨了潜在的抗增殖机制。在1-10µM的浓度下，这两种化合物都将细胞周期阻滞在G1期并诱导细胞凋亡[1]。

细胞增殖分析[1]
使用MTS测定法测定alkannin（1）和Angelylalkannin（2）对结直肠癌癌症细胞增殖的影响。将癌症细胞以1×104细胞/孔的密度接种到96孔板中。接种24小时后，用不同浓度的链烷宁（1）或Angelylalkannin（2）处理细胞。然后将本研究的数据与我们之前的报告进行比较，在相同的实验条件下使用5-FU作为阳性对照。所有实验均一式三份。在样品暴露期结束时，丢弃每个孔的培养基，加入100µL新鲜培养基和20µL CellTiter 96水溶液。将培养皿放回培养箱，在37°C的加湿气氛中放置1-4小时。然后，将每个孔中的60µL培养基转移到ELISA 96孔板上，在490 nm处测量甲赞产物的吸光度。通过用含有与Cell Titer 96水溶液混合但没有细胞的培养基的孔在490nm处测量吸光度来记录空白对照。结果以对照百分比表示（车辆设置为100%）。

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细胞周期分析[1]
用PI/RNase染色后，通过流式细胞术测定细胞周期谱，并比较链烷素（1）和Angelylalkannin2）的测定数据。将HCT-116细胞接种在24孔组织培养板中。第二天，更换培养基，用不同浓度的链烷宁（1）或Angelylalkannin（2）处理细胞。细胞在收获前孵育48小时。将细胞用80%乙醇轻轻固定，然后放入冰箱2小时。然后在冰浴中用0.25%Triton X-100处理5分钟。将细胞重新悬浮在30µL含有40µg/mL碘化丙啶和0.1 mg/mL RNase的磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。细胞在室温下在暗室中孵育20分钟，然后用FACScan流式细胞仪和FlowJo软件进行细胞周期分析。对于每次测量，至少计数10000个细胞。

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凋亡分析[1]
将HCT-116细胞接种在24孔组织培养板中。24小时后，更换培养基，加入链烷宁（1）或Angelylalkannin（2）。处理48小时后，收集悬浮在培养基中的细胞。用0.05%胰蛋白酶分离贴壁细胞。然后加入含有10%FBS（和漂浮细胞）的培养基以灭活胰蛋白酶。当完成温和的移液后，将细胞在1500g下离心5分钟。去除上清液，根据制造商的说明用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（FITC）和碘化丙啶（PI）对细胞进行染色。未经处理的细胞用作双重染色的对照。染色后立即用FACScan流式细胞仪分析细胞。对于每次测量，至少计数20000个细胞。

[1]. Naphthoquinone Components from Alkanna tinctoria (L.) Tausch Show Significant Antiproliferative Effects on Human Colorectal Cancer Cells. Phytother Res. 2013 Jan;27(1):66-70

Angelylalkannin has been reported in Alkanna hirsutissima with data available.

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Alkannin (1) and angelylalkannin (2) are principle components of the red pigments from the roots of A. tinctoria along with some minor derivatives reported to date. Previous studies have shown that alkannin derivatives possess antiproliferative effects on several cancer cell lines, e.g. K562, GLC-82, CNE2, and Bel-7402 (Wu et al., 2005; Deng, 2010; Bogurcu et al., 2011). Recently, there have been reports on molecular mechanisms of their cytotoxic actions regarding apoptosis induction in K562 leukemia, GLC-82 adenocarcinoma, and Hep3B hepatocarcinoma cell lines, respectively (Deng, 2010; Bogurcu et al., 2011). The present study was the first to evaluate the therapeutic potential of the components from A. tinctoria against the human colorectal cancer. In summary, two naphthoquinone compounds, namely alkannin (1) and angelylalkannin (2), were isolated and identified from the root of A. tinctoria. Both of these compounds presented significant inhibitory effects on the proliferation of the human colon cancer cell lines HCT-116 and SW-480. A cell cycle assay showed that they arrested the cell cycle at the G1 phase. They also showed apoptotic induction activity. Thus, the observed anticancer activities of these two compounds were related to cell cycle arrest and induction of apoptosis. These results provide promising information for the potential use of A. tinctoria, as well as some of the isolated compounds, in the treatment of colorectal cancer. [1]

C21H22O6

370.396

370.141

C, 68.10; H, 5.99; O, 25.92

69175-72-0

71587240

Typically exists as solid at room temperature

4.7

101

2

6

6

27

710

1

C/C=C(/C)\C(=O)O[C@@H](CC=C(C)C)C1=CC(=O)C2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O

ZGQONWTUIANWFM-AVHYGJPMSA-N

InChI=1S/C21H22O6/c1-5-12(4)21(26)27-17(9-6-11(2)3)13-10-16(24)18-14(22)7-8-15(23)19(18)20(13)25/h5-8,10,17,22-23H,9H2,1-4H3/b12-5-/t17-/m0/s1

[(1S)-1-(5,8-dihydroxy-1,4-dioxonaphthalen-2-yl)-4-methylpent-3-enyl] (Z)-2-methylbut-2-enoate

Angelylalkannin; UNII-AD71CY9O13; AD71CY9O13; Alkannin angelate; 69175-72-0; DTXSID90219220; [(1S)-1-(5,8-dihydroxy-1,4-dioxonaphthalen-2-yl)-4-methylpent-3-enyl] (Z)-2-methylbut-2-enoate; 2-BUTENOIC ACID, 2-METHYL-, (1S)-1-(1,4-DIHYDRO-5,8-DIHYDROXY-1,4-DIOXO-2-NAPHTHALENYL)-4-METHYL-3-PENTEN-1-YL ESTER, (2Z)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。