| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
CDK12 and CDK13 (cyclin-dependent kinases 12 and 13). BSJ-01-175 is a dual covalent inhibitor targeting CDK12 and CDK13. It binds irreversibly to cysteine residues Cy51039 on CDK12 and Cy51017 on CDK13 via an acrylamide warhead. The IC50 values are 156 nM for CDK12/CycK and 282.6 nM for CDK13/CycK. Inhibition of CDK12/13 reduces phosphorylation of RNA Polymerase II at Serine 2 residues (p-Ser2), which is required for transcription elongation, splicing, and processing of certain genes, particularly DNA damage response genes (e.g., BRCA1, BRCA2, ATR, FANCI, RAD51) and super-enhancer-associated genes. Selective inhibition of CDK12/13 in cancer cells downregulates these genes, leading to genomic instability, DNA damage accumulation, and cell death.
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
与野生型（WT）相比，BSJ-01-175（0–10 μM；72 小时）可使细胞存活率提高五倍，且其作用显著依赖于 Cys1039 共价键的形成 [1]。与 THZ531 相比，BSJ-01-175（0–10 μM；72 小时）可轻微降低 TC71 尤文氏肉瘤细胞的活性 [1]。BSJ-01-175（0–5 μM）特异性靶向 CDK12/13，可抑制 BRAC1 和 BRAC2 的转录 [1]。
在无细胞生化分析中，BSJ-01-175 可直接抑制 CDK12/CycK 和 CDK13/CycK 的活性。其对 CDK12/CycK 的 IC50 值为 156 nM，对 CDK13/CycK 的 IC50 值为 282.6 nM。抑制机制为共价且不可逆，这由时间依赖性抑制和活性丙烯酰胺基团的存在所证实。选择性分析表明，由于活性半胱氨酸在 CDK12/13 活性位点中的独特位置，BSJ-01-175 对 CDK12/13 的选择性优于其他激酶（包括其他 CDK）。该化合物与 ATP 结合位点结合，但与半胱氨酸残基形成共价加合物。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
BSJ-01-175（10 mg/kg；腹腔注射；每日一次，持续3周）在3周的药物治疗期间有效抑制了肿瘤生长[1]。对BSJ-01-175在小鼠体内的药代动力学(PK)特性进行了评估[1]。给药途径 剂量 (mg/kg) Tmax (h) Cmax (ng/mL) AUClast (h·ng/mL) T1/2 (h) CL (mL/min/kg) VSS (L/kg) F (%) 静脉注射 3 1511 1832 2.2 24.9 3.9 口服 10 2 272 1043 17
与正常细胞相比，BSJ-01-175 对癌细胞具有显著的选择性。该化合物能有效抑制癌细胞中 RNA 聚合酶 II 的磷酸化（p-Ser2）。它能诱导 CDK12 靶基因的下调，包括 DNA 损伤反应基因（例如 BRCA1、BRCA2、ATR 和 RAD51）。在尤文氏肉瘤细胞中，BSJ-01-175 可降低 EWS-FLI1 靶基因的表达并诱导细胞凋亡。该化合物还能通过 CRBN 介导的 E3 连接酶活性有效降低 CDK6 蛋白水平，从而抑制 CDK6 依赖性癌症的细胞周期进程和增殖。在 RH4 和其他 FP-RMS 细胞中，该化合物可能具有与其他 CDK12/13 抑制剂类似的活性。BSJ-01-175 可诱导细胞周期停滞于 G2/M 期并增加 DNA 损伤标志物（γH2AX）。该化合物在敏感癌细胞系中显示出亚微摩尔级的 EC50 值。 |
| 酶活实验 |
CDK12/13激酶活性测定采用无细胞体系，使用重组CDK12/CycK或CDK13/CycK蛋白和合适的肽底物（例如，RNA聚合酶II CTD肽，通常为具有多个重复序列的YSPTSPS）。激酶反应在ATP（10-100 uM）和不同浓度的BSJ-01-175（0.1-1000 nM）存在下进行。孵育后，使用发光激酶检测法（例如，Kinase-Glo®或ADP-Glo™）定量ADP的生成。对于时间依赖性和不可逆抑制研究，在加入ATP和底物之前，将化合物与酶预孵育不同时间点（0-120分钟）。IC50值随时间的变化表明发生了不可逆结合。或者，可以使用质谱法来确认靶半胱氨酸上共价加合物的形成。为了进行选择性分析，将 BSJ-01-175 以 1 uM 的浓度对 100 多种激酶进行筛选。
|
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： Kelly 野生型或 CDK12C1039F 细胞 测试浓度： 0-10 μM 孵育时间： 72 小时 实验结果： 与野生型 (WT) 相比，细胞活力提高了 5 倍，表明细胞活力增强。这强烈依赖于与 Cys1039 的共价键形成。 细胞增殖试验[1] 细胞类型： TC71 尤文氏肉瘤细胞 测试浓度： 0-10 μM 孵育时间： 72 小时 实验结果： 与 THZ531 相比，活性略有下降。 将癌细胞系（例如尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤）接种于96孔板中，并用浓度为0.001-10 uM的BSJ-01-175处理48-96小时。使用CellTiter-Glo或MTT法检测细胞活力，并计算EC50值。对于p-RNA Pol II (Ser2)抑制实验，将细胞用0.1-1 uM的BSJ-01-175处理2-6小时，并使用抗p-Ser2抗体通过Western blot分析细胞裂解液。基因表达分析中，细胞用 BSJ-01-175 (0.1-1 uM) 处理 6-24 小时，提取总 RNA，并通过 qRT-PCR 或 RNA-seq 检测 CDK12 靶基因（例如 BRCA1、RAD51、ATR）的表达。DNA 损伤评估中，细胞处理 24-48 小时后，用抗 γH2AX 抗体染色，进行免疫荧光或流式细胞术分析。细胞周期分析中，细胞用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。细胞凋亡通过 Annexin V/PI 双染和 caspase-3/7 活性检测进行评估。CDK6 降解分析（如适用）中，细胞用 BSJ-01-175 (0.1-1 uM) 处理 4-24 小时，并通过 Western blot 定量 CDK6 蛋白水平。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：携带TC71尤文氏肉瘤细胞的雌性裸鼠（BALB/c，7-8周龄）[1]
剂量：10 mg/kg 给药途径：腹腔注射（ip）；每日一次，持续3周 实验结果：在为期3周的药物治疗期间，肿瘤生长显著受到抑制。 BSJ-01-175 在尤文氏肉瘤患者来源的异种移植 (PDX) 小鼠模型中展现出体内疗效。在尤文氏肉瘤 PDX 模型中，每日一次腹腔注射 (IP) 10 mg/kg 的 BSJ-01-175 可抑制肿瘤生长。该化合物是首个报道具有体内疗效的选择性 CDK12/13 共价抑制剂。在这些研究中，每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积，并监测体重以评估耐受性。研究结束时，收集肿瘤进行生物标志物分析（pRNA Pol II Ser2 减少、CDK12 靶基因下调、γH2AX 增加和凋亡标志物）。未来可能在其他 CDK12/13 依赖性癌症模型中开展更多体内疗效研究，例如三阴性乳腺癌和高级别浆液性卵巢癌。标准给药方案：每日或隔日腹腔注射 10 mg/kg，持续 2-4 周。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
BSJ-01-175 的体内给药方式为腹腔注射，剂量为 10 mg/kg，每日一次。该化合物通常配制于 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% 生理盐水或类似溶剂中。该制剂的溶解度为 2-5 mg/mL。其体内最大浓度尚未完全公布。BSJ-01-175 的药代动力学参数（半衰期、Cmax、口服生物利用度）尚未得到充分报道。作为一种共价抑制剂，其靶点结合持续时间可能超过化合物在循环中的存在时间，因此可以减少给药频率。共价抑制剂典型的吸收、分布、代谢和排泄 (ADME) 特性包括中等至高的血浆蛋白结合率以及向包括肿瘤在内的组织的分布。需要进行正式的药代动力学研究以进行进一步的开发。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
BSJ-01-175 的临床前毒理学数据尚未广泛发表。在小鼠异种移植研究中，以每日一次腹腔注射 10 mg/kg 的有效剂量给药，该化合物耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或死亡。然而，CDK12/13 抑制剂可能具有靶向毒性，包括对正常细胞转录的影响，尤其是在高度增殖的组织（例如骨髓、胃肠道）中。在其他 CDK12/13 抑制剂（例如 THZ531）的临床前研究中，较高剂量下观察到血小板减少症、贫血和胃肠道紊乱等毒性。BSJ-01-175 对癌细胞的选择性高于正常细胞，提示其具有良好的治疗窗口。临床开发需要进行正式的毒理学研究（例如，啮齿动物 28 天重复给药试验）。该化合物应作为实验试剂进行处理，并采取适当的安全预防措施。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
BSJ-01-175是通过对THZ531衍生物进行构效关系（SAR）研究发现的。它是首个报道在尤文氏肉瘤PDX模型中具有体内疗效的选择性CDK12/13共价抑制剂。该化合物的分子量为545.08，分子式为C30H33ClN6O2。BSJ-01-175具有丙烯酰胺活性基团，可共价靶向CDK12（Cys1039）和CDK13（Cys1017）中的半胱氨酸残基。由于这些活性半胱氨酸的独特位置，该化合物对其他激酶（包括CDK7、CDK8和CDK9）表现出极高的选择性。 BSJ-01-175 的开发为研究 CDK12/13 生物学以及验证这些激酶作为尤文氏肉瘤、三阴性乳腺癌、高级别浆液性卵巢癌和其他 CDK12/13 依赖性恶性肿瘤等癌症的治疗靶点提供了一种有价值的化学工具。BSJ-01-175 尚未获准用于人体，仅供研究用途。该化合物的商品编号为 T63841 和 V41805。
|
| 分子式 |
C30H33CLN6O2
|
|---|---|
| 分子量 |
545.075025320053
|
| 精确质量 |
544.235
|
| CAS号 |
2227392-55-2
|
| PubChem CID |
134560325
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
5.4
|
| tPSA |
95.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
39
|
| 分子复杂度/Complexity |
806
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
|
| SMILES |
ClC1C=NC(=NC=1C1=CNC2C=CC=CC1=2)N[C@@H]1CCC[C@H](C1)OC1C=CC(=CC=1)NC(/C=C/CN(C)C)=O
|
| InChi Key |
DMUSMYYDKCXFKR-MRJIRHQNSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C30H33ClN6O2/c1-37(2)16-6-11-28(38)34-20-12-14-22(15-13-20)39-23-8-5-7-21(17-23)35-30-33-19-26(31)29(36-30)25-18-32-27-10-4-3-9-24(25)27/h3-4,6,9-15,18-19,21,23,32H,5,7-8,16-17H2,1-2H3,(H,34,38)(H,33,35,36)/b11-6+/t21-,23-/m1/s1
|
| 化学名 |
(E)-N-[4-[(1R,3R)-3-[[5-chloro-4-(1H-indol-3-yl)pyrimidin-2-yl]amino]cyclohexyl]oxyphenyl]-4-(dimethylamino)but-2-enamide
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8346 mL | 9.1730 mL | 18.3459 mL | |
| 5 mM | 0.3669 mL | 1.8346 mL | 3.6692 mL | |
| 10 mM | 0.1835 mL | 0.9173 mL | 1.8346 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
