Brincidofovir (CMX001, HDP CDV, HDPCDV)   中文名称: 布罗福韦酯

Antiviral; DNA polymerase

CMX001是西多福韦的一种口服活性脂质缀合物，在体外对抗单纯疱疹病毒（HSV）复制的活性是阿昔洛韦或西多福韦的50倍。[2]
在21世纪，我们面临着天然或重组VARV和MPXV作为生物武器的潜在用途，以及人类MPXV的出现。这种情况需要抗病毒药物的治疗和预防干预。Cidovovir是一种抗病毒药物，被批准用于治疗艾滋病患者的巨细胞病毒视网膜炎，对痘病毒有活性，但必须通过静脉注射给药，并与肾毒性有关。CDV的醚脂类似物CMX001（HDP-CDV）对包括痘病毒在内的一系列DNA病毒具有强大的抗病毒活性，具有良好的口服生物利用度和最小的肾毒性。[1]

CMX001和CDV在通过鼻内途径或小颗粒气雾剂引入高剂量（10000×LD（50））后保护小鼠免于死亡方面同样有效。使用10mg/kg剂量的CMX001，然后每隔一天使用2.5mg/kg剂量，持续14天，提供了坚实的保护，防止在（100-200）x LD（50）的鼻疽病毒鼻腔内激发后死亡和体重减轻。此外，当延迟给药至感染后5天，即未经治疗的对照组死亡前3-4天时，实现了对死亡率的完全保护。这个治疗窗口相当于在普通天花的皮疹阶段进行干预。[1]
这些研究比较了CMX001与阿昔洛韦在鼻内接种1型或2型HSV的BALB/c小鼠中的疗效。CMX001使用每天一次口服5至1.25 mg/kg的剂量有效降低死亡率，即使在病毒接种后48-72小时延迟治疗时也是如此。从用CMX001处理的小鼠获得的器官样品的滴度为每克组织3-5 log（10）斑块形成单位，低于从用阿昔洛韦处理的小鼠中获得的样品，包括大脑的5个不同区域。口服（14）C-CMX001后，在小鼠的中枢神经系统中记录了与药物相关的放射性的可检测浓度。这些研究表明，CMX001可穿透血脑屏障，是传播性感染和中枢神经系统感染中HSV复制的有效抑制剂，并且优于阿昔洛韦[2]。

使用的HSV-1菌株是E-377，HSV-2菌株是MS。这些病毒的起源以前已经报道过。从新鲜获得的新生儿人类包皮制备HFF细胞作为原代培养物。在体外和体内使用的原代兔肾细胞中制备并定量病毒库。两种细胞系的培养基均为含有10%FBS和2μM L-谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和25 mM庆大霉素的厄尔盐的MEM[2]。

BSC-1细胞（ATCC CCL 26）在含有10%胎儿克隆III、2mM l-谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的Eagle最低必需培养基（MEM）中生长。在非洲绿猴肾细胞系BSC-1（Chen et al.，1992）中繁殖被命名为MOS-3P2的ECTV的MOS菌株（ATCC VR-1374）的斑块纯化分离物。如其他地方所述，通过蔗糖缓冲液纯化病毒（Moss和Earl，1998）。如前所述估计了病毒的传染性（Wallace和Buller，1985）。简言之，将病毒悬浮液在PBS+1%血清中连续稀释，在37°C下吸收到单层中1小时，并用DMEM+5%胎儿克隆III中的1%羧甲基纤维素悬浮液覆盖。在37°C下4天后，通过向每个孔中加入0.5 ml 0.3%结晶紫/10%福尔马林溶液，可见病毒斑块并灭活病毒[1]。

抗病毒化合物[1]
\nCDV 和 CMX001 溶液在每次实验前新鲜配制，方法是将化合物溶解于无菌蒸馏水中，并在实验过程中储存于 4 °C。
\n\n气溶胶攻击[1]
\n小鼠使用仅鼻吸入暴露系统 (NOIES) 暴露于悬浮于 MEM 培养基中的 ECTV 气溶胶，该系统配备单喷嘴生物气溶胶雾化发生器，并在 2 级生物安全柜内操作。NOIES 的运行条件为：主空气压力 20 psi，气溶胶室流量 1.5 L/min（无二次空气），病毒悬浮液流量 0.5 mL/min，系统工作压力相对于外部大气压约为 -0.5 psi（真空）。通过将气溶胶中病毒浓度（CA，以 PFU 表示）乘以给定体重小鼠在暴露时间内呼吸的总空气量（VM），并采用 Guyton 公式（Guyton，1947）计算啮齿动物的分钟通气量，来估算小鼠在暴露过程中吸入的病毒量。由于该公式假设所有病毒均以最佳气溶胶形式存在并被完全吸入，因此所呈现的病毒剂量可能是一个上限值。
\n\n鼻内攻击[1]
\n小鼠通过腹腔注射 0.1 ml/10 g 体重的氯胺酮盐酸盐（9 mg/ml）和赛拉嗪（1 mg/ml）进行麻醉。麻醉后的小鼠仰卧，身体倾斜，使前端与地面呈 45° 角，并使用塑料小鼠固定器以确保其姿势正确。将 ECTV 用 PBS 稀释至所需浓度，并缓慢滴入每只小鼠的鼻孔（5 μl/鼻孔）。随后将小鼠留在鼻孔内 2-3 分钟，然后放回笼中。
\n\n在暴露于 ECTV 后的指定时间点，对小鼠进行灌胃处理，分别灌胃 0.1 ml 无菌蒸馏水（安慰剂）或含有所需浓度 CMX001 的水。CDV 通过腹腔注射给予所需剂量。重复上述处理，结果部分将进行详细描述。为了测定感染性病毒滴度，在攻毒后 4、6 和 8 天处死小鼠，并分离肺、脾、肝组织和鼻腔冲洗液。将组织在 PBS（10%，w/v）中研磨，冻融三次，并超声处理 20 秒。通过在 BSC-1 单层细胞上进行滴定来估计组织匀浆中的病毒感染性（PFU/ml）。对于高于检测限 (10² PFU/ml) 的 PFU/ml 值，计算算术平均值。观察剩余小鼠的疾病临床症状（发病率）和死亡率。濒死小鼠被实施安乐死。

---

\n\n抗病毒化合物[2]
\nCMX001 悬浮于 0.4% 羧甲基纤维素 (CMC) 溶液中，用于小鼠口服给药。ACV 称重后悬浮于无菌水中，用于小鼠口服给药。化合物配制成 0.2 ml 的溶液，每日给药一次 (CMX001) 或两次 (ACV)。为评估疗效，在病毒接种后24-72小时开始，通过灌胃法连续7天对小鼠进行治疗。CMX001的剂量分别为5、2.5和1.25 mg/kg，每日一次；ACV的剂量分别为120、60或30 mg/kg，每日两次，间隔约12小时。在致病性实验中，于病毒接种后24小时开始治疗，连续7天，CMX001的剂量为5 mg/kg，ACV的剂量为100 mg/kg。这些剂量是根据死亡率实验的结果选择的。
\n\n实验感染[2]
\n小鼠被手动固定，进行鼻内接种，每只小鼠接种0.04 ml，其中包含大约LD90的HSV-1 E-377或HSV-2 MS株病毒。在这些研究中，HSV-1 的接种量为 4.4 × 10⁴ pfu/只小鼠，HSV-2 的接种量为 1.1 × 10⁵ pfu/只小鼠。在死亡率实验中，每天至少对动物进行一次评估，持续 21 天；在临床神经症状高峰期，每天评估四次，以便在小鼠死亡前对其进行安乐死。对 HSV-1 和 HSV-2 均进行了致病性研究，以比较 CMX001 和 ACV 对小鼠靶器官中两种病毒复制的影响。分别从载体组和药物组中各取三只小鼠，在接种后第 1、3、5、7 或 10 天处死，用于收集肺、肝、脾、肾、嗅球、大脑皮层、脑桥/延髓、间脑、小脑和三叉神经节组织。将器官样本按组织类型混合，并在 10% (w/v) 的悬液中匀浆，冷冻保存直至进行病毒检测。病毒滴度通过将组织匀浆接种于 HFF 细胞上测定，并在孵育三天后计数噬斑。如前所述，将三叉神经节单独收集，并与 N',N'-二甲基双乙酰胺一起直接与原代兔肾 (RK) 细胞共培养，以检测潜伏病毒。简而言之，将神经节切碎，置于组织培养细胞单层上，并监测 3 周的病毒细胞病变效应。每周将神经节转移到含有新鲜培养基的新鲜 RK 细胞上。

吸收、分布和排泄
布林西多福韦片剂的口服生物利用度为13.4%，混悬剂的口服生物利用度为16.8%。口服给药后，布林西多福韦的Cmax和AUCtau分别为480 ng/mL和3400 ng·hr/mL。活性代谢物西多福韦二磷酸的Cmax和AUCtau分别为9.7 pg/10⁶细胞和1200 pg·hr/10⁶细胞。布林西多福韦的血浆峰浓度（Tmax）在给药后约3小时达到，而西多福韦二磷酸的血浆峰浓度在给药后约47小时达到。
布林西多福韦主要以代谢物的形式经尿液（约51%）和粪便（约40%）排出。
布林西多福韦的表观分布容积为1230升。
健康成年患者的布林西多福韦表观清除率为44.1升/小时。

---

代谢/代谢物
布林西多福韦是西多福韦的前药，因此必须经过一些基本的代谢反应才能发挥药理活性。进入靶细胞后，布林西多福韦的磷酸二酯键水解生成西多福韦，西多福韦随后被磷酸化生成活性成分：西多福韦二磷酸。负责此反应的具体酶尚未明确，但体外研究表明鞘磷脂磷酸二酯酶在布林西多福韦的初始水解中起主要作用。布林西多福韦有两种主要的非活性代谢物，CMX103 和 CMX064，它们是通过末端碳的羧化，随后经过多个 CYP 介导的氧化反应和脂肪酸氧化循环而生成的。这些反应至少部分由 CYP4F2 介导。

---

生物半衰期
布林西多福韦及其药理活性代谢物西多福韦二磷酸的平均末端半衰期分别为 19.3 小时和 113 小时。

肝毒性
在布林西多福韦用于预防造血干细胞移植（HSCT）后成人和儿童巨细胞病毒和腺病毒感染的预注册临床试验中，布林西多福韦组的血清转氨酶升高发生率（22%）高于安慰剂组（16%），而HSCT后肝酶升高的发生率通常较高。ALT升高超过正常值上限（ULN）5倍的患者比例为1.8%，而安慰剂组为1.4%。269例布林西多福韦治疗患者中，有1例因ALT升高超过ULN 10倍而停止治疗。由于布林西多福韦仅给药2或3次（分别在治疗的第1天和第8天，部分试验中在第21天），ALT和AST升高出现较早。在同一项试验中，接受布林西多福韦治疗的患者中有6.5%出现轻度至中度血清胆红素升高，而安慰剂组的这一比例为5.9%，这再次反映了造血干细胞移植后患者胆红素升高的高发生率。在健康志愿者的小型研究中，未观察到肝功能异常。自布林西多福韦获批以来，尚未出现符合其适应症的天花感染病例。然而，在其获批后不久出现的痘痘感染病例导致其被用于治疗这一未经批准的适应症。在接受布林西多福韦治疗的痘痘病毒感染者中，转氨酶升高较为常见，但均无症状、短暂，且不伴有其他症状或胆红素升高。因此，布林西多福韦的临床应用经验总体有限。虽然有报道称使用该药后会出现短暂的血清转氨酶升高，但尚未有与布林西多福韦治疗相关的临床明显肝损伤的报告。
可能性评分：D（可能导致临床明显肝损伤）。

---

妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于哺乳期使用布林西多福韦的信息。建议患有天花的人不要哺乳，因为存在通过直接接触将天花病毒传染给婴儿的风险。这一预防措施可能也适用于猴痘。如果乳房附近没有皮损，并且采取了充分的预防措施来清洁双手、乳房、吸奶器以及任何其他用于给婴儿喂奶的器具，则可以给婴儿喂食挤出的母乳。在获得更多安全性数据之前，可能更倾向于选择其他药物。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

---

蛋白结合
布林西多福韦在血浆中的蛋白结合率>99%，但尚未阐明其结合的具体蛋白。

[1].Efficacy of therapeutic intervention with an oral ether-lipid\nanalogue of cidofovir (CMX001) in a lethal mousepox model. Antiviral\nRes. 2008 Jan;77(1):39-49.

[2]. Efficacy of CMX001 against herpes simplex virus infections\nin mice and correlations with drug distributionstudies. J Infect Dis.\n2010 Nov 15;202(10):1492-9.

[3]. CMX001 (1-O-hexadecyloxypropyl-cidofovir) inhibits\npolyomavirus JC replication in human brain progenitor-derived\nastrocytes. Antimicrob Agents Chemother. 2011 May;55(5):2129-36.

[4]. CMX001 to prevent cytomegalovirus disease in\nhematopoietic-cell transplantation. N Engl J Med. 2013 Sep\n26;369(13):1227-36

[5].The lipid moiety of brincidofovir is required for in vitro antiviral activity against Ebola virus. Antiviral Res. 2016 Jan;125:71-8.

药效学
布林西多福韦代谢产生的活性成分西多福韦二磷酸盐具有极长的作用持续时间，因此可以每周给药一次。布林西多福韦治疗天花仅需两次给药，分别在第1天和第8天，这似乎可以降低不良反应的风险。研究表明，与安慰剂相比，延长给药时间（即在第1天和第8天多次给药）会增加死亡率，因此应避免使用。布林西多福韦被认为是一种潜在的人类致癌物，并且已被证实可能导致不孕——因此，其使用应仅限于绝对必要的情况。

C27H52N3O7P

561.69148

561.354

C, 57.73; H, 9.33; N, 7.48; O, 19.94; P, 5.51

444805-28-1

483477

Solid powder

5.592

156.93

3

7

26

38

721

1

NC1=NC(N(C[C@@H](CO)OCP(O)(OCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC)=O)C=C1)=O

WXJFKKQWPMNTIM-VWLOTQADSA-N

InChI=1S/C27H52N3O7P/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-19-35-20-16-21-37-38(33,34)24-36-25(23-31)22-30-18-17-26(28)29-27(30)32/h17-18,25,31H,2-16,19-24H2,1H3,(H,33,34)(H2,28,29,32)/t25-/m0/s1

3-(hexadecyloxy)propyl hydrogen ((((S)-1-(4-amino-2-oxopyrimidin-1(2H)-yl)-3-hydroxypropan-2-yl)oxy)methyl)phosphonate

CMX001; BCV; CMX 001; HDP-CDV; CMX-001; HDPCDV

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. > 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。