Aphidicolin   中文名称: 阿非科林

DNA polymerase alpha/delta; natural antiviral

Aphididicolin（0.5 μM、5 μM；0-5 d）对正常人胚胎细胞、HeLa、H9、A549 和 Caco-2 细胞系表现出适度的细胞毒性，但选择性杀死神经母细胞瘤细胞 [4]。 Aphidicolin，0.4 μg/mL，可在 3 天内停止 G2 期的细胞周期进展 [5]。 Aphidicolin（1 μM；24 小时）在 100 nM–10 μM 浓度下会导致 AtT-20 细胞凋亡，并通过 p53-GADD45β 途径减少细胞增殖 [6]。 Aphidicolin（10 μM；0–6 小时）可减少 Akt 磷酸化，（100 nM–10 μM；24 小时）可提高 GADD45β 的 mRNA 水平，GADD45β 是假定的 p53 下游靶点和应激反应基因，可导致生长停滞和 DNA 损伤。 6]。水痘带状疱疹病毒 (VZV) 可被 aphidicolin (10 μM；0–6 h) 抑制，细胞毒性较低，EC50 为 0.5–0.6 μM [7]。

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Aphidicolin是一种新型结构的抗生素，由头孢霉产生。它是细胞脱氧核糖核酸合成的强效抑制剂，在组织培养和兔眼中也能强烈抑制单纯疱疹病毒的生长。Aphidicolin对碘脱氧尿苷耐药疱疹病毒具有活性，其本身不易诱导疱疹病毒耐药菌株的形成。[2]

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我们研究了DNA聚合酶α和δ抑制剂阿哌啶对阿糖核苷诱导人早幼粒细胞白血病细胞系HL-60凋亡的影响。用阿哌啶（2微M）预处理HL-60细胞，在4小时的孵育过程中，显著增加了1-β-D阿拉伯呋喃糖胞嘧啶（ara-C）诱导的形态学凋亡细胞的数量。这与二苯胺或琼脂糖凝胶电泳定量测定的DNA断裂现象一致。药物暴露后第3天细胞生长的抑制与凋亡程度相关：在其他人类髓系白血病细胞系U937和KG-1中也观察到了阿片可林和ara-C之间的这种协同相互作用。此外，阿哌啶可增强9-β-D阿糖基呋喃腺嘌呤或9-β-D阿拉伯糖基呋喃鸟嘌呤对细胞凋亡的诱导作用。[3]

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Aphidicolin是一种四环二萜抗生素，已知通过与DNA聚合酶α的可逆结合抑制真核细胞的生长，而对大多数常见人类细胞系的细胞活力没有显著影响。我们观察到，浓度为5 x 10（-7）M的蚜虫灵杀死了四种人类神经母细胞瘤细胞系的所有细胞。相比之下，正常人胚胎细胞和包括HeLa、H9、A549和Caco-2在内的人连续细胞系的存活率仅受到阿哌啶的中度影响。此外，神经母细胞瘤细胞在与正常胚胎细胞共培养的5 x 10（-7）M阿哌啶处理后被杀死，正常胚胎细胞在去除阿哌啶后继续增殖。这些结果表明，阿哌啶提供了一种在体外选择性杀死神经母细胞瘤细胞的药物。[4]

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库欣病主要是由垂体促肾上腺皮质激素腺瘤引起的，该腺瘤自主分泌促肾上腺皮质素（ACTH）。ACTH的产生可能与肿瘤细胞增殖有关；然而，在促肾上腺皮质激素肿瘤细胞中，细胞周期进程对ACTH产生和细胞增殖的影响知之甚少。一种DNA聚合酶抑制剂，阿哌啶，在S期入口处阻止细胞并阻断细胞周期；阿哌啶还可诱导肿瘤细胞凋亡。在本研究中，我们测定了阿哌啶治疗后AtT-20促肾上腺皮质激素肿瘤细胞的ACTH产生和细胞增殖。Aphidicolin降低了AtT-20细胞中的前皮黑皮质素mRNA水平以及这些细胞培养基中的促肾上腺皮质激素水平。Aphidicolin还降低了AtT-20细胞的增殖并诱导其凋亡。荧光激活细胞分选分析显示，该试剂增加了G0/G1期细胞的百分比，减少了S期细胞。Aphidicolin降低了环磷酸腺苷反应元件结合蛋白和Akt的磷酸化。Aphidicolin增加了肿瘤蛋白27（p27）和53（p53）的水平，同时降低了细胞周期蛋白E的水平。Aphidicolin还增加了应激反应基因生长停滞和DNA损伤诱导型45β（GADD45β）的mRNA水平，这是p53的假定下游靶点。p53基因敲除增加了GADD45βmRNA水平。GADD45β敲低抑制了细胞增殖的减少。因此，阿哌啶通过p53-GADD45β途径抑制AtT-20细胞的增殖。[5]

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为了阐明阿片可林的体内靶点，通过流动细胞荧光法检查了正常人二倍体细胞与该药物积聚的细胞周期阶段。在药物剂量下，超过80%的细胞通过S期移动并在G2期积聚，在该剂量下细胞的生长完全受到抑制，但没有明显的细胞死亡。另一方面，在较高剂量下，细胞通过第一次进入早期S期发生分离。显然，蚜虫灵的体内作用比简单抑制DNA合成要复杂得多。[6]

Aphidicolin 甘氨酸盐（AG；NSC 303812）是一种溶解度更大的试剂，用于制备 Aphidicolin。 Aphidicolin Ganciate（100 mg/kg；腹腔注射；每 3 小时一次；9 天）作为抗肿瘤药物，可将植入 B16 黑色素瘤和 M5076 肉瘤的小鼠的生存期延长高达 75% [8]。

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Aphidicolin是一种DNA聚合酶α和δ的抑制剂，在体外对肿瘤细胞具有细胞毒性。阿哌啶的低溶解度导致了阿哌啶甘氨酸酯（AG；NSC 303812）的开发，这是一种目前处于早期临床试验阶段的水溶性酯。在一系列可移植的小鼠肿瘤体内研究了AG的抗肿瘤活性。该药物显示出对腹膜内植入的B16黑色素瘤的活性，在第1-9天每3小时腹膜内注射三剂后，寿命最大延长75%。涉及在第1-9天每天单次注射和在第1、5和9天每天多次注射的治疗方案效果较差，表明这种抗肿瘤活性是依赖于时间表的。同样，与第1-9天（寿命延长36%）或第1、5、9和13天（无活性）单次注射相比，在第1-8天每天注射三次（寿命延长57%）对腹膜内M5076肉瘤的活性更高。对皮下注射M5076肉瘤模型的进一步计划研究表明，7天的输注优于24小时的输注和每天三次推注的7天疗程。假设DNA聚合酶抑制是这种抗肿瘤活性的基础，通过测量[3H]胸苷（20微居里，静脉注射）掺入脾脏和空肠的DNA，研究了BALB/c x DBA/2 F1小鼠DNA合成的抑制作用。AG给药后2小时，DNA合成的抑制呈剂量依赖性（中位抑制剂量，两种组织均为60mg/kg），300mg/kg时抑制率>99%。抑制起效迅速；AG（100mg/kg i.p.）在30分钟时对两种组织产生了最大（>98%）的抑制作用。肠道在16小时内恢复；脾脏恢复延迟至24小时，随后在48小时出现反弹合并（203%）。对肿瘤细胞（B16黑色素瘤和P388白血病）和正常空肠中胸苷掺入的抑制作用进行比较后发现，这些组织的抑制程度或恢复速度没有显著差异。DNA合成抑制的快速恢复支持在临床试验中使用延长的输注时间表，但缺乏对肿瘤细胞选择性的证据表明，AG作为单一药物的治疗价值可能有限。因此，我们在顺铂难治性人类癌症的体内模型中评估了AG与顺铂的组合[8]。

细胞毒性测定 [4]
细胞类型： NB
细胞类型： UKF-NB-1/2/3 和 IMR-32
测试浓度：0.5 μM、5 μM
孵育时间：1、2、3、4、5 天
实验结果：产生细胞 裂解发生前细胞过程的增大和伸长。

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细胞周期分析 [5]
细胞类型： 正常人二倍体细胞
测试浓度： 0.4 μg/mL
孵育时间：3天或7天
实验结果：80%以上的细胞进入S期并积累在G2期。完全抑制细胞生长而不引起明显的细胞死亡。

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蛋白质印迹分析[6]
细胞类型： AtT-20 细胞 垂体促肾上腺皮质激素肿瘤细胞
测试浓度： 10 µM
孵育时间：0 分钟、5 分钟、30 分钟、2 小时、6 小时、24 小时
实验结果：AtT-20 培养基 Akt 磷酸化被抑制以时间依赖性方式在 5 分钟至 2 小时内进入细胞。 p27 蛋白水平在 30 分钟至 6 小时之间增加，p53 蛋白水平在 24 小时显着增加。

动物/疾病模型：小鼠M5076肉瘤皮下模型或B16黑色素瘤腹腔模型[8]
剂量：60 mg/kg、100 mg/kg、300 mg/kg
给药途径：腹腔注射；每3小时一次；持续9天
实验结果：显著抑制肿瘤生长。

[1]. Involvement of DNA polymerase delta in DNA repair synthesis in human fibroblasts at late times after ultraviolet irradiation. Biochemistry. 1988 Aug 23;27(17):6379-83.

[2]. Antiviral effects of aphidicolin, a new antibiotic produced by Cephalosporium aphidicola. Antimicrob Agents Chemother. 1973 Sep;4(3):294-8.

[3]. Aphidicolin potentiates apoptosis induced by arabinosyl nucleosides in human myeloid leukemiacell lines. Biochem Pharmacol. 1993 Dec 3;46(11):1909-16.

[4]. Aphidicolin selectively kills neuroblastoma cells in vitro. Cancer Lett. 1992 Dec 24;67(2-3):199-206.

[5]. Aphidicolin inhibits cell proliferation via the p53-GADD45β pathway in AtT-20 cells. Endocr J. 2015;62(7):645-54.

[6]. Fukuda M, Ohashi M. Aphidicolin inhibits cell growth by accumulation of G2 cells. Cell Biol Int Rep. 1983 Aug;7(8):579-85.

[7]. Compounds that target host cell proteins prevent varicella-zoster virus replication in culture, ex vivo, and in SCID-Hu mice. Antiviral Res. 2010 Jun;86(3):276-85.

[8]. Antitumor activity and biochemical effects of aphidicolin glycinate (NSC 303812) alone and in combination with cisplatin in vivo. Cancer Res. 1994 Feb 1;54(3):724-9.

蚜霉素是一种四环二萜类化合物，其结构为十四氢-8,11a-亚甲基环庚并[a]萘，在4位和9位分别连接两个羟甲基取代基，在4位和11b位分别连接两个甲基取代基，在3位和9位分别连接两个羟基取代基。蚜霉素是一种具有抗病毒和抗有丝分裂活性的抗生素。它是一种可逆的真核生物核DNA复制抑制剂。蚜霉素可作为抗菌剂、抗病毒药物、抗肿瘤药物、EC 2.7.7.7（DNA指导的DNA聚合酶）抑制剂、DNA合成抑制剂、细胞凋亡诱导剂、真菌代谢产物、曲霉代谢产物和抗有丝分裂剂发挥作用。蚜霉素是蚜虫头孢霉（Cephalosporium aphidicola）的抗有丝分裂和抗病毒代谢产物。它抑制DNA聚合酶α并阻断DNA复制。
据报道，在米黑孢霉（Nigrospora oryzae）、布氏格孢霉（Pleospora bjoerlingii）和其他有相关数据的生物体中均发现了蚜霉素。
蚜霉素是一种由蚜头孢霉（Cephalosporium aphidicola）和其他真菌产生的抗病毒抗生素。它通过选择性抑制DNA聚合酶II或病毒诱导的DNA聚合酶的细胞复制，抑制真核细胞和某些动物病毒的生长。该药物可用于控制癌症、银屑病或其他皮炎患者的过度细胞增殖，且对非增殖细胞几乎没有或完全没有不良反应。

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蚜霉素是一种由蚜头孢霉产生的新型结构的抗生素。它是细胞脱氧核糖核酸合成的强效抑制剂，并且还能强烈抑制单纯疱疹病毒在组织培养和兔眼中的生长。阿菲迪霉素对碘脱氧尿苷耐药的疱疹病毒有效，且其本身不易诱导疱疹病毒产生耐药株。[2]我们研究了DNA聚合酶α和δ抑制剂阿菲迪霉素对阿拉伯糖核苷诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60凋亡的影响。用阿菲迪霉素（2 μM）预处理HL-60细胞后，在4小时孵育期间，1-β-D-阿拉伯呋喃糖胞嘧啶（ara-C）诱导的形态学凋亡细胞数量显著增加。这与二苯胺或琼脂糖凝胶电泳定量测定的DNA片段化现象相一致。药物暴露后第3天细胞生长的抑制与细胞凋亡程度相关：在其他人类髓系白血病细胞系U937和KG-1中也观察到了蚜霉素和阿糖胞苷之间的这种协同作用。此外，蚜霉素可增强9β-D阿拉伯呋喃糖腺嘌呤或9β-D阿拉伯呋喃糖鸟嘌呤诱导的细胞凋亡。[3]蚜霉素是一种四环二萜类抗生素，已知其通过与DNA聚合酶α可逆结合来抑制真核细胞的生长，且对大多数常见人类细胞系的细胞活力无显著影响。我们观察到，浓度为5×10⁻⁷ M的蚜霉素可杀死四种人类神经母细胞瘤细胞系的所有细胞。相比之下，蚜霉素对正常人胚胎细胞和包括HeLa、H9、A549和Caco-2在内的人类连续细胞系的活力影响甚微。此外，在与正常胚胎细胞共培养的培养基中，用5×10⁻⁷ M蚜霉素处理后，神经母细胞瘤细胞被杀死，而去除蚜霉素后，正常胚胎细胞仍能继续增殖。这些结果表明，蚜霉素是一种体外选择性杀伤神经母细胞瘤细胞的药物。[4]库欣病主要由垂体促肾上腺皮质激素腺瘤引起，这些腺瘤自主分泌促肾上腺皮质激素（ACTH）。ACTH的产生可能与肿瘤细胞增殖有关；然而，细胞周期进程对促肾上腺皮质激素腺瘤细胞中ACTH产生和细胞增殖的影响尚不清楚。DNA聚合酶抑制剂蚜霉素可使细胞停滞在S期入口处并阻滞细胞周期；蚜霉素还能诱导肿瘤细胞凋亡。在本研究中，我们测定了蚜霉素处理后AtT-20促肾上腺皮质激素瘤细胞的促肾上腺皮质激素（ACTH）生成和细胞增殖情况。蚜霉素降低了AtT-20细胞中促阿黑皮素原（POMC）的mRNA水平以及这些细胞培养基中ACTH的水平。蚜霉素还抑制了AtT-20细胞的增殖并诱导其凋亡。流式细胞术分析显示，蚜霉素增加了G0/G1期细胞的比例，并降低了S期细胞的比例。蚜霉素降低了环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（cAMP）和Akt的磷酸化水平。蚜霉素增加了肿瘤蛋白27（p27）和53（p53）的水平，同时降低了细胞周期蛋白E（cyclin E）的水平。蚜霉素还增加了应激反应基因生长停滞和DNA损伤诱导蛋白45β（GADD45β）的mRNA水平，GADD45β是p53的潜在下游靶点。 p53 敲低导致 GADD45β mRNA 水平升高。GADD45β 敲低抑制了细胞增殖的减少。因此，蚜霉素通过 p53-GADD45β 通路抑制 AtT-20 细胞的增殖。[5]

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为了阐明蚜霉素的体内靶点，我们采用流式细胞术检测了正常人二倍体细胞在药物作用下的细胞周期阶段。在完全抑制细胞生长但未观察到明显细胞死亡的药物剂量下，超过 80% 的细胞进入 S 期并积累在 G2 期。另一方面，在较高剂量下，细胞首次进入早期 S 期时发生脱落。显然，蚜霉素的体内作用远比简单的 DNA 合成抑制复杂得多。[6]

C20H34O4

338.4816

338.245

C, 70.97; H, 10.13; O, 18.91

38966-21-1

457964

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

507.8±50.0 °C at 760 mmHg

225-233ºC

230.4±24.7 °C

0.0±3.0 mmHg at 25°C

1.586

1.69

80.92

4

4

2

24

524

8

C[C@]12CC[C@H]([C@@]([C@@H]1CC[C@@H]3[C@@]24CC[C@@]([C@H](C3)C4)(CO)O)(C)CO)O

NOFOAYPPHIUXJR-APNQCZIXSA-N

InChI=1S/C20H34O4/c1-17(11-21)15-4-3-13-9-14-10-19(13,7-8-20(14,24)12-22)18(15,2)6-5-16(17)23/h13-16,21-24H,3-12H2,1-2H3/t13-,14+,15-,16+,17-,18-,19-,20-/m0/s1

(1S,2S,5R,6R,7R,10S,12R,13R)-6,13-bis(hydroxymethyl)-2,6-dimethyltetracyclo[10.3.1.01,10.02,7]hexadecane-5,13-diol

aphidicolin; 38966-21-1; (+)-Aphidicolin; NSC-234714; (+/-)-Aphidicolin; aphidocolin; ICI 69653; CCRIS 1783;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~147.72 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。