C6 NBD Ceramide

目录号: V43287 纯度: ≥98%
C6 NBD Ceramide 是一种细胞膜可渗透/可穿透的高尔基体荧光探针(Ex=466 nm,Em=536 nm)。
C6 NBD Ceramide CAS号: 94885-02-6
产品类别: New3
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1mg
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产品描述
C6 NBD 神经酰胺是一种可透过细胞膜的 Golgi 荧光探针(激发波长 466 nm,发射波长 536 nm)。C6 NBD 神经酰胺能够快速便捷地标记活细胞和固定细胞中的 Golgi 体,使其呈现绿色荧光,可用于观察活细胞中 Golgi 体形态的变化。C6 NBD 神经酰胺可代谢为荧光鞘磷脂和葡萄糖基甘油酰胺,可用于研究鞘脂的转运和代谢机制。
C6 NBD 神经酰胺(CAS号:94885-02-6)是一种细胞膜可渗透的荧光神经酰胺类似物,其结构包含一条6碳脂肪酸链和一个NBD(4-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑)荧光团。其分子量为575.74 g/mol,分子式为C30H49N5O6,最大激发波长/发射波长分别为466 nm和536 nm(绿色荧光)。该化合物是一种高尔基体荧光探针,能够快速便捷地标记活细胞和固定细胞中的高尔基体,使其呈现绿色荧光。它可代谢为荧光鞘磷脂和葡糖基神经酰胺,因此可用于研究鞘脂的转运和代谢。
生物活性&实验参考方法
靶点
C6 NBD Ceramide targets the Golgi apparatus in living and fixed cells, serving as a specific fluorescent probe for this organelle. The compound is taken up by cells and transported to the Golgi, where it can be metabolized by endogenous enzymes to fluorescent sphingomyelin and glucosylceramide. These metabolites then follow distinct intracellular trafficking pathways, allowing researchers to monitor sphingolipid transport and metabolic mechanisms. The green fluorescence (Ex=466 nm, Em=536 nm) enables visualization of Golgi morphology and changes in living cells.
体外研究 (In Vitro)
建议(以下是我们建议的操作流程,仅供参考,请根据您的具体情况进行调整)。高尔基体标记[3]:1. 将盖玻片上的细胞用HMEM缓冲液冲洗,然后在25°C下用戊二醛或多聚甲醛固定5-10分钟。2. 使用平衡盐溶液(例如HCMF)洗涤固定后的细胞。3. 将带有盖玻片的培养皿放入冰水浴中,用新鲜配制的NaBH4溶液孵育3次,每次5分钟(针对戊二醛固定的细胞)。4. 用冷的HCMF缓冲液多次冲洗细胞(20-30分钟),然后预热至25°C,并在C6 NBD-神经酰胺/BSA存在下孵育60分钟。 5. 用HCMF固定细胞,并在25℃下用10%胎牛血清或2 mg/mL BSA孵育30-90分钟,以改善高尔基体染色效果并置换制备物中过量的C6 NBD-神经酰胺。6. 使用荧光显微镜(激发波长466 nm,发射波长536 nm),将盖玻片置于载玻片凹槽上进行观察。
在体外,C6 NBD 神经酰胺可用于快速便捷地对活细胞和固定细胞中的高尔基体进行绿色荧光标记。这种细胞渗透性荧光神经酰胺类似物可整合到高尔基体中,从而实现对高尔基体形态变化的实时观察。它还能代谢为荧光鞘磷脂和葡糖基神经酰胺,随后被转运至其他细胞区室,使研究人员能够研究鞘脂的转运和代谢途径。其536 nm的绿色荧光发射与荧光显微镜的标准FITC滤光片组兼容。
体内研究 (In Vivo)
在体内,C6 NBD 神经酰胺主要用于细胞研究,而非整体动物实验。然而,它能够标记高尔基体并追踪鞘脂的运输,使其在理解模式生物的脂质代谢方面具有重要价值。例如,可以将其注射到组织中,以研究神经酰胺的加工及其代谢产物(如鞘磷脂和葡糖基神经酰胺)向质膜的转运。NBD 标签的绿色荧光在生理条件下稳定,从而能够实时追踪活体组织中细胞水平的脂质动态变化。
酶活实验
对于非细胞实验,C6 NBD 神经酰胺用于研究其与脂质转运蛋白(例如 CERT,即神经酰胺转移蛋白)的相互作用。使用黑色 96 孔板进行基于荧光的脂质转移实验。将含有 C6 NBD 神经酰胺(0.5 mol%)的供体囊泡和不含荧光脂质的受体囊泡在 37℃ 的实验缓冲液(20 mM HEPES,pH 7.4,150 mM NaCl,1 mM EDTA)中混合。通过监测 536 nm 处(激发波长 466 nm)荧光强度的增加来追踪 C6 NBD 神经酰胺从供体囊泡到受体囊泡的转移。计算转移速率以评估 CERT 活性或抑制剂的效力。
细胞实验
C6 NBD 神经酰胺可溶于 DMSO、DMF 和乙醇。体外细胞染色时,将储备液用 PBS 或无血清培养基稀释,配制成 1-10 uM 的工作液。该化合物通常与脱脂 BSA(摩尔比 1:1)络合,以增强递送并防止非特异性结合。工作液应新鲜配制并避光保存。固定细胞染色时,先用 4% 多聚甲醛固定细胞,用 PBS 洗涤,然后在 4℃ 或室温下与 C6 NBD 神经酰胺溶液孵育 20-60 分钟。活细胞标记时,将细胞在 37℃ 下孵育 5-30 分钟。染色后,用含 0.2% BSA 的 PBS 洗涤以去除过量染料。使用配备 488 nm 激发和 520 nm 发射滤光片的荧光显微镜观察标记的细胞。甲醛固定后,固定细胞仍能很好地保留荧光。C6 NBD 神经酰胺储存于 -20℃,避光保存。
动物实验
C6 NBD 神经酰胺通常不作为全身性化合物用于动物。然而,它可用于离体研究,例如在离体组织或培养的器官外植体中进行研究。例如,将新鲜分离的大鼠脑切片或肝脏外植体置于含有 5-10 μM C6 NBD 神经酰胺(与 BSA 复合物)的培养基中,于 37℃ 孵育 30-60 分钟。孵育后,清洗组织,用 4% 多聚甲醛固定,并切片进行荧光显微镜分析。这种方法能够在保持荧光检测优势的同时,研究完整组织结构中的神经酰胺加工和鞘脂转运。466/536 nm 的激发/发射波长适用于共聚焦显微镜。
药代性质 (ADME/PK)
C6 NBD 神经酰胺的分子量为 575.74 g/mol,分子式为 C30H49N5O6。它可溶于 DMF(25 mg/mL)、DMSO(10 mg/mL)、乙醇(5 mg/mL)以及 DMF:PBS(pH 7.2)(1:1)混合溶液(浓度为 500 μg/mL)。该化合物在 229 nm、333 nm 和 465 nm 处有最大吸收峰。在适当的储存条件下,它呈结晶固体状。用于细胞染色时,通常配制 5 mM 的 DMSO 储备液,并储存于 -20℃。工作液通过将储备液用 PBS 或无血清培养基稀释制备。为防止光漂白,该化合物在储存和操作过程中应避光。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作为一种荧光探针,C6 NBD 神经酰胺在 1-10 μM 的标准工作浓度下通常被认为毒性较低。在 15-60 分钟的典型染色孵育时间内,未观察到明显的细胞毒性作用。然而,该化合物仅供研究使用,不得用于人类或兽医用途。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。避免长时间暴露于光照下以防止光漂白。根据现有信息,该产品未被列为致癌物或生殖危害物。
参考文献

[1]. A vital stain for the Golgi apparatus. Science. 1985 May 10;228(4700):745-7.

[2]. Influence of sphingomyelin metabolism during epithelial-mesenchymal transition associated with aging in the renal papilla. J Cell Physiol. 2022 Jul 31.

[3]. Pagano RE. A fluorescent derivative of ceramide: physical properties and use in studying the Golgi apparatus of animal cells. Methods Cell Biol. 1989;29:75-85.

其他信息
N-{6-[(7-硝基-2,1,3-苯并二唑-4-基)氨基]己酰基}鞘氨醇是一种N-酰基鞘氨醇,其中氨基氮被转化为6-{[N-(7-硝基苯并二唑-2,1,3-噁二唑-4-基)氨基]}己酰胺基团。它可以用作荧光探针。
C6 NBD 神经酰胺是一种广泛用于研究活细胞和固定细胞中高尔基体、鞘脂转运和神经酰胺代谢的荧光探针。NBD 荧光团对环境敏感,在细胞膜等疏水性环境中荧光强度会增强。该探针常与其他荧光标记物联合使用,用于多色成像研究。该化合物可代谢为 NBD-鞘磷脂和 NBD-葡糖基神经酰胺,使研究人员能够追踪神经酰胺向更复杂的鞘脂的转化过程。它并非药物,也未获得临床批准。该产品仅供研究使用,纯度≥98%。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C30H49N5O6
分子量
575.73996
精确质量
575.368
CAS号
94885-02-6
PubChem CID
16219783
外观&性状
Brown to orange solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
折射率
1.562
LogP
8.25
tPSA
180.32
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
23
重原子数目
41
分子复杂度/Complexity
737
定义原子立体中心数目
2
SMILES
CCCCCCCCCCCCC/C=C/[C@H]([C@H](CO)NC(=O)CCCCCNC1=CC=C(C2=NON=C12)[N+](=O)[O-])O
InChi Key
HZIRBXILQRLFIK-VPZZKNKNSA-N
InChi Code
InChI=1S/C30H49N5O6/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-15-18-27(37)25(23-36)32-28(38)19-16-14-17-22-31-24-20-21-26(35(39)40)30-29(24)33-41-34-30/h15,18,20-21,25,27,31,36-37H,2-14,16-17,19,22-23H2,1H3,(H,32,38)/b18-15+/t25-,27+/m0/s1
化学名
N-[(E,2S,3R)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]-6-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]hexanamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7369 mL 8.6845 mL 17.3690 mL
5 mM 0.3474 mL 1.7369 mL 3.4738 mL
10 mM 0.1737 mL 0.8684 mL 1.7369 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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