| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Dengue virus NS2B/3 serine proteinase (inhibitor) [1]
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 100 μM 浓度下，1,8-二羟基-4,5-二硝基蒽醌（50 μM-2 mM；90 分钟）通过抑制 NS2B/3 位点显著影响 BHK-21 细胞 [1]。
在无细胞测定中，使用在兔网织红细胞裂解液中产生的最小 NS2B/3 蛋白酶构建体 (NS2B/3pro) 并用 ³⁵S-甲硫氨酸标记，ARDP0006 以浓度依赖的方式抑制 NS2B-3 连接处的分子内切割。抑制该自切割的IC₅₀值约为620 μM [1]。 在NS2B/3pro构建体的脉冲追踪实验中，用100 μM的ARDP0006处理导致切割速率略有但具有统计学意义的降低，前体半衰期从10.8分钟增加到14.9分钟[1]。 使用包含NS3int和NS3-4A切割位点的延长型NS2B/3/4A蛋白酶构建体，当该构建体能够在所有三个位点（NS2B-3、NS3int和NS3-4A）切割时，ARDP0006（100 μM）显著抑制了加工过程，半衰期从70分钟增加到>10¹⁵分钟[1]。 对于构建体对于不能在内部 NS3 位点切割但可在 NS2B-3 和 NS3-4A 位点切割的突变体 (G459L)，ARDP0006 (100 μM) 对其加工过程的抑制程度与最小 NS2B/3pro 构建体相似，半衰期从 19 分钟增加到 25 分钟 [1]。 对于可在 NS2B-3 和 NS3int 位点切割但不能在 NS3-4A 位点切割的构建体 (S1L)，ARDP0006 (100 μM) 对其加工过程的抑制作用显著增强，半衰期从 40 分钟增加到 66 分钟 [1]。 |
| 酶活实验 |
本研究引用了之前的研究，其中ARDP0006被鉴定为NS2B/3蛋白酶分子间活性的抑制剂，该抑制剂使用最小蛋白酶构建体（NS2B残基49-96通过柔性连接子与NS3残基1-185连接）和荧光底物进行检测。此前报道的溶液中分子间切割的IC₅₀值为432 μM [1]。
本研究开发了一种体外检测方法，用于测定NS2B-3连接处分子内切割的抑制情况。在兔网织红细胞裂解液中，于不同浓度的ARDP0006（50 μM至2 mM）存在下，制备最小蛋白酶（NS2B/3pro）。孵育后，通过SDS-PAGE分离蛋白质，并对剩余的前体进行定量，以确定其自切割的IC₅₀值（约620 μM）[1]。 采用脉冲追踪实验监测NS2B/3pro切割的动力学。将蛋白质与³⁵S-甲硫氨酸一起翻译30分钟，然后加入过量的未标记甲硫氨酸以及100 μM ARDP0006或DMSO。在不同时间点取样，并定量前体损失以计算切割速率[1]。 |
| 细胞实验 |
病毒生长抑制试验：用登革病毒（感染复数，0.1 PFU/细胞）感染BHK-21细胞，并用25 μM ARDP0006或DMSO对照处理。在感染后不同时间点收集细胞外和细胞内病毒，并通过噬斑试验进行定量。在24小时的单次感染周期内，ARDP0006处理使细胞外和细胞内病毒产量降低了约100倍[1]。
细胞毒性试验：用25 μM ARDP0006处理BHK-21细胞，在该浓度下未观察到明显的细胞毒性（参见SI附录图S1）[1]。 耐药性筛选：在含有ARDP0006的培养细胞中传代培养登革病毒，以筛选耐药变异株。在两个独立的筛选池中，未在NS2B/3中发现任何单个或共享突变。NS4A中出现了一个A21V突变，但当单独重建时，该突变并未赋予病毒对ARDP0006的特异性抗性，反而提高了病毒在有无抑制剂存在下的生长速率（见补充信息附录图S2）[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1,8-二羟基-4,5-二硝基蒽醌是一种棕金色固体。 (NTP, 1992)
ARDP0006（1,8-二硝基-4,5-二氢蒽醌）是一种登革病毒NS2B/3丝氨酸蛋白酶抑制剂，此前已在高通量筛选中被鉴定出来[1]。 该化合物是目前报道的登革病毒生长最有效的NS2B/3靶向抑制剂之一，此前报道其在感染期间的IC₅₀值为4.2 μM，尽管其在溶液中抑制分子间裂解的IC₅₀值要高得多（432 μM）[1]。 本研究表明，NS3内部裂解位点（NS3int）对ARDP0006的抑制作用高度敏感，其敏感性与病毒本身相当[1]。 该研究提出，抗病毒功效ARDP0006的作用机制可能是由于抑制特定的分子内切割（尤其是在NS3int位点）导致毒性前体积累，而非普遍抑制蛋白水解活性[1]。 观察到对ARDP0006具有较高的耐药屏障，在筛选后未在NS2B/3中发现耐药突变[1]。 平行测试了另一种靶向NS2B/3的分子NSC135618，结果显示病毒抑制IC₅₀（1.7 μM）与分子内切割IC₅₀（490 μM）之间存在类似的差异，表明这种机制可能在某些蛋白酶抑制剂中普遍存在[1]。 |
| 分子式 |
C14H6N2O8
|
|---|---|
| 分子量 |
330.2
|
| 精确质量 |
330.012
|
| CAS号 |
81-55-0
|
| PubChem CID |
3378440
|
| 外观&性状 |
Yellow to brown solid powder
|
| 密度 |
1.8±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
669.4±55.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
225 °C (dec.)(lit.)
|
| 闪点 |
280.8±20.0 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±2.1 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.782
|
| LogP |
4.94
|
| tPSA |
166.24
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
0
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
549
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
GJCHQJDEYFYWER-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C14H6N2O8/c17-7-3-1-5(15(21)22)9-11(7)14(20)12-8(18)4-2-6(16(23)24)10(12)13(9)19/h1-4,17-18H
|
| 化学名 |
1,8-dihydroxy-4,5-dinitroanthracene-9,10-dione
|
| 别名 |
ARDP0006 ARDP 0006 ARDP-0006
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~41.67 mg/mL (~126.19 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0285 mL | 15.1423 mL | 30.2847 mL | |
| 5 mM | 0.6057 mL | 3.0285 mL | 6.0569 mL | |
| 10 mM | 0.3028 mL | 1.5142 mL | 3.0285 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
