| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Cell division control protein 42 (Cdc42), a Rho GTPase. The drug selectively inhibits Cdc42 activity without affecting Rac1 or RhoA from the same family.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
通过G-LISA检测，AZA197在SW620和HT-29人结肠癌细胞系中均表现出对Cdc42活性的选择性、剂量依赖性抑制作用。在浓度为1、2、5和10 µM时，AZA197分别使SW620细胞中Cdc42活性降低了56.7%、75.2%、76.0%和89.3%（与未处理的对照组相比）。在相同浓度下，HT-29细胞中Cdc42活性分别降低了18%、48.5%、52.9%和61.0%。未观察到对Rac1或RhoA活性的抑制作用。通过WST-1检测，在72小时内，AZA197以剂量依赖的方式显著抑制了SW620和HT-29结肠癌细胞的增殖。 72 小时后，所有测试浓度（1-10 µM）均显著降低了细胞增殖，与对照组相比差异显著（P < 0.001）。
流式细胞术分析显示，用 AZA197（2、5 和 10 µM，处理 24 小时）处理 SW620 细胞后，S 期和 G2/M 期细胞数量呈剂量依赖性减少，而亚 G0/G1 期 DNA 含量的细胞数量增加，表明细胞凋亡。 在 Boyden 小室迁移实验中，AZA197 显著降低了 SW620 和 HT-29 结肠癌细胞的迁移能力。用 2 或 5 µM AZA197 处理 24 小时后，SW620 细胞的迁移能力分别降低了 47.4% 和 43.5%（P < 0.05）。 HT-29 细胞迁移能力降低了高达 77.1%。 AZA197 显著降低了 Matrigel 侵袭实验中 SW620 和 HT-29 结肠癌细胞的侵袭能力。用 1、2 和 5 µM 的 AZA197 处理 24 小时后，SW620 细胞的侵袭能力分别降低了 61.3%、71.0% 和 83.9% (P < 0.003)。 HT-29细胞的侵袭能力降低了高达84.6%。 荧光显微镜观察经AZA197处理的结肠癌细胞，并用鬼笔环肽染色，结果显示细胞形态发生显著变化，包括细胞变圆和丝状伪足形成减少，这与Cdc42抑制相符。 蛋白质印迹分析显示，AZA197处理（2-10 µM，24小时）并未改变Cdc42、PAK1或ERK的总蛋白水平，但显著且呈剂量依赖性地降低了SW620和HT-29细胞中PAK1/2和ERK1/2的磷酸化水平。在SW620细胞中，pPAK1/2降低了高达66.2%，pERK降低了高达40.2%。经AZA197处理后，细胞周期蛋白D1的表达也显著降低。 在鸟嘌呤核苷酸交换实验中，AZA197（10 µM）抑制了GEF（Dbs）刺激的Cdc42核苷酸交换活性约61%，表明该化合物破坏了Cdc42-GEF相互作用。 细胞毒性实验（LDH释放）显示，浓度高达10 µM的AZA197在24小时后未对SW620、HT-29或3T3成纤维细胞造成明显的细胞膜损伤。浓度达到20 µM及以上时，所有细胞系均观察到显著的LDH释放。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在异种移植小鼠模型中，皮下接种 SW620 人结肠癌肿瘤的无胸腺裸鼠每天接受腹腔注射 AZA197（100 µg/天，溶于 30% DMSO）或载体对照治疗，持续 14 天（肿瘤细胞注射后第 8-22 天）。在第22天，与对照组（968 ± 208 mg）相比，AZA197治疗组的平均肿瘤重量（676.7 ± 106 mg）显著降低（P = 0.006），表明原发肿瘤生长受到抑制。
对AZA197治疗小鼠的肿瘤组织进行免疫组织化学分析显示，与对照组相比，Ki-67阳性增殖细胞显著减少了27.4%（P = 0.046），TUNEL阳性凋亡细胞显著增加了80.6%（P = 0.035）。 对肿瘤组织裂解液进行Western blot分析证实，AZA197治疗并未改变Cdc42、PAK1或ERK蛋白的总水平，但显著降低了PAK1/2（降低48.5%）和ERK1/2（降低48.5%）的磷酸化水平。与对照组相比，AZA197 治疗组的生存率提高了 59.2%，这与体外实验结果一致。 在一项生存研究中，AZA197 治疗显著延长了 SW620 荷瘤小鼠的生存期（P = 0.042）。治疗组的中位生存期为 69 天，而对照组为 53 天。在研究终点（第 100 天），50% 的 AZA197 治疗组小鼠仍然存活，而所有对照组小鼠均已死亡。 |
| 酶活实验 |
鸟嘌呤核苷酸交换分析：使用 RhoGEF 交换分析生化试剂盒评估了 AZA197 抑制 GEF 刺激的 Cdc42 核苷酸交换的能力。采用荧光光谱法监测 N-甲基邻氨基苯甲酰 (mant) 标记的 GTP 掺入纯化的 His 标签 Cdc42 的情况。交换反应混合物包含 20 mM Tris (pH 7.5)、50 mM NaCl、10 mM MgCl₂、50 µg/mL BSA、0.8 µM mant-GTP 和 1 µM Cdc42 GTPase，并分别在有或无 10 µM AZA197 的情况下进行。平衡并测定基线荧光后，加入 GEF Dbs（或水作为阴性对照），使其浓度达到 0.8 µM。每隔 30 秒进行一次荧光测量（激发波长 360 nm，发射波长 440 nm），共持续 30 分钟。监测荧光强度的增加，该增加代表了 mant-GTP 的掺入。将存在 AZA197 时的交换活性与 Dbs 刺激的对照组进行比较，以计算抑制百分比。
|
| 细胞实验 |
细胞毒性测定：将细胞（SW620、HT-29 和 3T3 成纤维细胞）接种于 96 孔板中，培养 24 小时，然后用 1-100 µM 的 AZA197 处理 24 小时。收集培养上清液，并使用 CytoTox96 非放射性细胞毒性检测试剂盒，按照制造商的说明测定 LDH 释放量。在 490 nm 处测量吸光度，细胞毒性以裂解细胞中最大 LDH 释放量的百分比表示。
Rho GTPase 激活测定：将结肠癌细胞（SW620、HT-29）接种于 6 孔板中，并用 1、2、5 和 10 µM 的 AZA197 处理 24 小时。随后，使用G-LISA激活检测试剂盒（比色法）按照制造商的说明书检测Rac1、Cdc42和RhoA的激活情况。该检测方法特异性地捕获每种GTP酶的活性GTP结合形式。 细胞增殖实验：将人SW620和HT-29细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种于96孔板中。细胞分别用1、2、5或10 µM的AZA197处理。处理后24、48和72小时，使用WST-1试剂按照制造商的说明书检测细胞增殖情况。测量吸光度值，并计算相对细胞密度。 流式细胞术细胞周期分析：将SW620细胞接种于6孔板中，并用2、5或10 µM的AZA197处理24小时。随后，细胞经胰蛋白酶消化，用PBS洗涤，在4°C下用70%乙醇固定1小时，并在含有800 µg/mL碘化丙啶和50 µg/mL RNase A的PBS溶液中染色。使用配备488 nm氩离子激光器的FACScan流式细胞仪分析10⁴个细胞事件。 迁移实验：将结肠癌细胞（1×10⁵个/mL，溶于含10% FCS的DMEM培养基中）加入Boyden迁移小室（孔径8 µm）顶部。细胞分别与1、2或5 µM的AZA197孵育。24小时后，洗涤膜，在-20°C下用甲醇固定10分钟，并用1 µg/mL DAPI染色。在荧光显微镜下，从五个连续的视野中计数膜下侧的迁移细胞。每个实验重复三次。 侵袭实验：将结肠癌细胞（5×10⁴个/mL，含0.2% FCS的培养基）加入BioCoat Matrigel侵袭小室（孔径8 µm）的上室。在下室中加入含10% FCS的DMEM培养基作为趋化因子。加入AZA197，使其最终浓度分别为1、2和5 µM。24小时后，按照迁移实验所述方法处理膜并染色。在荧光显微镜下，从五个连续的视野中计数侵袭细胞。每个实验均重复三次。 肌动蛋白细胞骨架可视化：将SW620和HT-29细胞培养于纤连蛋白/明胶包被的腔室盖玻片上，并用5或10 µM的AZA197孵育24小时。然后固定细胞，进行透化处理，用Atto-488鬼笔环肽标记F-肌动蛋白，并用DAPI复染。使用Nikon Eclipse 80i显微镜在1000倍放大倍率下观察荧光，并进行图像数字化采集。 蛋白质印迹：将结肠癌细胞接种于100 mm培养皿中，并用2、5和10 µM的AZA197孵育24小时。取细胞裂解液（50 µg/泳道）进行12% SDS-PAGE电泳分离，并将蛋白质转移至膜上。将印迹膜与针对 Cdc42、PAK1、磷酸化 PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141)、ERK1/2、磷酸化 ERK1/2 (Thr202/Tyr204)、细胞周期蛋白 D1 和 α-微管蛋白（上样对照）的抗体进行孵育。采用化学发光法检测蛋白质并进行定量。 |
| 动物实验 |
异种移植瘤模型：** 本研究使用5周龄的无特定病原体（SPF）级雄性无胸腺nu/nu（裸鼠）。小鼠经麻醉（氯胺酮/甲苯噻嗪 55/7.5 mg/kg，腹腔注射）后，将8×10⁶个SW620人结肠癌细胞悬浮于100 µL PBS中，皮下注射至小鼠左侧腹部。细胞注射后8天（第8天），小鼠每日腹腔注射100 µg AZA197（溶于100 µL 30% DMSO），持续两周（至第22天）。对照组小鼠每日腹腔注射100 µL 30% DMSO。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并计算公式为长×宽²/2。第22天，处死所有小鼠，切除肿瘤，拍照并称重。肿瘤组织经处理后进行组织学（Ki-67 IHC、TUNEL）和蛋白质印迹分析。
**生存研究：** 在另一组小鼠中，荷瘤小鼠按上述方法接受AZA197（n=6）或载体对照（n=6）治疗。生存研究持续100天。濒死小鼠处死，并采用Kaplan-Meier法分析生存曲线。 异种移植瘤模型：使用5周龄的无特定病原体（SPF）级雄性无胸腺nu/nu（裸鼠）。小鼠经麻醉（氯胺酮/甲苯噻嗪 55/7.5 mg/kg，腹腔注射）后，将8×10⁶个SW620人结肠癌细胞悬浮于100 µL PBS中，皮下注射至左侧腹部。细胞注射后第8天（第8天），小鼠每天腹腔注射100 µg AZA197（溶于100 µL 30% DMSO），持续两周（至第22天）。对照组小鼠每天注射100 µL 30% DMSO。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并计算公式为长×宽²/2。第22天，处死所有小鼠，切除肿瘤，拍照并称重。肿瘤组织用于组织学（Ki-67 IHC、TUNEL）和蛋白质印迹分析。 生存研究：在另一组小鼠中，荷瘤小鼠接受AZA197（n=6）或载体对照（n=6）治疗，方法如上所述。生存研究持续100天。小鼠濒死时实施安乐死，并采用Kaplan-Meier法分析生存曲线。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外实验中，浓度高达 10 µM 的 AZA197 对 SW620、HT-29 或 3T3 成纤维细胞均未显示出明显的细胞毒性（LDH 释放）。浓度达到 20 µM 及以上时，所有细胞系均观察到显著的 LDH 释放，表明细胞膜损伤。体内实验中，无胸腺裸鼠对 AZA197 治疗（100 µg/天，腹腔注射，持续 14 天）耐受性良好。治疗期间未观察到体重变化或明显的毒性迹象。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AZA197 (N2-(4-二乙氨基-1-甲基丁基)-N4-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-6-甲基嘧啶-2,4-二胺) 是一种新型小分子抑制剂，基于 Rac1 抑制剂 NSC23766 的结构修饰而开发。它是通过体外筛选对 SW620 结肠癌细胞具有抑制活性的化合物而发现的。
AZA197 通过破坏 Rho GTPase Cdc42 与鸟嘌呤核苷酸交换因子 (GEF) 的相互作用，选择性地靶向 Cdc42，从而阻止其激活。 AZA197 对 Cdc42 的特异性优于其他 Rho 家族成员（Rac1、RhoA），使其成为研究 Cdc42 生物学的宝贵工具，并有望成为一种治疗候选药物。 AZA197 的抗肿瘤作用是通过抑制 Cdc42-PAK1-ERK 信号通路实现的，从而降低结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并促进其凋亡。 这项临床前研究表明，使用 AZA197 靶向 Cdc42 具有治疗结直肠癌的潜力，尤其适用于 KRAS 突变型结直肠癌，这类癌症通常对现有靶向疗法耐药。该化合物在异种移植小鼠模型中显著抑制了肿瘤生长并延长了生存期。 |
| 分子式 |
C24H36N6
|
|---|---|
| 分子量 |
408.582844734192
|
| 精确质量 |
408.3
|
| CAS号 |
1249398-09-1
|
| PubChem CID |
46938132
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| LogP |
5.2
|
| tPSA |
68.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
12
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
471
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
N(CC)(CC)CCCC(C)NC1N=C(C)C=C(N=1)NCCC1=CNC2C=CC=CC1=2
|
| InChi Key |
SUXUDORZKKZLJK-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C24H36N6/c1-5-30(6-2)15-9-10-18(3)27-24-28-19(4)16-23(29-24)25-14-13-20-17-26-22-12-8-7-11-21(20)22/h7-8,11-12,16-18,26H,5-6,9-10,13-15H2,1-4H3,(H2,25,27,28,29)
|
| 化学名 |
2-N-[5-(diethylamino)pentan-2-yl]-4-N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-6-methylpyrimidine-2,4-diamine
|
| 别名 |
AZA197 AZA 197 AZA-197
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4475 mL | 12.2375 mL | 24.4750 mL | |
| 5 mM | 0.4895 mL | 2.4475 mL | 4.8950 mL | |
| 10 mM | 0.2448 mL | 1.2238 mL | 2.4475 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
