| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mitochondrial complex I (NADH:CoQ reductase) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
在稳定表达eGFP-LC3的MCF-7细胞（MCF-LC3）中，以剂量依赖的方式抑制饥饿诱导和雷帕霉素诱导的自噬。[1]
- 抑制LC3脂化（LC3-I向LC3-II的转化）并阻断饥饿或雷帕霉素处理的MCF7-LC3细胞中p62的降解，表明自噬通量受到抑制。[1] - 与营养充足的细胞相比，降低氨基酸饥饿的MCF7-LC3细胞的存活率（通过WST-1法评估）。[1] - 以剂量依赖的方式诱导饥饿的MCF7细胞凋亡，通过使用IncuCyte Zoom活细胞显微镜和选择性caspase 3/7探针进行检测。 [1] - 不抑制HCT116细胞的葡萄糖摄取（30 µM浓度下残余活性>75%，n=4）。[1] - 能强效且呈剂量依赖性地降低MCF7和HeLa细胞的耗氧率（OCR）并增加细胞外酸化率（ECAR），该结果通过Seahorse XFe96分析仪测定。[1] - 能降低细胞ATP水平，但仅在浓度显著高于抑制自噬所需的浓度时才会发生。[1] - 在葡萄糖饥饿的细胞中比在葡萄糖充足的细胞中更能有效地促进细胞死亡。[1] |
| 酶活实验 |
使用洋地黄皂苷透化的HeLa细胞进行半完整测定：用洋地黄皂苷透化细胞，使线粒体复合物得以暴露。呼吸作用由添加各复合物的特定底物驱动。amutinit 特异性抑制丙酮酸/苹果酸驱动的呼吸活性，该活性对应于NADH-CoQ还原酶（复合物I）活性。只有复合物I下游复合物的底物才能维持氧气的持续消耗。[1]
- 使用分离线粒体的NADH-CoQ还原酶测定：分离线粒体，并通过追踪NADH对CoQ的还原来测定复合物I的酶活性。amutinit 以类似于鱼藤酮的方式抑制该活性，证实了其对线粒体复合物I的直接抑制作用。[1] |
| 细胞实验 |
高内涵筛选自噬抑制剂：使用稳定表达 eGFP-LC3 的 MCF-7 细胞 (MCF-LC3)。通过氨基酸剥夺 (EBSS) 或雷帕霉素 (100 nM) 处理细胞以诱导自噬。通过荧光显微镜定量 eGFP-LC3 斑点的积累。amutinit 呈剂量依赖性地减少斑点的形成。[1]
- LC3 脂化和 p62 降解的蛋白质印迹分析：在存在递增浓度的 amutinit 的情况下，对 MCF7-LC3 细胞进行饥饿 (EBSS) 或雷帕霉素处理。通过 SDS-PAGE 和抗 LC3 和抗 p62 抗体的免疫印迹分析细胞裂解物。amutinit 抑制饥饿和雷帕霉素诱导的 LC3-II 形成和 p62 降解。 [1] - mCherry-eGFP-LC3 通量检测：在营养充足或饥饿条件下，用amutinit处理表达 mCherry-eGFP-LC3 的细胞。在酸性自噬溶酶体中，eGFP 荧光被淬灭，而 mCherry 保持稳定。amutinit 可减少黄色（自噬体）和红色（自噬溶酶体）斑点，表明其在自噬体生物合成过程中或之前受到抑制。[1] - 细胞活力 (WST-1) 检测：在营养充足 (MEM) 或饥饿 (EBSS) 条件下，用递增浓度的amutinit 培养 MCF7-LC3 细胞。加入 WST-1 试剂并测量吸光度。与营养充足的细胞相比，饥饿细胞的存活率降低。 [1] - 细胞凋亡检测（caspase 3/7）：MCF7 细胞经饥饿处理后，用amutinit和选择性 caspase 3/7 探针进行处理。使用 IncuCyte Zoom 活细胞显微镜实时监测凋亡细胞。amutinit呈剂量依赖性地诱导细胞凋亡。[1] - Seahorse 线粒体呼吸测定：将 MCF7 或 HeLa 细胞接种于 Seahorse XFe96 培养板中。依次测量耗氧率 (OCR) 和细胞外酸化率 (ECAR)。在时间点 (a) 注射amutinit，随后依次注射寡霉素 (b)、FCCP (c) 和鱼藤酮+抗霉素 (d)。amutinit呈剂量依赖性地降低 OCR 并增加 ECAR。 [1] - 葡萄糖摄取测定：用amutinit (30 µM) 处理 HCT116 细胞，并测定葡萄糖摄取。残余活性 >75% 表明无显著抑制作用。[1] - 细胞 ATP 测定：用amutinit 或鱼藤酮处理细胞，并定量 ATP 水平。仅当浓度高于自噬抑制所需浓度时，才会出现显著的 ATP 消耗。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
amutinit是一种基于二氨基嘧啶的化合物，是通过表型筛选自噬抑制剂发现的。它的结构与已知的激酶抑制剂相似，但在1 µM浓度下仅对PI4KB和PI3KC2G表现出微弱的抑制作用（在测试的419种激酶中），并且这些激酶的选择性抑制剂不会阻断自噬，从而排除了脱靶激酶效应。[1]
- 该化合物能快速抑制线粒体呼吸，表明呼吸抑制是自噬抑制的原因，而非结果。[1] - 结构-活性关系（SAR）分析表明，线粒体呼吸抑制与自噬抑制密切相关；无活性的类似物不影响呼吸。 [1] - 其他线粒体抑制剂（复合物 III 抑制剂抗霉素和粘霉素，复合物 V 抑制剂寡霉素）也能有效抑制自噬，表明线粒体呼吸功能受损通常会导致自噬抑制。[1] - 由于鱼藤酮具有其他脱靶活性，因此建议使用amutinit作为研究线粒体复合物 I 和自噬的有效替代品。[1] |
| 分子式 |
C24H20CLN5O
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|---|---|
| 分子量 |
429.901503562927
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| 精确质量 |
429.14
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| 元素分析 |
C, 67.05; H, 4.69; Cl, 8.25; N, 16.29; O, 3.72
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| CAS号 |
946293-78-3
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| 相关CAS号 |
946293-78-3;
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| PubChem CID |
27478481
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.8
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| tPSA |
78.9
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
564
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=CC(=NC(=N1)NC2=CC=C(C=C2)NC(=O)C3=CC=CC=C3Cl)NC4=CC=CC=C4
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| InChi Key |
VJNNQBDSUIVCKB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H20ClN5O/c1-16-15-22(27-17-7-3-2-4-8-17)30-24(26-16)29-19-13-11-18(12-14-19)28-23(31)20-9-5-6-10-21(20)25/h2-15H,1H3,(H,28,31)(H2,26,27,29,30)
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| 化学名 |
N-[4-[(4-anilino-6-methylpyrimidin-2-yl)amino]phenyl]-2-chlorobenzamide
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| 别名 |
Aumitin
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| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~232.61 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3261 mL | 11.6306 mL | 23.2612 mL | |
| 5 mM | 0.4652 mL | 2.3261 mL | 4.6522 mL | |
| 10 mM | 0.2326 mL | 1.1631 mL | 2.3261 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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