Brincidofovir (CMX001, HDP CDV, HDPCDV)   中文名称: 布罗福韦酯

Antiviral; DNA polymerase
Viral DNA polymerase. Brincidofovir is a prodrug of cidofovir. After oral administration, it is converted intracellularly to cidofovir, which is then phosphorylated to its active diphosphate form. Cidofovir diphosphate selectively inhibits viral DNA polymerase, leading to the termination of viral DNA chain elongation.

CMX001 是一种口服活性脂质缀合物，其体外抑制单纯疱疹病毒 (HSV) 复制的活性比阿昔洛韦或西多福韦高 50 倍。[2]
21 世纪，我们面临着天然或重组的痘苗病毒 (VARV) 和痘病毒 (MPXV) 被用作生物武器的潜在威胁，以及人类痘病毒的出现。这种情况需要使用抗病毒药物进行治疗和预防。西多福韦是一种获批用于治疗艾滋病患者巨细胞病毒性视网膜炎的抗病毒药物，对痘病毒有效，但必须静脉注射，且具有肾毒性。CMX001 (HDP-CDV) 是西多福韦的醚脂类似物，对包括痘病毒在内的多种 DNA 病毒具有强效抗病毒活性，口服生物利用度高，肾毒性极低。 [1]
Brincidofovir 对多种双链 DNA 病毒具有强大的体外活性，包括 CMV、腺病毒、单纯疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒和 BK 病毒。由于其细胞摄取增加，其在许多细胞类型中的抗病毒活性显著高于 cidofovir。

CMX001 和 CDV 在保护小鼠免于感染高剂量鼠痘病毒（10,000 x LD50，经鼻内途径或小颗粒气溶胶途径）后死亡方面具有相同的疗效。在鼻内感染 (100-200) x LD50 鼠痘病毒后，先给予 CMX001 10 mg/kg，然后每隔一天给予 2.5 mg/kg，持续 14 天，可有效保护小鼠免于死亡和体重下降。此外，即使延迟至感染后 5 天给药，也能完全避免死亡，而此时未治疗的对照组小鼠的死亡时间比给药时间早 3-4 天。该治疗窗口相当于在普通天花皮疹期进行干预。[1]
这些研究比较了 CMX001 与阿昔洛韦在经鼻内接种 HSV 1 型或 2 型的 BALB/c 小鼠中的疗效。CMX001 以 5 至 1.25 mg/kg 的剂量每日口服一次，即使在病毒接种后 48-72 小时延迟治疗，也能有效降低死亡率。从接受 CMX001 治疗的小鼠获得的器官样本中，每克组织中的噬斑形成单位滴度比接受阿昔洛韦治疗的小鼠低 3-5 log(10)，其中包括大脑的 5 个不同区域。口服 (14)C-CMX001 后，在小鼠的中枢神经系统中检测到了药物相关的放射性。这些研究表明，CMX001能够穿透血脑屏障，是播散性感染和中枢神经系统感染中HSV复制的有效抑制剂，并且优于阿昔洛韦[2]。
在体内，brincidofovir已在病毒感染动物模型中显示出疗效。研究表明，它能够降低CMV、腺病毒和其他感染模型中的病毒载量并提高生存率。临床前和临床研究均证实了其良好的口服生物利用度和较低的肾毒性。

本研究使用的HSV-1毒株为E-377，HSV-2毒株为MS。这些病毒的来源此前已有报道。HFF细胞取自新鲜新生儿包皮，作为原代培养物制备。病毒池在原代兔肾细胞中制备并定量，用于体外和体内实验。两种细胞系的培养基均为含Earle氏盐的MEM培养基，其中含有10%胎牛血清（FBS）、2μM L-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和25 mM庆大霉素[2]。
体外酶活性测定中，布林西多福韦的活性测定包括测量病毒DNA聚合酶活性的抑制情况。将该酶与DNA模板、核苷酸底物和活性代谢物西多福韦二磷酸盐一起孵育。通过测量放射性标记核苷酸的掺入量来评估DNA合成的抑制情况。

BSC-1细胞（ATCC CCL 26）培养于含10%胎牛血清III、2 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的Eagle氏最低必需培养基（MEM）中。ECTV MOS株（ATCC VR-1374）的噬斑纯化分离株MOS-3-P2在非洲绿猴肾细胞系BSC-1中进行扩增（Chen等，1992）。病毒纯化采用蔗糖垫层法，具体方法见文献（Moss和Earl，1998）。病毒感染性测定方法见文献（Wallace和Buller，1985）。简而言之，将病毒悬液用PBS + 1%血清进行系列稀释，在37℃下吸附于单层细胞1小时，然后覆盖一层含1%羧甲基纤维素的DMEM + 5%胎牛血清III的悬液。在37℃下培养4天后，观察病毒噬斑，并通过向每个孔中加入0.5 ml 0.3%结晶紫/10%甲醛溶液来灭活病毒[1]。
brincidofovir的细胞活性检测包括用该化合物处理病毒感染的细胞并测量病毒复制。细胞感染病毒后，用不同浓度的brincidofovir处理。通过测量病毒DNA或蛋白质水平，或通过噬斑减少试验来评估病毒复制。

抗病毒化合物[1]
在每次实验前，将CDV和CMX001溶解于无菌蒸馏水中，新鲜配制溶液，并在实验过程中储存于4℃。
气溶胶攻击[1]
使用配备单喷嘴生物气溶胶雾化发生器的鼻腔吸入暴露系统（NOIES），在二级生物安全柜内操作，将悬浮于MEM培养基中的ECTV气溶胶暴露于小鼠。NOIES的运行条件为：主空气压力20 psi，气溶胶室流速1.5 L/min（无二次空气），病毒悬浮液流速0.5 mL/min，系统工作压力相对于外界大气压约为-0.5 V（真空）。通过将气溶胶中病毒浓度（CA，以 PFU 表示）乘以给定体重小鼠在暴露时间内呼吸的总空气量（VM），并使用 Guyton 公式（Guyton，1947）计算啮齿动物的分钟通气量，来估算小鼠在暴露过程中吸入的病毒量。由于该公式假设所有病毒均以最佳气溶胶形式存在并被完全吸入，因此所呈现的病毒剂量可能是一个上限值。
鼻内攻击[1]
小鼠通过腹腔注射 0.1 ml/10 g 体重的氯胺酮盐酸盐（9 mg/ml）和赛拉嗪（1 mg/ml）进行麻醉。麻醉后的小鼠仰卧，身体倾斜，使前端与地面呈 45° 角，使用塑料小鼠固定器以确保其姿势正确。将 ECTV 用 PBS 稀释至所需浓度，并缓慢滴入每只小鼠的鼻孔（5 μl/鼻孔）。随后将小鼠留在鼻孔内 2-3 分钟，然后放回笼中。
在暴露于 ECTV 后的指定时间点，对小鼠进行灌胃处理，分别灌胃 0.1 ml 无菌蒸馏水（安慰剂）或含有所需浓度 CMX001 的水。CDV 通过腹腔注射给予小鼠所需剂量。重复上述处理，结果部分均有详细描述。为了测定感染性病毒滴度，在攻毒后第 4、6 和 8 天处死小鼠，并分离肺、脾、肝组织和鼻腔冲洗液。将组织在 PBS（10%，w/v）中研磨，冻融三次，并超声处理 20 秒。通过在 BSC-1 单层细胞上进行滴定来估计组织匀浆中的病毒感染性（PFU/ml）。对于高于检测限 (10² PFU/ml) 的 PFU/ml 值，计算算术平均值。观察剩余小鼠的疾病临床症状（发病率）和死亡率。濒死小鼠被实施安乐死。

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抗病毒化合物[2]
CMX001 悬浮于 0.4% 羧甲基纤维素 (CMC) 中，用于小鼠口服给药。ACV 称重后悬浮于无菌水中，用于小鼠口服治疗。化合物配制成 0.2 ml 的溶液，每日一次 (CMX001) 或每日两次 (ACV) 给药。疗效评估的治疗方案在病毒接种后 24-72 小时开始，连续 7 天通过灌胃法给予小鼠，CMX001 的剂量分别为 5、2.5 和 1.25 mg/kg，每日一次；ACV 的剂量分别为 120、60 或 30 mg/kg，每日两次，间隔约 12 小时。在致病性实验中，病毒接种后24小时开始治疗，连续7天，分别使用5 mg/kg的CMX001或100 mg/kg的ACV。这些剂量是根据死亡率实验的结果选择的。
实验感染[2]
小鼠被手动固定，进行鼻内接种，每只小鼠接种0.04 ml的接种液，其中包含HSV-1（E-377株）或HSV-2（MS株）的近似LD90。在这些研究中，HSV-1的接种量为4.4 × 10⁴ pfu/只小鼠，HSV-2的接种量为1.1 × 10⁵ pfu/只小鼠。在死亡率实验中，动物每天至少评估一次，持续21天；在临床神经症状高峰期，每天评估四次，以便在小鼠死亡前对其进行安乐死。为了比较CMX001和ACV对小鼠靶器官中HSV-1和HSV-2病毒复制的影响，我们对这两种病毒进行了致病机制研究。分别从载体组和药物治疗组中各取3只小鼠，于接种后第1、3、5、7或10天处死，收集肺、肝、脾、肾、嗅球、大脑皮层、脑桥/延髓、间脑、小脑和三叉神经节组织。将各组织样本按组织类型混合，制成10% (w/v) 的匀浆悬液，冷冻保存直至进行病毒检测。病毒滴度通过将组织匀浆接种于HFF细胞上测定，并在孵育3天后计数噬斑。三叉神经节单独收集，并与N',N'-二甲基双乙酰胺共培养于原代兔肾(RK)细胞上，用于检测潜伏病毒，方法如前所述。简而言之，将神经节切碎，置于组织培养细胞单层上，并监测病毒细胞病变效应3周。每周将神经节转移至含有新鲜培养基的新鲜RK细胞上。
布林西多福韦的体内动物研究通常涉及对病毒感染动物模型进行给药。通过测量病毒载量、存活率和疾病的临床症状来评估疗效。该化合物通常口服给药。也可测定药代动力学参数。

吸收、分布和排泄
布林西多福韦片剂的口服生物利用度为13.4%，混悬剂的口服生物利用度为16.8%。口服给药后，布林西多福韦的Cmax和AUCtau分别为480 ng/mL和3400 ng·hr/mL。活性代谢物西多福韦二磷酸的Cmax和AUCtau分别为9.7 pg/10⁶ cells和1200 pg·hr/10⁶ cells。布林西多福韦的血浆峰浓度（Tmax）在给药后约3小时达到，而西多福韦二磷酸的血浆峰浓度在给药后约47小时达到。布林西多福韦主要以代谢物的形式经尿液（约51%）和粪便（约40%）排泄。布林西多福韦的表观分布容积为1230升。
健康成年患者的布林西多福韦表观清除率为44.1升/小时。

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代谢/代谢物
布林西多福韦是西多福韦的前药，因此必须经过一些基本的代谢反应才能发挥其药理活性。进入靶细胞后，布林西多福韦的磷酸二酯键水解为西多福韦，后者随后被磷酸化生成活性成分：西多福韦二磷酸。负责此反应的具体酶尚未确定，但体外研究表明，鞘磷脂磷酸二酯酶在布林西多福韦的初始水解中起主要作用。布林西多福韦有两种主要的非活性代谢物，CMX103 和 CMX064，它们通过末端碳的羧化，随后经多次 CYP 介导的氧化反应和脂肪酸氧化循环生成。这些反应至少部分由 CYP4F2 介导。

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生物半衰期
布林西多福韦及其药理活性代谢物西多福韦二磷酸盐的平均末端半衰期分别为 19.3 小时和 113 小时。
布林西多福韦口服吸收良好，其半衰期支持每周一次给药。它广泛代谢为西多福韦和其他代谢物。该化合物主要经尿液排泄。与静脉注射西多福韦相比，其口服生物利用度高和肾毒性低是其主要优势。

肝毒性
在布林西多福韦用于预防成人和儿童造血干细胞移植（HSCT）后巨细胞病毒和腺病毒感染的预注册临床试验中，布林西多福韦组血清转氨酶升高的发生率（22%）高于安慰剂组（16%），而HSCT后肝酶升高的发生率通常较高。ALT升高超过正常值上限（ULN）5倍的患者比例为1.8%，而安慰剂组为1.4%。在269例接受布林西多福韦治疗的患者中，1例患者因ALT升高超过ULN 10倍而停止治疗。由于布林西多福韦仅给药2或3次（在治疗的第1天和第8天，以及在某些试验中的第21天），ALT和AST升高出现得更早。在同一项试验中，接受布林西多福韦治疗的患者中有6.5%出现轻度至中度血清胆红素升高，而安慰剂组的这一比例为5.9%，这再次反映了造血干细胞移植后患者胆红素升高的高发生率。一项针对健康志愿者的小型研究未观察到肝功能异常。自布林西多福韦获批以来，尚未有符合其适应症的天花感染病例报告。然而，在其获批后不久出现的水痘感染病例促使其被用于这一此前未获批准的适应症。接受布林西多福韦治疗的水痘-带状疱疹病毒感染患者中转氨酶升高较为常见，但这些升高通常无症状、短暂，且不伴有其他症状或胆红素升高。因此，布林西多福韦的总体临床经验有限。尽管有报道称使用该药物后会出现短暂的血清转氨酶升高，但尚未有与布林西多福韦治疗相关的具有临床意义的肝损伤报告。概率评分：D（可能导致具有临床意义的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用布林西多福韦的信息。建议患有天花的人不要进行母乳喂养，因为存在通过直接接触将天花病毒传染给婴儿的风险。此预防措施也可能适用于猴痘。如果乳房附近没有皮肤损伤，并且采取了充分的预防措施来清洁双手、乳房、吸奶器以及任何其他用于喂养婴儿的设备，则可以给婴儿喂食挤出的母乳。在获得更多安全性数据之前，可能更倾向于选择其他药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。

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蛋白结合
布林西多福韦在血浆中的蛋白结合率>99%，但其结合的具体蛋白尚未确定。
布林西多福韦的临床前毒性研究表明，与西多福韦相比，其安全性更高，尤其是在肾毒性方面。然而，也观察到肝毒性和胃肠道毒性。该化合物的安全性已在临床试验中得到评估。

[1].Efficacy of therapeutic intervention with an oral ether-lipid\nanalogue of cidofovir (CMX001) in a lethal mousepox model. Antiviral\nRes. 2008 Jan;77(1):39-49.

[2]. Efficacy of CMX001 against herpes simplex virus infections\nin mice and correlations with drug distributionstudies. J Infect Dis.\n2010 Nov 15;202(10):1492-9.

[3]. CMX001 (1-O-hexadecyloxypropyl-cidofovir) inhibits\npolyomavirus JC replication in human brain progenitor-derived\nastrocytes. Antimicrob Agents Chemother. 2011 May;55(5):2129-36.

[4]. CMX001 to prevent cytomegalovirus disease in\nhematopoietic-cell transplantation. N Engl J Med. 2013 Sep\n26;369(13):1227-36

[5].The lipid moiety of brincidofovir is required for in vitro antiviral activity against Ebola virus. Antiviral Res. 2016 Jan;125:71-8.

药效学
布林西登斯韦的活性成分是西多福韦二磷酸盐，由布林西登斯韦代谢产生，具有极长的作用持续时间，因此可以每周给药一次。布林西登斯韦治疗天花仅需两次给药，分别在第1天和第8天，这似乎可以降低不良反应的风险。研究表明，与安慰剂相比，延长给药时间（即在第1天和第8天多次给药）会增加死亡率，因此应避免使用。布林西登斯韦被认为是一种潜在的人类致癌物，并且已被证实会导致不孕——因此，其使用应仅限于绝对必要的情况。
布林西多福韦 (CMX001) 是核苷酸类似物西多福韦的口服脂质结合物，旨在提高口服生物利用度并降低肾毒性。该药物已研发用于治疗由双链DNA病毒引起的感染，包括巨细胞病毒（CMV）、腺病毒和多瘤病毒。目前已对其用于治疗移植受者巨细胞病毒感染的疗效进行了研究。

C27H52N3O7P

561.69148

561.354

C, 57.73; H, 9.33; N, 7.48; O, 19.94; P, 5.51

444805-28-1

483477

Solid powder

5.592

156.93

3

7

26

38

721

1

NC1=NC(N(C[C@@H](CO)OCP(O)(OCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC)=O)C=C1)=O

WXJFKKQWPMNTIM-VWLOTQADSA-N

InChI=1S/C27H52N3O7P/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-19-35-20-16-21-37-38(33,34)24-36-25(23-31)22-30-18-17-26(28)29-27(30)32/h17-18,25,31H,2-16,19-24H2,1H3,(H,33,34)(H2,28,29,32)/t25-/m0/s1

3-(hexadecyloxy)propyl hydrogen ((((S)-1-(4-amino-2-oxopyrimidin-1(2H)-yl)-3-hydroxypropan-2-yl)oxy)methyl)phosphonate

CMX001; BCV; CMX 001; HDP-CDV; CMX-001; HDPCDV

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. > 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。