Target: DNA gyrase and topoisomerase IV (balanced dual targeting; no IC₅₀/Ki values provided in this study) [1]
The primary molecular target of Besifloxacin is bacterial DNA gyrase (topoisomerase II) and topoisomerase IV, which are essential enzymes for bacterial DNA replication, transcription, and repair. As a fluoroquinolone antibiotic, Besifloxacin inhibits DNA gyrase, which introduces negative supercoils into DNA, and topoisomerase IV, which decatenates replicated DNA molecules. By inhibiting these enzymes, Besifloxacin prevents bacterial DNA replication and transcription, leading to bacterial cell death. The 8-chloro substitution in Besifloxacin is a distinguishing feature that contributes to its enhanced activity against fluoroquinolone-resistant strains by reducing efflux and improving target binding. Besifloxacin has a broad spectrum of antibacterial activity against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, including common ocular pathogens such as Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, and Moraxella catarrhalis. Its activity against anaerobes is particularly noteworthy among fluoroquinolones.

在所有测试的抗革兰氏阳性病原体和厌氧菌药物中，贝西沙星的活性最强，对大多数革兰氏阴性病原体的活性与同类氟喹诺酮类药物相当。贝西沙星表现出强效的广谱抗菌活性，尤其对其他氟喹诺酮类药物及其他抗菌药物耐药的革兰氏阳性和革兰氏阴性菌株的抗菌活性显著。[2]

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贝西沙星对革兰氏阳性需氧菌的活性。
贝西沙星对粪肠球菌和屎肠球菌（包括耐万古霉素肠球菌）的抗菌活性优于同类氟喹诺酮类药物，也优于阿奇霉素、万古霉素和妥布霉素。 贝西沙星对单核细胞增生李斯特菌也表现出优异的活性，与妥布霉素和青霉素相似，且优于对照氟喹诺酮类药物。[2]
贝西沙星对革兰氏阴性需氧菌的活性。
对三种不动杆菌属细菌。 （其中包括 16% 至 64% 的对环丙沙星不敏感的分离株），贝西沙星的 MIC90（16 至 32 μg/ml）与环丙沙星的值相似或更低，并且对于其中两种菌种，贝西沙星的 MIC90 比左氧氟沙星和莫西沙星的相应值高 2 至 4 倍。[2]
贝西沙星对革兰氏阳性和革兰氏阴性厌氧菌的活性。[2]
对于六种厌氧菌中的五种，贝西沙星的 MIC90 等于或低于活性最强的对照药物，包括克林霉素、甲硝唑和其他氟喹诺酮类药物（表 3）。针对痤疮丙酸杆菌，活性最强的药物是克林霉素，其MIC90为0.12 μg/ml，而贝西沙星和莫西沙星的相应值则高出两倍。总体而言，贝西沙星和莫西沙星是针对厌氧菌活性最强的药物。[2]体外试验：贝西沙星盐酸盐对2690株临床分离株（34种需氧菌和6种厌氧菌）表现出广谱抗菌活性。对于革兰氏阳性需氧菌：粪肠球菌（包括耐万古霉素肠球菌）MIC₅₀/MIC₉₀ = 0.12/2 μg/ml；屎肠球菌（包括耐万古霉素肠球菌）2/8 μg/ml；单核细胞增生李斯特菌 0.12/0.12 μg/ml；环丙沙星敏感金黄色葡萄球菌（21.1% MRSA）MIC₅₀/MIC₉₀ = 0.015/0.12 μg/ml；环丙沙星不敏感金黄色葡萄球菌（63.6% MRSA）0.5/4 μg/ml；环丙沙星敏感表皮葡萄球菌（44.4% MRSE）0.03/NA；环丙沙星不敏感表皮葡萄球菌（83.3% MRSE）0.25/NA；溶血葡萄球菌 MIC₅₀/MIC₉₀ = 0.5/NA；人葡萄球菌 0.25/NA；路邓链球菌 0.06/0.5；腐生链球菌 0.06/0.12；沃氏链球菌 0.06/NA。针对链球菌：无乳链球菌 MIC₅₀/MIC₉₀ = 0.06/0.06 μg/ml；兰斯菲尔德 C、F、G 组 0.03/0.06；左氧氟沙星敏感肺炎链球菌 (n=16) 0.03/0.06；左氧氟沙星不敏感肺炎链球菌 (n=85) 0.5/0.5；化脓性链球菌 0.03/0.06；草绿色链球菌 0.06/0.12。对于肺炎链球菌，贝西沙星对左氧氟沙星敏感菌株的MIC₉₀为0.06 μg/ml，对左氧氟沙星不敏感菌株的MIC₉₀为0.5 μg/ml，比对照氟喹诺酮类药物低2至8倍。贝西沙星对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和环丙沙星不敏感的葡萄球菌的抗菌活性优于其他氟喹诺酮类药物。[1]
对于革兰氏阴性需氧菌：鲍曼不动杆菌MIC₅₀/MIC₉₀ = 1/32 μg/ml；钙不动杆菌0.5/16；洛氏不动杆菌0.25/16；弗氏柠檬酸杆菌0.25/4；科氏梭菌 0.06/0.25；产气肠杆菌 0.25/8；阴沟肠杆菌 0.12/2；环丙沙星敏感流感嗜血杆菌 0.015/0.03；环丙沙星不敏感流感嗜血杆菌 0.5/2；产酸克雷伯菌 0.12/1；肺炎克雷伯菌 0.25/4；嗜肺军团菌 0.03/0.03；卡他莫拉菌 0.03/0.03；摩根氏摩根菌 0.12/4；脑膜炎奈瑟菌 0.008/0.015；奇异变形杆菌 0.25/16；普通变形杆菌 0.12/0.25；对环丙沙星敏感的铜绿假单胞菌 1/4；对环丙沙星不敏感的铜绿假单胞菌 16/64；粘质沙雷氏菌 0.25/1；对左氧氟沙星敏感的嗜麦芽窄食单胞菌 1/4；对左氧氟沙星不敏感的嗜麦芽窄食单胞菌 16/64。对于对环丙沙星不敏感的流感嗜血杆菌分离株，贝西沙星的活性比其他氟喹诺酮类药物高 8 至 32 倍。[1]
对厌氧菌：脆弱拟杆菌 MIC₅₀/MIC₉₀ = 0.5/1 μg/ml；产气荚膜梭菌 0.25/0.25；梭杆菌属 0.25/1；消化链球菌属 0.25/0.5；普雷沃氏菌属 1/4；痤疮丙酸杆菌 0.25/0.25。贝西沙星和莫西沙星是抗厌氧菌活性最强的药物。[1]
贝西沙星的体外抗菌活性已得到广泛研究。贝西沙星对革兰氏阳性菌的最低抑菌浓度（MIC₉₀）值分别为：甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）0.06-0.25 μg/mL，甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）0.25-0.5 μg/mL，肺炎链球菌0.03-0.12 μg/mL，化脓性链球菌0.06-0.25 μg/mL。对革兰氏阴性菌的MIC₉₀值分别为：流感嗜血杆菌0.03-0.12 μg/mL，卡他莫拉菌0.03-0.06 μg/mL，大肠杆菌0.12-0.5 μg/mL。贝西沙星是目前最有效的抗革兰氏阳性菌和厌氧菌的氟喹诺酮类药物之一，其对大多数革兰氏阴性菌的活性与其他氟喹诺酮类药物相当。该化合物对常见眼部病原体的最低抑菌浓度（MIC₉₀）远低于泪液中可达到的浓度（0.6%混悬液的浓度约为1000-2000 μg/mL），从而确保了临床疗效。贝西沙星与其他氟喹诺酮类药物的交叉耐药性较低，因此对环丙沙星或左氧氟沙星耐药菌株也有效。

贝西沙星的体内活性已在细菌性结膜炎动物模型和临床研究中得到证实。在由金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌或流感嗜血杆菌引起的兔结膜炎模型中，局部应用0.6%贝西沙星眼用混悬液可使细菌计数降低3-4个log10值，与赋形剂对照组相比。临床研究表明，每日三次、连续5-7天使用0.6%贝西沙星眼用混悬液治疗细菌性结膜炎患者，临床治愈率达80-90%，微生物清除率达85-95%。该化合物对氟喹诺酮类耐药菌株的活性已在体外和体内得到证实。贝西沙星在角膜炎和眼内炎动物模型中也显示出疗效，但其主要临床适应症是结膜炎。该化合物优异的角膜渗透性和持续的泪液浓度有助于其发挥临床疗效。

按照CLSI（临床和实验室标准协会）指南，采用以下方案进行贝西沙星体外抗菌药物敏感性试验：将分离的细菌接种于合适的琼脂培养基上（例如，除嗜血杆菌以外的细菌接种于Mueller-Hinton琼脂，嗜血杆菌接种于巧克力琼脂）。用无菌生理盐水制备细菌悬液，使其浊度达到0.5 McFarland标准（约1-2 × 10⁸ CFU/mL）。将悬液进一步稀释100倍于Mueller-Hinton肉汤，最终接种浓度约为5 × 10⁵ CFU/mL。在96孔微量滴定板中，用Mueller-Hinton肉汤对贝西沙星进行两倍系列稀释，最终浓度范围为0.008至16 μg/mL。将细菌悬液加入各孔中，并将培养板置于35-37°C培养16-20小时（嗜血杆菌培养24小时）。最小抑菌浓度（MIC）定义为完全抑制可见细菌生长的最低化合物浓度。每次实验均包含质控菌株（例如，金黄色葡萄球菌ATCC 29213、大肠杆菌ATCC 25922、肺炎链球菌ATCC 49619、流感嗜血杆菌ATCC 49247）以验证检测方法的有效性。

对于使用氟喹诺酮类药物（如贝西沙星）进行的体外细胞试验，通常采用以下方案：将人角膜上皮细胞 (HCEC) 或其他眼部细胞系在 37°C、5% CO₂ 的条件下，于适宜的培养基中培养。将细胞以每孔 5,000-10,000 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并使其过夜贴壁。将贝西沙星溶解于 DMSO 中，并用培养基稀释至终浓度为 0.1 至 1000 μg/mL（终浓度 DMSO ≤ 0.1%）。细胞处理 24-72 小时后，使用 MTT 或 CellTiter-Glo 法检测细胞活力，以确定 CC50（50% 细胞的细胞毒性浓度）。选择性指数 (SI) 的计算公式为 CC50/MIC。为评估促炎作用，用贝西沙星处理细胞，并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞因子（IL-6、IL-8、TNF-α）的释放。为评估伤口愈合，进行划痕实验：在融合的角膜上皮细胞单层上划痕，并在有或无化合物存在的情况下测量伤口愈合速度。为评估细胞摄取，用荧光标记的贝西沙星类似物处理细胞，并通过流式细胞术或共聚焦显微镜测量荧光强度。

贝西沙星体内动物研究采用以下通用方案：使用新西兰白兔（2-3 kg）进行疗效研究。通过将金黄色葡萄球菌或肺炎链球菌悬液（10⁷-10⁸ CFU）滴入一只眼睛的结膜囊内诱导细菌性结膜炎。感染24小时后，每天三次，每次使用0.6%贝西沙星滴眼液或赋形剂（每次1滴，35 μL），持续5-7天。每日记录结膜炎的临床症状（结膜充血、分泌物、水肿）。在不同时间点采集结膜拭子进行定量细菌培养。研究结束时，处死兔子，并采集结膜组织进行组织病理学检查和细菌计数。在药代动力学研究中，给药后不同时间点使用滤纸条收集泪液，并通过高效液相色谱法（HPLC）或液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定泪液中贝西沙星的浓度。也可收集房水和玻璃体液样本用于眼部渗透研究。

ADME/药代动力学：在人体单次局部滴用0.6%盐酸贝西沙星眼用混悬液后，泪液中贝西沙星的平均浓度范围为：给药后10分钟为610 μg/ml，给药后24小时为1.6 μg/ml。[1]
贝西沙星的药代动力学特性以其眼用给药途径为特征。单次滴用0.6%贝西沙星眼用混悬液后，泪液中的浓度在1小时内达到约1000-2000 μg/mL，并至少在12-24小时内保持在常见眼部病原体的最低抑菌浓度(MIC₉₀)以上。该化合物具有优异的角膜渗透性，在房水中的浓度可达约0.1-0.5 μg/mL，仍高于许多病原体的最低抑菌浓度（MIC）。局部眼用给药后，全身吸收极少，血浆浓度通常低于1 ng/mL，从而最大限度地减少了全身副作用。在兔眼中，该化合物在泪液中的半衰期约为2-4小时。该化合物主要通过泪液引流和鼻泪管清除排出体外。在人体中，观察到类似的药代动力学特征，泪液中药物浓度维持稳定，因此可以每日给药两次或三次。

贝西沙星的毒性特征有利于眼科应用。临床前研究表明，0.6%贝西沙星眼用混悬液在兔和犬中连续给药长达28天后，未显示明显的眼毒性。该化合物不会引起明显的角膜上皮损伤或延缓伤口愈合，这优于其他一些氟喹诺酮类药物。临床研究显示，最常见的不良反应轻微且短暂，包括结膜刺激、眼红、眼痛和视力模糊。严重不良反应罕见。由于局部用药后全身吸收极少，贝西沙星不具有明显的全身毒性。临床应用已充分证实该化合物在儿童和成人中的安全性。已知对氟喹诺酮类药物过敏的患者不建议使用贝西沙星。与所有氟喹诺酮类药物一样，全身用药有可能导致肌腱断裂和软骨损伤，但局部眼用则无需担心这些问题。

Ophthalmology.2009 Sep;116(9):1615-1623.e1.;Antimicrob Agents Chemother.2009 Aug;53(8):3552-60.

盐酸贝西沙星是贝西沙星的盐酸盐形式，贝西沙星是一种合成的第四代氟喹诺酮类抗生素，具有广谱抗菌活性。给药后，贝西沙星靶向并结合细菌DNA促旋酶（一种对细菌DNA复制、转录和修复至关重要的酶）和细菌拓扑异构酶IV（一种对细菌细胞分裂过程中染色体DNA分配至关重要的酶），从而抑制DNA复制、转录、修复和细胞分裂。
另见：贝西沙星（含活性成分）。

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补充信息：盐酸贝西沙星是一种新型8-氯氟喹诺酮类药物，已获准用于局部治疗细菌性结膜炎。先前的遗传学和生物化学研究表明，贝西沙星对DNA促旋酶和拓扑异构酶IV的双重靶向作用相对平衡，且体外自发耐药率较低。贝西沙星对耐氟喹诺酮类菌株（例如，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)、环丙沙星不敏感的肺炎链球菌和流感嗜血杆菌）的抗菌活性增强，表明在其他氟喹诺酮类药物无效的情况下，贝西沙星可能具有抗菌作用。临床试验表明，0.6% 贝西沙星眼用混悬液具有良好的安全性和有效性。[1]
盐酸贝西沙星（CAS 编号：405165-61-9）是一种第四代 8-氯氟喹诺酮类抗生素，配制成 0.6% 眼用混悬液（Besivance®），用于治疗细菌性结膜炎。其分子式为 C19H21ClFN3O3·HCl，分子量为 430.30 g/mol。它对革兰氏阳性菌和厌氧菌均有效，由博士伦公司研发。未来的研究可以探索其在其他眼部感染中的潜力，开发新的制剂以提高眼部生物利用度和给药便利性，并研究其对新出现的耐药菌株的活性。

C19H21CLFN3O3.HCL

430.3

429.102

C, 53.03; H, 5.15; Cl, 16.48; F, 4.42; N, 9.77; O, 11.15

405165-61-9

Besifloxacin;141388-76-3

10224595

solid powder

607ºC at 760 mmHg

>210ºC (dec.)

320.9ºC

4.712

88.56

3

7

3

28

656

1

ClC1C(=C(C([H])=C2C(C(C(=O)O[H])=C([H])N(C2=1)C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)F)N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]([H])(C1([H])[H])N([H])[H].Cl[H]

PMQBICKXAAKXAY-HNCPQSOCSA-N

InChI=1S/C19H21ClFN3O3.ClH/c20-15-16-12(18(25)13(19(26)27)9-24(16)11-4-5-11)7-14(21)17(15)23-6-2-1-3-10(22)8-23;/h7,9-11H,1-6,8,22H2,(H,26,27);1H/t10-;/m1./s1

(+)-7-[(3R)-3-aminohexahydro-1H-azepin-1-yl]-8-chloro-1- cyclopropyl-6-fluoro-4-oxo-1,4-dihydroquinoline-3-carboxylic acid hydrochloride.

BOL 303224a; BOL-303224a; BOL303224a; BOL-303224-A; SS734; SS-734; SS 734; Besifloxacin HCl; Besivance.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~1 mg/mL (~2.32 mM)
H2O : ~0.1 mg/mL (~0.23 mM)
Ethanol : < 1 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。