| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mycobacterial membrane protein large 3 (MmpL3); M. tuberculosis (IC90 = 16 μM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
C215（N-（2,4-二氯苄基）-1-丙基-1H-苯并[d]咪唑-5-胺）是一种抑制剂（图4a），我们在HTS中鉴定出其对结核分枝杆菌具有甘油非依赖性活性，对哺乳动物细胞的非特异性毒性有限，对结核分枝菌的IC90为16μM，对巨噬细胞中生长的结核分枝杆菌有效（表S1，表S2，化合物72）。产生了四个独立的抗性突变体，分别为C215。这些突变体的IC90值相对于用于抗性产生的野生型亲本仅偏移了约2倍（图4b）。对四个抗性突变体的基因组进行测序，确定Rv0206c是所有四个抗性突变中唯一一个具有突变的基因，这表明Rv0206c的突变赋予了对C215的抗性。Rv0206c MmpL3，耐药、结瘤和细胞分裂（RND）蛋白家族的成员，被认为编码结核分枝杆菌中的脂质转运蛋白。AU12345是一种最近发现的金刚烷基脲化合物，具有抗结核分枝杆菌的活性，靶向MmpL3，从而抑制分枝杆菌酸穿过内膜的运输。此外，与乙胺丁醇相关的1,2-二胺SQ109也被证明可以靶向MmpL3。这些化合物用于证明MmpL3编码海藻糖单分枝杆菌（TDM）的转运蛋白，TDM是分枝杆菌外膜中含肌酸脂质物种的重要前体。使用抗性产生与基因组测序相结合的方法鉴定了AU12345的靶标，发现抗性突变体在mmpL3（G758A）中携带一个突变。相比之下，在我们对C215抗性突变体的分析中，在我们分离的每个抗性突变体（L320P、T667A、V684A、V51A）中都鉴定出mmpL3中的不同突变。为了证明C215通过抑制MmpL3和分枝杆菌酸穿过内膜的运输来杀死结核分枝杆菌，我们用C215 MIC的1x、5x和10x处理细胞，并检测了细胞壁分枝杆菌酸。我们观察到，经C215处理后，细胞壁结合的分枝杆菌酸（α、甲氧基和酮基）呈剂量依赖性减少，与之前报道的AU12345的效果相似，证实MmpL3可能是C215的靶标。这是通过抑制MmpL3杀死结核分枝杆菌的小分子的第四次鉴定[1]。
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| 酶活实验 |
筛选、点击选择和IC90测定[1]
对于结核分枝杆菌和卡介苗筛查试验，将表达GFP的细菌生长到对数中期（OD600=0.6-0.8），稀释并接种到384孔板中，这些孔板上预先钉有化合物，最终OD600为0.025，化合物浓度为25μM或20μg mL-1（NIH抑制剂）。将板孵育72小时，此时读取GFP荧光。对每种化合物进行两次筛选，并使用DMSO对照作为参考计算复合z评分。结核分枝杆菌筛查的点击量被定义为复合z评分小于-4的化合物。使用对照抗生素氯法齐明和利福平浓度的z评分平均值选择z评分临界值，z′因子为0，这意味着阳性对照和阴性对照之间的距离是两个群体标准差之和的3倍。对于剂量反应曲线和IC90对筛选结果的测定，除非另有说明，否则将细菌生长到对数中期，并在OD600=0.05的96孔板中，在小分子抑制剂的存在下放置7天，并通过读取OD600来评估生长情况。IC90被定义为相对于DMSO对照抑制90%生长的最小浓度。对于耻垢分枝杆菌筛查，OD600用作读数，孵育2天后读取平板。 二次筛查分析[1] 从文库中挑选抗结核分枝杆菌初筛的点击，并使用初筛浓度的2倍连续稀释液将其排列在384孔板中，作为剂量反应曲线。使用基于GFP的测定法测定初步的樱桃木板MIC值，并将其报告为使用利福平对照观察到的最大抑制作用的最小浓度。通过用组成型表达萤火虫荧光素酶的结核分枝杆菌菌株感染96孔板中的J774巨噬细胞来评估巨噬细胞活性。在抑制剂存在下感染三天后，洗涤、裂解感染的单层，并使用发光作为细菌存活率的报告物。为了确定巨噬细胞毒性，将J774巨噬细胞与小分子一起孵育3天，在此期间使用CellTiter-Glo作为巨噬细胞存活率的读数。 |
| 细胞实验 |
抗性突变体的产生[1]
每种化合物在固体培养基上的MIC是通过在含有96孔板型剂量反应的琼脂上接种107个细菌来鉴定的。MIC被定义为抑制细菌生长的最低浓度。通过使用四个独立衍生的野生型克隆将结核分枝杆菌细胞接种到含有每种化合物2倍和10倍琼脂MIC的琼脂垫上，产生抗性突变体。在含抑制剂的平板上产生的菌落被接种到含有1x抑制剂液体MIC的液体培养基中。将这些培养物培养至对数中段，并在液体MIC测定中重新测试样品，以确认观察到相对于野生型MIC的变化。 分枝杆菌酸的代谢标记和复合治疗[1] 在墨水瓶中培养10mL结核分枝杆菌至OD600=0.6。与10μCi的14C-醋酸盐同时加入培养物中，C215的MIC为1x、5x或10x。标记20小时后，将培养物用水洗涤一次，用氢氧化四丁基铵皂化，并加入甲基碘产生脂肪酸和分枝杆菌酸甲酯。使用二氯甲烷从水层中提取脂肪酸甲酯（FAME）和分枝杆菌酸甲酯（MAME），并使用95:5己烷：乙酸乙酯在TLC板上用完。TLC板的装载量在20小时处理期后根据细胞的OD600标准化。通过磷光法观察FAME和MAME。 |
| 参考文献 |
[1]. Identification of novel inhibitors of M. tuberculosis growth using whole cell based high-throughput screening. ACS Chem Biol. 2012;7(8):1377-1384.
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| 其他信息 |
尽管迫切需要新的抗结核药物，但目前鲜有新药问世。为了应对不断出现的耐药性问题，我们需要能够抑制新靶点的结构独特的化学实体。本文描述了我们利用全细胞筛选方法，对多种小分子化合物进行筛选，以期发现靶向结核分枝杆菌新通路的新型抑制剂，从而推动结核分枝杆菌药物研发。我们发现，使用模式分枝杆菌进行初步筛选可能会限制发现对结核分枝杆菌有效的新型抑制剂的可能性。此外，我们证实了开发能够反映体内生物学特性的体外检测条件的重要性，这有助于最大限度地提高全细胞筛选中可能具有体内活性的化合物比例。最后，我们描述了两种靶向结核分枝杆菌细胞壁生物合成步骤的新型抑制剂的鉴定和表征。第一种是一种新型苯并咪唑类化合物，其靶向分枝杆菌膜蛋白大3 (MmpL3)，MmpL3被认为是细胞壁分枝菌酸的转运蛋白。第二种化合物是一种硝基三唑类化合物，可抑制十异戊二烯磷酸-β-D-核糖2'-差向异构酶（DprE1），该酶是细胞壁生物合成所必需的差向异构酶。这两种蛋白均属于少数通过正向化学遗传学方法（结合抗性生成和基因组测序）鉴定出的新靶点。这表明，目前用于筛选和靶点鉴定的方法可能导致靶点发现的偏差，因此应探索其他方法。[1]
所有目前使用的抗生素都是通过全细胞筛选发现的，这凸显了该方法的重要性。在本报告中，我们描述了利用全细胞高通量筛选来鉴定结核分枝杆菌复制新型抑制剂的经验。我们使用了来自博德研究所的包含超过2万种化合物的无偏化合物库，以及美国国家过敏症和传染病研究所（NIAID）向结核分枝杆菌筛选领域提供的包含1113种活性化合物的数据集。后一个数据集对NIAID的化合物进行了独立验证和测试，有助于明确该化合物库对结核分枝杆菌药物研发的重要性。此外，通过分析Broad化合物库的一级和二级筛选数据，我们得以扩展并量化与全细胞筛选相关的观察结果。这项研究利用一个庞大的化合物库，且该化合物库预计不存在结构偏倚，结果发现，与之前报道的(14)相比，针对三种分枝杆菌属的活性化合物的重叠程度更低，这清楚地表明了使用替代分枝杆菌属来鉴定结核分枝杆菌生长抑制剂的潜在缺陷。此外，这项工作还描述了从全细胞筛选中发现此类活性化合物的惊人高频率，这些化合物具有依赖于标准含甘油结核分枝杆菌培养基生长的公认特征。这一点尤为重要，因为这类抑制剂没有体内活性，这表明可能需要对用于结核分枝杆菌研究的标准培养基进行重大调整，尤其是在化学生物学研究方面。最后，我们注意到一个有趣的现象：所采用的方法反复识别出相同的靶点 DprE1 和 Mmpl3，这可能表明它们是高度可靶向的，但也提示它们可能很容易发生突变，从而产生耐药性。总之，这项工作提供的见解和视角将有助于指导未来的结核分枝杆菌筛查工作以及抗生素的研发。[1] |
| 分子式 |
C17H17CL2N3
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|---|---|
| 分子量 |
334.242981672287
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| 精确质量 |
333.079
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| CAS号 |
912780-51-9
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| PubChem CID |
6621371
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
499.1±55.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
255.6±31.5 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.632
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| LogP |
4.62
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| tPSA |
29.9 Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
355
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=C(Cl)C(CNC2C=C3N=CN(C3=CC=2)CCC)=CC=1
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| InChi Key |
PWEPSIFNTIQCNN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H17Cl2N3/c1-2-7-22-11-21-16-9-14(5-6-17(16)22)20-10-12-3-4-13(18)8-15(12)19/h3-6,8-9,11,20H,2,7,10H2,1H3
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| 化学名 |
N-[(2,4-dichlorophenyl)methyl]-1-propylbenzimidazol-5-amine
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| 别名 |
912780-51-9; N-[(2,4-dichlorophenyl)methyl]-1-propylbenzimidazol-5-amine; MmpL3 inhibitor C215; C-215; N-(2,4-dichlorobenzyl)-1-propyl-1H-benzimidazol-5-amine; C215; N-(2,4-Dichlorobenzyl)-1-propyl-1H-benzo[d]imidazol-5-amine;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9919 mL | 14.9593 mL | 29.9186 mL | |
| 5 mM | 0.5984 mL | 2.9919 mL | 5.9837 mL | |
| 10 mM | 0.2992 mL | 1.4959 mL | 2.9919 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Antibacterial agent 166
LasB-IN-1
Ticarcillin monosodium
G0775
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COA
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