| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PRMT5 (binds to the PRMT5-PBM interface; covalent inhibitor targeting Cys278; FP competition IC50 at 40 min = 13.8 μM; kinact/KI = 244 M⁻¹sec⁻¹; Kinact = 0.715 min⁻¹; KI = 49 μM) [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
在荧光偏振 (FP) 竞争实验中，BRD0639 表现出随时间推移将荧光标记的 RIOK1 PBM 肽从 PRMT5:WDR77 复合物中置换出来，IC50 值从早期 >100 μM 降至 40 分钟时的 13.8 μM [1]。
在 GSH 反应性实验中，BRD0639 的半衰期 (T½) 为 916 分钟，表明其固有反应性低于二氯类似物（例如化合物 6，T½ 为 31 分钟）[1]。 通过完整质谱法进行的动力学分析（kinact/KI 实验）得出 kinact/KI 比值为 244 M⁻¹sec⁻¹，其中 kinact = 0.715 min⁻¹，KI = 49 μM [1]。 在 PRMT5 C278A 突变体中， BRD0639在FP竞争中未显示活性（IC50 > 100 μM，而野生型为0.6 μM），证实其与Cys278共价结合[1]。 表面等离子共振(SPR)显示，PRMT5与BRD0639预孵育后，与全长pICln的结合显著降低（DMSO处理组的KD为32 nM，化合物处理组为非特异性结合），表明PRMT5-pICln相互作用被不可逆地破坏[1]。 相关类似物（化合物6）与PRMT5结合的冷冻电镜结构（PDB 7M05）揭示了其结合模式；预计 BRD0639 的结合方式类似，氯哒嗪与 Cys278 形成共价键，吡啶乙基侧链折叠回来与 Tyr286 和 Phe243 形成 π-π 堆积 [1]。 |
| 酶活实验 |
荧光偏振 (FP) 竞争性测定：200 nM PRMT5:WDR77 原聚体，10 nM KU560 标记的 RIOK1 衍生 PBM 肽，50 mM HEPES pH 7.4，100 mM NaCl，0.5 mM TCEP，0.01% Tween 20。化合物进行系列稀释，室温孵育 40 分钟，使用酶标仪（罗丹明或 Bodipy TMR 滤光片组）测量 FP 值。IC50 值计算如下 [1]。
GSH 反应性测定：将 10 μM 化合物与 5 mM 谷胱甘肽 (GSH) 在 37°C 的 PBS pH 7.4 缓冲液中孵育。在不同时间点（0-1440 分钟），取等分试样用含内标的冷乙腈淬灭反应，并通过 LC-MS/MS 对剩余的母体化合物进行定量。半衰期 (T½) 采用一级动力学计算 [1]。 完整质谱法测定 Kinact/KI：将纯化的 PRMT5:WDR77 (50 nM) 与不同浓度的化合物（12 点稀释）在反应缓冲液（10 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM TCEP）中孵育。在不同时间点（0-60 分钟），取等分试样用 0.5% 甲酸淬灭反应。使用 MRM（多反应监测）模式，通过 LC-MS/MS 对未修饰的 PRMT5 进行定量，监测特定电荷态（PRMT5 的 m/z 为 855.0→854.9，z=85）。将未修饰部分的比例随时间变化作图，并通过拟合不可逆失活方程[1]确定激酶活性(kinact)和激酶抑制(KI)。 表面等离子共振(SPR)：将PRMT5与2 μM BRD0639或DMSO预孵育过夜，然后固定在芯片上。以全长pICln作为分析物进行滴定(0-1000 nM)。结合响应拟合到单一位点总结合和非特异性结合模型[1]。 冷冻电镜(Cryo-EM)：将PRMT5:WDR77复合物(5 μM)与25 μM化合物6(一种结构类似的化合物)和20 μM JNJ-64619178(催化抑制剂)共孵育过夜。通过尺寸排阻法纯化复合物，浓缩至10 mg/ml，并滴加到载网上。使用配备K2检测器的Titan Krios显微镜采集数据。在 cisTEM 中处理了 2169 部电影，得到了 2.39 Å 分辨率的图谱（PDB 7M05）[1]。 |
| 细胞实验 |
在 Expi293 细胞中进行靶标结合分析：将过表达 HA 标记的 WDR77 和未标记的 PRMT5 的细胞用指定浓度 (0-30 μM) 的 BRD0639 处理 6 小时。用抗 HA 琼脂糖免疫沉淀 PRMT5 复合物，用 HA 肽洗脱，并通过完整质量 LC-MS 分析来定量 PRMT5 加合物的形成。加合物形成的 EC50 约为 3 μM，最大标记率约为 40% [1]。
在透化细胞中进行 NanoBiT PRMT5-RIOK1 互补试验：将稳定表达 SmBiT-PRMT5 和 LgBiT-RIOK1 的 HEK293T 细胞用化合物处理 40 分钟，然后用缓冲液（10% 甘油、50 mM Tris-HCl、150 mM KCl、2 mM EDTA、0.1% NP40）裂解。加入 Nano-Glo 底物并测量发光值。BRD0639 的 IC50 为 7.5 μM [1]。 在完整细胞中进行 NanoBiT 试验：将相同的细胞在培养基中用化合物处理 40 分钟，然后加入 Nano-Glo 活细胞底物并测量发光值。 BRD0639 的 IC50 为 16 μM，而无活性的类似物 30 的 IC50 > 100 μM [1]。 对称精氨酸二甲基化 (SDMA) 的蛋白质印迹分析：将 HCT116 MTAP-/- 细胞用 25 μM BRD0639 处理 24 小时（12 小时更换培养基并再次处理）。用抗 SDMA 抗体 (CST13222) 对细胞裂解液进行印迹分析。BRD0639 降低了部分蛋白质上的 SDMA 水平，重现了 PBM 结合位点基因破坏（PRMT5 ADA 突变体）的效果 [1]。 使用无活性类似物 30（化合物 30，一种 5-氯区域异构体）进行的对照实验表明，BRD0639 对 SDMA 没有影响，证实了其靶向活性 [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外GSH反应性：BRD0639在5 mM GSH中的半衰期为916分钟，表明其亲电反应性低于二氯类似物（例如化合物6，半衰期为31分钟）。未见急性毒性数据报道[1]。
未见体内毒性数据[1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BRD0639 是一种首创的共价 PBM 竞争性 PRMT5 抑制剂。它通过与催化位点远端表面凹槽结合，选择性地靶向 PRMT5 与其底物衔接蛋白（pICln、Riok1）之间的蛋白-蛋白相互作用。该化合物在初始非共价结合后，通过单氯哒嗪基团与 PRMT5 的 Cys278 形成共价键。从二氯哒嗪先导化合物（化合物 1）优化而来，降低了其固有反应活性（GSH t½ 从 31 分钟延长至 916 分钟），同时保持了效力（FP IC50 为 13.8 μM）。BRD0639 可破坏细胞内的 PRMT5-RIOK1 复合物（IC50 为 7.5-16 μM），并降低部分底物的对称二甲基化，从而模拟 PBM 结合位点基因敲除的表型。与阻断所有底物的催化型PRMT5抑制剂不同，BRD0639选择性地抑制PBM依赖性甲基化，尤其影响剪接相关功能。该化合物可作为研究PBM依赖性PRMT5活性的化学探针，并可能为非催化型PRMT5抑制剂的开发提供信息。目前尚未提及FDA批准或临床试验状态[1]。
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 化学名 |
(S)-2-(4-chloro-6-oxopyridazin-1(6H)-yl)-N-(4-methyl-3-(N-(2-(pyridin-2-yl)ethyl)sulfamoyl)phenyl)propanamide
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| 别名 |
BRD 0639BRD0639 BRD-0639
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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