| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
Diazepam Prodrug; lasma enzymes
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| 体外研究 (In Vitro) |
人氨基肽酶B（APB）是一种不稳定的酶，目前正被研究作为前药/酶组合鼻内递送的生物催化剂。因此，APB的稳定性是确保可行药物产品的主要关注点。冻干是一种常用的延长酶保质期的技术。然而，冻干过程本身会引起构象变化和聚集，导致酶失活。在这项研究中，我们展示了使用底物Avizafone（AVF）作为稳定剂，以尽量减少冻干过程中APB的失活，AVF是地西泮的前药。将APB样品与AVF、海藻糖和/或甘露醇混合后进行快速冷冻和冻干，随后进行复溶以测量APB的活性。在制剂排列中，APB+AVF+海藻糖组合的降解率最低，活性保留率为71%。随后是APB+AVF和APB+海藻糖，分别保留了60%和56%的活性。相比之下，APB+甘露醇和单独使用APB分别仅保留了16%和6.4%的活性。对APB+AVF+海藻糖制剂的冻干物进行了为期6个月的加速稳定性研究，研究结束时观察到活性的降低可以忽略不计。这些结果表明，酶与其底物的冻干可以赋予与常用的冷冻保护剂海藻糖相当的稳定性，但底物和海藻糖的组合比单独使用任何一种添加剂都能提供更大的稳定作用[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
鼻内给药是一种有吸引力的途径，用于全身输送小型亲脂性药物，因为它们会通过鼻粘膜迅速吸收到全身循环中。然而，亲脂性药物的低溶解度通常排除了水性鼻喷雾剂的可能性。一种规避溶解度问题的独特方法涉及将亲水性前药与外源性转化酶联合给药。这种策略不仅解决了溶解性差的问题，而且导致了驱动药物吸收的化学活性梯度的增加。在此，研究人员报告了亲水性地西泮前药Avizafone与转化酶人氨基肽酶B联合给药后大鼠的血浆和脑浓度。单次剂量相当于0.500、1.00和1.50mg/kg地西泮的Avizafone经鼻给药，生物利用度为77.8%±6.0%、112%±10%和114%±7%；最大血浆浓度分别为71.5±9.3、388±31和355±187 ng/ml；以及每种剂量水平达到血浆浓度峰值的时间分别为5、8和5分钟。地西泮和一种短暂的中间体都被吸收了。将酶动力学纳入基于生理学的药代动力学模型，可以估算一级吸收速率常数：地西泮为0.0689±0.0080分钟-1，中间体为0.122±0.022分钟-1。我们的研究结果表明，实际上不溶的地西泮可以通过与氨基肽酶B联合使用Avizafone进行鼻内给药，快速完全吸收。此外，通过增加酶浓度，可能会取代静脉注射地西泮或劳拉西泮或肌肉注射咪达唑仑治疗癫痫发作紧急情况，从而获得更快的吸收率[2]。
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| 酶活实验 |
酶动力学。[1]
通过将Michaelis-Menten方程拟合到一系列AVF浓度的初始底物消耗速率，确定了32°C下APB在pH 7.4 PBS中水解Avizafone (AVF) 的米氏常数（KM）和最大反应速度（Vmax）。在Eppendorf Thermomixer 5436中以500 rpm的速度与62.5-4000μM Avizafone (AVF) 和15μg/ml（0.203μM）APB进行反应。1分钟后，通过加入甲醇使APB变性。在Cary 100 Bio-UV/Vis分光光度计中测量淬灭反应混合物的紫外光谱之前，允许ORI向DZP的环化过程完成。338nm光谱的二阶导数用于量化DZP，该量被视为与AVF消耗量的摩尔当量。 冻干程序[2] 将APB、Avizafone (AVF) 、Tre、Man、pH 7.4 Tris的水储备溶液和纯水在冰浴中冷却至约0°C。将储备溶液的等分试样以适当的比例移入冷的2 mL玻璃瓶中，以获得每个样品的指示成分浓度和相等的最终体积。对于含有AVF的样品，最后加入AVF溶液。在将小瓶放入液氮中5分钟以快速冷冻内容物之前，用移液管将这些冷的预冻溶液短暂混合。然后将小瓶从液氮中取出，转移到冻干烧瓶中，并在室温下在0.016毫巴真空下使用FreeZone 6歧管冷冻干燥器干燥18小时。将装有冻干物的小瓶加盖并储存在干燥器中，直至分析。除非另有说明，否则应在室温下储存。 活性酶的测定[2] 使用光谱技术测定样品处理、冻干和储存后剩余的活性酶的量。使用配备有温度控制器的 Cary 100 Bio-UV/Vis双光束分光光度计进行用于跟踪底物水解的吸收率（Abs）测量。除非另有说明，否则温度控制器设置为32°C，这是人体鼻腔的平均温度。样品在光程为1cm、最小填充体积为50μL的石英超微毛细管中进行分析。本研究中使用的浓度的APB、Tre、Tris和Man溶液在用于底物和产物浓度光谱定量的波长下是透明的。 为了测量特定的酶活性，将冻干物在加热至32°C的PBS中用1.00 mM LpNA复溶。所得溶液立即转移到已经放置在分光光度计温控块中的试管中。在405nm处监测LpNA水解引起的Abs变化。每100毫秒读取一次读数。前0.25分钟内吸光度变化的斜率（dAbs/dt）用于计算反应速率（d[pNA]/dt），如下所示 其中ε表示摩尔吸光系数。在32°C的pH 7.4 PBS中，405nm处的εpNA=9860 M–1 cm–1和εLpNA=55.9 M–1 cm-1（ε的温度依赖性请参考支持信息表S1）。比酶活性通过（d[pNA]/dt）/[APB]计算。 发色底物LpNA不能用于测量含有前药底物Avizafone (AVF) 的样品中活性APB的量。为了测量这些样品中的活性APB，冻干物用100μL PBS或1.00 mM Avizafone (AVF) 的PBS溶液复溶，PBS溶液已加热至32°C，所得溶液立即转移到分光光度计中嵌入的试管中，如上所述。在315nm下监测AVF转化为DZP引起的Abs变化20分钟。每0.25分钟读取一次读数。时间t时DZP的浓度计算如下： 其中Abs0是样品的初始吸光度，Abst是在时间t测量的吸光度。在32°C的pH 7.4 PBS中，εDZP=2040 M–1 cm–1，εAvizafone (AVF) =753 M–1 cm-1，波长为315 nm。之前已经讨论了εDZP和εAvizafone (AVF) 的温度依赖性，以及在根据吸光度测量计算DZP浓度时忽略εORI的有效性。在获得DZP浓度-时间曲线后，以[APB]作为单独拟合参数，将以下一组耦合微分方程拟合到数据中。 |
| 动物实验 |
对于鼻内给药，大鼠麻醉后仰卧，并进行插管。用于鼻组织切片的大鼠不进行插管。将溶于PBS的阿维扎芬(AVF)和APB溶液在给药前立即混合至每只动物所需的适当浓度。剂量水平见表1。混合后，使用带有凝胶加载吸头的Eppendorf移液器，将混合液快速注入鼻腔，深度为鼻孔后14 mm。总给药量为30 μl，0.5分钟内先向右侧鼻孔注入15 μl，再向左侧鼻孔注入15 μl。鼻内给药剂量分为四组：低剂量、中剂量和高剂量的阿维扎芬(AVF)/APB混合组，以及中剂量的阿维扎芬(AVF)单药组。选择这些剂量是因为在大鼠研究中通常使用接近 1 mg/kg 的 DZP，并且该剂量可使大鼠血浆浓度达到临床相关水平。[1]
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| 参考文献 |
[1]. Diazepam Prodrug Stabilizes Human Aminopeptidase B during Lyophilization. Mol Pharm. 2020 Feb 3;17(2):453-460.
[2]. Intranasal Coadministration of a Diazepam Prodrug with a Converting Enzyme Results in Rapid Absorption of Diazepam in Rats. J Pharmacol Exp Ther. 2019 Sep;370(3):796–805. |
| 其他信息 |
阿维扎芬是一种肽类前药。
总之，本文提供的药代动力学结果表明，鼻内联合使用阿维扎芬 (AVF) 和阿吡拉西坦 (APB) 是一种可行的快速将地西泮 (DZP) 递送至体循环并最终到达大脑的方法。由于该高浓度制剂不含任何有机溶剂，预计其耐受性更好，吸收速度也比使用增溶剂的地西泮鼻内制剂更快。以非侵入性鼻喷雾剂的形式给药，鼻内阿维扎芬 (AVF)/阿吡拉西坦 (APB) 可用于快速终止人类癫痫发作，从而减少急诊就诊次数，并提高癫痫发作患者的生活质量。进一步的研究进展需要开发一种能够分别储存前药和酶，并在给药时将它们混合成喷雾溶液的装置。[1] 最后，我们认识到，尽管这项研究证明了底物对酶在冻干过程中稳定性的影响，但其范围仅限于APB。这些实验的主要目标是评估共冻干阿维扎福 (AVF)/APB组合的可行性，以稳定药物制剂，用于进一步的转化开发，并指导专用鼻喷雾装置的设计要求。目前正在进行更多实验，包括放大至治疗相关浓度、优化冻干工艺参数、全面表征冻干物以及在给药装置中的性能测试。 |
| 分子式 |
C22H27CLN4O3
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|---|---|
| 分子量 |
430.9
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| 精确质量 |
430.177
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| CAS号 |
65617-86-9
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| 相关CAS号 |
60067-15-4
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| PubChem CID |
71968
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.253g/cm3
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| 沸点 |
697.6ºC at 760 mmHg
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| 闪点 |
375.7ºC
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| 折射率 |
1.604
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| LogP |
4.347
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| tPSA |
122.01
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
583
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CN(C1=C(C=C(C=C1)Cl)C(=O)C2=CC=CC=C2)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N
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| InChi Key |
LTKOVYBBGBGKTA-SFHVURJKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H27ClN4O3/c1-27(20(28)14-26-22(30)18(25)9-5-6-12-24)19-11-10-16(23)13-17(19)21(29)15-7-3-2-4-8-15/h2-4,7-8,10-11,13,18H,5-6,9,12,14,24-25H2,1H3,(H,26,30)/t18-/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-2,6-diamino-N-[2-(2-benzoyl-4-chloro-N-methylanilino)-2-oxoethyl]hexanamide
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| 别名 |
Avizafone; 65617-86-9; Pro-diazepam; Avizafonum [INN-Latin]; Avizafona [INN-Spanish]; Avizafona; Avizafonum; Ro 03-7355/000;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3207 mL | 11.6036 mL | 23.2072 mL | |
| 5 mM | 0.4641 mL | 2.3207 mL | 4.6414 mL | |
| 10 mM | 0.2321 mL | 1.1604 mL | 2.3207 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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