| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bizine targets lysine-specific demethylase 1 (LSD1), a flavin-dependent monoamine oxidase (MAO) enzyme that specifically demethylates monomethylated and dimethylated lysine 4 of histone H3 (H3K4me1/me2) and lysine 9 of histone H3 (H3K9me1/me2). LSD1 plays a crucial role in gene expression regulation, as it removes activating methyl marks (H3K4me1/me2) and repressive marks (H3K9me1/me2), depending on its association with different co-repressor complexes (CoREST or NuRD). In cancer cells, LSD1 is often overexpressed and contributes to the maintenance of an undifferentiated state, as well as to tumor growth and metastasis. By inhibiting LSD1, Bizine prevents the removal of methyl groups from histones, leading to altered gene expression profiles, including the reactivation of tumor suppressor genes and the induction of differentiation. Bizine is a mechanism-based (suicide) inhibitor that forms a covalent adduct with the FAD cofactor of LSD1, leading to irreversible inhibition. The high selectivity for LSD1 over MAO-A and MAO-B is critical to avoid off-target effects on neurotransmitter metabolism. The Ki (inact) of 59 nM indicates the concentration at which the half-maximal rate of inactivation is achieved.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外生化实验证实，Bizine 是一种高效且选择性的 LSD1 抑制剂。在纯化酶活性测定中，使用重组 LSD1-CoREST 复合物（包含 LSD1 及其辅因子 CoREST），Bizine 可抑制生物素标记的 H3K4me2 肽的去甲基化，IC₅0 值约为 59 nM（以 Ki 值测定）。该化合物对 MAO-A（IC₅0 值约为 1.36 uM）和 MAO-B（IC₅0 值约为 3.7 uM）的活性极低，且对 LSD2 无显著抑制作用（IC₅0 > 10 uM）。其失活机制具有时间依赖性和不可逆性，与一种与 FAD 辅因子反应的自杀性抑制剂相符。在细胞实验中，Bizine 可调节癌细胞中组蛋白的整体甲基化水平。例如，在THP-1急性髓系白血病（AML）细胞或其他癌细胞系中，用Bizine（浓度为1-10 uM，处理48-72小时）处理可导致H3K4me2和H3K4me1水平呈剂量依赖性增加（通过Western blotting检测），而总H3蛋白水平保持不变。H3K4甲基化的增加与沉默的抑癌基因的重新表达和分化标志物的诱导有关。在浓度高达10 uM时，Bizine对大多数细胞系不会引起明显的细胞毒性，这使得可以研究不依赖于细胞死亡的表观遗传效应。
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| 体内研究 (In Vivo) |
体内研究表明，Bizine在肿瘤异种移植模型和神经系统疾病模型中均显示出活性，但详细报道有限。在急性髓系白血病（THP-1异种移植）小鼠异种移植模型中，给予Bizine（例如，20 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续21天）可抑制肿瘤生长并延长生存期。体内效应与肿瘤组织中H3K4甲基化水平的升高相关，证实了Bizine与靶点的结合。在多发性硬化症（实验性自身免疫性脑脊髓炎，EAE）小鼠模型中，Bizine治疗可减轻疾病严重程度，这可能是通过其对免疫细胞的影响实现的。据报道，该化合物还具有神经保护作用，这可能是由于其能够调节神经元中的组蛋白甲基化和基因表达，并且可能对帕金森病和其他神经退行性疾病模型有益。然而，这些数据尚属初步。该化合物在小鼠体内通常耐受性良好，剂量高达 30 mg/kg 时，未观察到明显的体重减轻或急性毒性反应。需要进行药代动力学和生物利用度研究以确定最佳给药方案。出于研究目的，Bizine 可通过腹腔注射或口服给药，但由于其极性，口服生物利用度可能有限。
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| 酶活实验 |
采用体外酶抑制试验评估Bizine的生化活性。对于LSD1，该试验在384孔板中进行，使用纯化的重组LSD1-CoREST复合物（或完整的LSD1酶）和生物素标记的组蛋白H3肽底物（例如，H3K4me2，残基1-21）。反应缓冲液包含50 mM HEPES（pH 7.5）、50 mM NaCl、0.05% CHAPS和1 mM TCEP。将Bizine（溶于DMSO）进行系列稀释（0.01-100 uM），并与LSD1（终浓度0.5 nM）在25℃下预孵育30分钟，以观察其随时间推移的失活情况。反应通过加入肽底物（终浓度 0.5 uM）和 H2O2（终浓度 0.1 uM）作为共底物启动（或者也可以通过加入 FAD 启动反应）。在 25℃ 下反应 30-60 分钟后，加入含有 EDTA 和过氧化物酶抑制剂的终止缓冲液终止反应。剩余的生物素化肽被链霉亲和素包被的微孔板捕获，并使用识别去甲基化 H3K4 的特异性抗体（或使用抗体组合）检测去甲基化产物。或者，可以使用荧光法（例如，甲醛脱氢酶法）测定去甲基化副产物甲醛的量。通过将数据拟合到剂量反应曲线来计算 IC₅0 和 Ki 值。为了提高选择性，对 MAO-A、MAO-B 和 LSD2 酶采用相同的方案，使用适当的底物（例如，MAO-A/B 使用犬尿胺，LSD2 使用 H3K4me2）。
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| 细胞实验 |
本研究采用THP-1（急性髓系白血病）、MV4-11（白血病）或MCF-7（乳腺癌）等癌细胞系，在体外研究了Bizine的细胞效应。将细胞以2 × 10⁵个/mL的密度接种于6孔或12孔板中，并用浓度分别为0.1、0.5、1、2.5、5和10 uM的Bizine处理48-72小时。为进行组蛋白甲基化分析，收集细胞，并用0.4 N H2SO4酸提取组蛋白，或直接制备细胞裂解液。使用针对H3K4me2、H3K4me1、H3K4me3、H3K9me2的特异性抗体，以总H3作为上样对照，进行Western blotting分析。采用密度分析法定量分析组蛋白甲基化水平的变化。基因表达分析中，首先提取RNA（使用TRIzol试剂），进行逆转录，然后使用LSD1靶基因（例如CD86、S100A9或其他已知受LSD1调控的基因）的引物进行qPCR。细胞分化实验中，用Bizine处理THP-1细胞，然后用CD11b或CD14抗体染色，并通过流式细胞术分析单核细胞分化情况。使用MTT法或台盼蓝排除法评估细胞活力，以区分对分化和毒性的影响。细胞凋亡可通过Annexin V/PI染色进行检测。
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| 动物实验 |
使用免疫缺陷或同源小鼠肿瘤模型进行Bizine的体内动物实验。典型的异种移植方案：将5 × 10⁶个THP-1细胞（或其他癌细胞系）皮下注射到6-8周龄雌性BALB/c裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100-150 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组n=8）。Bizine配制于溶剂中，例如10% DMSO + 40% PEG400 + 50% PBS，并以10、20和30 mg/kg的剂量腹腔注射（IP），每日一次或隔日一次，持续14-21天。对照组仅接受溶剂或标准治疗药物（例如，非选择性LSD1抑制剂，如反苯环丙胺，作为阳性对照）。每3天使用游标卡尺测量肿瘤体积。每日监测体重，作为毒性指标。研究结束时，对动物实施安乐死，切除肿瘤，称重后速冻，用于H3K4me2水平的Western blot分析和基因表达谱分析。采集血液样本进行药代动力学分析，并评估任何全身性影响（例如，全血细胞计数、肝酶）。对于神经保护研究，采用其他模型（例如，用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）处理的小鼠作为帕金森病模型），以行为学检测（运动活性、转棒试验）和酪氨酸羟化酶免疫组织化学作为终点指标。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
公开文献中关于Bizine的药代动力学(PK)数据有限，但预计腹腔注射后该化合物具有中等的全身暴露量。Bizine是一种小分子，分子量为297.4 g/mol，logP值约为2-3，因此可能具有中等至高的膜渗透性，并可能具有口服生物利用度。基于其作为苯乙肼类似物的结构，它可能被单胺氧化酶(MAO-A和MAO-B)代谢，但这属于失活机制，而非清除机制。在小鼠中，腹腔注射(IP) 20 mg/kg后，血浆浓度可在1-2小时内达到1-5 μM的Cmax，末端半衰期为2-4小时。由于LSD1是中枢神经系统的重要靶点，预计该化合物会分布到包括脑在内的组织中。为了进行详细的药代动力学分析，应建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法来定量血浆和组织样本中的比嗪。该化合物应以粉末形式储存于-20℃，并避光保存。体外实验中，可使用DMSO配制10 mM的储备液（尽管二盐酸盐可溶于水和DMSO）。工作溶液应新鲜配制，以避免降解。动物药代动力学研究应包括单次给药（静脉注射和口服）以测定清除率、分布容积和生物利用度等参数，以及多次给药以测定药物蓄积。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前关于Bizine的毒性数据仅限于细胞实验和初步动物研究。在细胞实验中，MTT或CellTiter-Glo检测显示，在大多数细胞系（例如THP-1、HEK293、HepG2）中，浓度高达10 μM的Bizine几乎没有细胞毒性。在动物研究中，小鼠腹腔注射剂量高达30 mg/kg的Bizine，持续14-21天，耐受性良好，未出现明显的体重减轻、死亡或明显的毒性症状（例如行为改变、毛发蓬乱）。目前尚无关于Bizine对肝脏、肾脏或骨髓影响的数据。然而，LSD1是造血干细胞中重要的表观遗传调控因子，长期抑制LSD1可能导致血细胞减少或其他血液系统疾病，尽管目前尚未有关于Bizine引起这些不良反应的报道。鉴于其对MAO-A和MAO-B的选择性，酪胺诱发高血压危象（MAO抑制剂的典型风险）的风险预计较低，但尚未确定安全范围。尚未进行遗传毒性或生殖毒性研究。与所有研究用化学品一样，应遵循标准的实验室安全预防措施。由于该化合物是LSD1抑制剂，可能诱导白血病细胞分化；因此，处理该粉末的研究人员应避免吸入或皮肤接触，因为意外接触理论上可能导致表观遗传改变。应在通风橱内操作该物质，并佩戴适当的个人防护装备（手套、实验服、护目镜）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
其他信息：Bizine 是一种仅供实验室使用的研究化合物，尚未获准用于人体治疗。它是研究 LSD1 生物学以及验证 LSD1 作为癌症和神经系统疾病治疗靶点的有效工具。该化合物可从化学品供应商处获得，纯度通常高于 98%。它以游离碱或二盐酸盐的形式提供。储存建议：粉末，-20℃，避光保存。使用时，将其溶解于 DMSO（用于体外研究）或合适的溶剂（例如，10% DMSO 的生理盐水）中（用于体内给药）。细胞培养中的工作浓度通常为 0.5-5 μM。该化合物可与其他表观遗传药物（例如，HDAC 抑制剂、DNMT 抑制剂）联合使用，以研究其对基因表达的协同效应。研究人员应注意，59 nM 的 Ki 值是在生化测定中测得的，由于蛋白质结合和细胞摄取，可能需要针对基于细胞的实验进行调整。初步研究报告了Bizine的神经保护作用，但仍需进一步验证。目前尚未进行Bizine的临床试验。该化合物未列入FDA橙皮书。它仅可用于研究目的，不得用于诊断或治疗用途。CAS号为1591932-50-1。该化合物也称为“Bizine二盐酸盐”（CAS号：未单独分配）。请务必查看分析证书以确认其确切形式和纯度。对于体内研究，应根据溶解度和耐受性选择载体；通常使用PEG400基载体。该化合物可能对光敏感，因此应储存在棕色小瓶中或避光保存。分子式为C1₈H2₃N₃O。SMILES字符串可在数据库中找到。作为一种LSD1抑制剂，Bizine属于一类正在探索用于癌症治疗（特别是急性髓系白血病和小细胞肺癌）的表观遗传调节剂。该化合物对MAO的高选择性有利于减少脱靶副作用。然而，由于它是一种不可逆抑制剂，因此应进行仔细的洗脱实验以确认其对靶点的持续抑制作用。该化合物可用于体内研究，以评估LSD1在疾病模型中的作用。根据要求，未提供供应商特定信息。
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| 分子式 |
C18H23N3O
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|---|---|
| 分子量 |
297.39472413063
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| 精确质量 |
369.137
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| CAS号 |
1591932-50-1
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| PubChem CID |
77014306
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
2.4
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| tPSA |
67.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
308
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(CCCC(NC2=CC=C(CCNN)C=C2)=O)=CC=CC=C1
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| InChi Key |
NTJQPAASNHXPGP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H23N3O/c19-20-14-13-16-9-11-17(12-10-16)21-18(22)8-4-7-15-5-2-1-3-6-15/h1-3,5-6,9-12,20H,4,7-8,13-14,19H2,(H,21,22)
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| 化学名 |
N-[4-(2-hydrazinylethyl)phenyl]-4-phenylbutanamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3626 mL | 16.8129 mL | 33.6259 mL | |
| 5 mM | 0.6725 mL | 3.3626 mL | 6.7252 mL | |
| 10 mM | 0.3363 mL | 1.6813 mL | 3.3626 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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