C6-NBD Sphinganine

别名: N-[(2S,3R)-1,3-Dihydroxy-2-octadecanyl]-6-[(7-nitro-2,1,3-benzoxa diazol-4-yl)amino]hexanamide
目录号: V43407 纯度: ≥98%
C6-NBD Sphinganine 是一种鞘氨醇类似物,可用作标记脂肪酸的荧光染料试剂。
C6-NBD Sphinganine CAS号: 114301-97-2
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
C6-NBD 鞘氨醇是一种鞘氨醇类似物,可用作荧光染料试剂来标记脂肪酸。
C6-NBD鞘氨醇(CAS号:114301-97-2)是一种具有生物活性的荧光类似物,是短链、可透过细胞膜的鞘氨醇(二氢鞘氨醇)的类似物。该化合物由一条与鞘氨醇骨架相连的C6脂肪酸链构成,并在氨基上连接一个NBD(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)荧光团。该类似物保留了被细胞鞘脂代谢酶(包括神经酰胺合成酶)加工的能力,同时NBD基团使其可通过荧光显微镜观察(激发波长~460 nm,发射波长~535 nm)。其分子量为577.76 g/mol,分子式为C30H51N5O6。
生物活性&实验参考方法
靶点
C6-NBD Sphinganine does not target a specific receptor but rather integrates into cellular sphingolipid metabolic pathways. It serves as a substrate for several key enzymes involved in ceramide and sphingomyelin metabolism, including (dihydro)ceramide synthase (CerS), which acylates it to produce C6-NBD-dihydroceramide. It is also metabolized by sphingomyelin synthase and glucosylceramide synthase. This compound functions as a molecular probe to track the intracellular transport, localization, and turnover of sphingolipids.
体外研究 (In Vitro)
在体外,C6-NBD鞘氨醇可被活细胞主动摄取,并被内源性鞘脂酶迅速代谢。在细胞培养系统(例如CHO或HeLa细胞)中,添加后5-15分钟内即可进入高尔基体,并在那里转化为C6-NBD-鞘磷脂和C6-NBD-葡糖基神经酰胺。随后,荧光信号通过囊泡运输到达质膜。它是研究鞘脂运输、代谢和细胞器动力学的理想工具。鞘脂代谢抑制剂(例如,神经酰胺合成酶抑制剂伏马菌素B1)可阻断其向更复杂鞘脂的转化。
体内研究 (In Vivo)
在体内,C6-NBD鞘氨醇并非用作治疗药物,而是作为动物模型中脂质代谢研究的示踪剂。静脉注射或局部给药后,可通过追踪荧光信号来监测鞘脂在组织中的生物分布和代谢过程。它已被用于斑马鱼模型中,以观察胚胎发育过程中的脂质转运。在小鼠中,该化合物已被用于研究膳食鞘脂的肠道吸收和转运。NBD荧光团可用于组织匀浆和组织切片中的荧光检测。
酶活实验
对于非细胞酶活性测定,标准方案采用重组人神经酰胺合成酶 (CerS) 进行无放射性标记荧光测定。将纯化的 CerS 酶与 5-10 uM C6-NBD 鞘氨醇和棕榈酰辅酶 A(底物)在测定缓冲液(50 mM HEPES,pH 7.4,1 mM DTT,0.5 mM MgCl2)中于 37℃ 孵育 30-60 分钟。加入有机溶剂(氯仿/甲醇,2:1)终止反应。将产物(C6-NBD-二氢神经酰胺)萃取到有机相中,并通过薄层色谱法 (TLC) 分离。使用荧光酶标仪在激发/发射波长 460/535 nm 处定量产物斑点的荧光强度。
细胞实验
对于体外细胞实验,将CHO或HeLa细胞接种于6孔板中的玻璃盖玻片上,培养至70-80%汇合度。用PBS洗涤细胞后,在无血清培养基中,以5 uM C6-NBD鞘氨醇与脱脂BSA(摩尔比1:1)的复合物孵育30-60分钟(37℃)。孵育后,用含0.5% BSA的PBS洗涤细胞以去除表面结合的探针。对于活细胞成像,将细胞置于HEPES缓冲培养基中,在37℃下培养,并使用共聚焦显微镜进行成像,激发波长为488 nm,发射波长为530 nm。高尔基体通过与高尔基体特异性染料共染色进行识别。
动物实验
在体内动物研究中,将斑马鱼胚胎(受精后48-72小时)浸入含有1-10 μM C6-NBD鞘氨醇的胚胎水中,于28℃下孵育2-4小时。对于成年小鼠(6-8周龄),则通过尾静脉注射给予0.5-2 mg/kg剂量的C6-NBD鞘氨醇,该化合物溶于5% DMSO/生理盐水溶液中。在不同时间点(注射后0.5-24小时),采集组织,并使用氯仿/甲醇提取脂质。通过测量脂质提取物中的荧光强度来量化鞘脂的积累和转运。
药代性质 (ADME/PK)
C6-NBD鞘氨醇的药代动力学特性是典型的短链神经酰胺类似物。小鼠静脉注射(1 mg/kg)后,由于细胞快速摄取和代谢,该化合物的初始半衰期约为10-30分钟。它广泛分布于肝脏、肾脏、脾脏和脑组织,其中在肝脏中的蓄积量最高。NBD荧光团在生理条件下代谢稳定。该化合物主要经胆汁排泄,并转化为极性更强的代谢物。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
由于C6-NBD鞘氨醇是一种研究用试剂,并非用于人体,因此其具体毒性数据有限。在细胞培养中,浓度高达10 μM时通常耐受性良好,MTT法检测24-48小时后,细胞活力未见显著变化。浓度高于50 μM时,可能由于脂质过载而出现轻微的细胞毒性。在斑马鱼中,暴露于10 μM浓度24小时不会导致发育畸形或死亡。该化合物应被视为潜在刺激物进行处理。建议采取标准的实验室安全防护措施(佩戴手套、实验服和护目镜)。
参考文献

[1]. UV-MALDI mass spectrometry analysis of NBD-glycosphingolipids without an external matrix. J Am Soc Mass Spectrom. 2008 Jul;19(7):923-6.

其他信息
C6-NBD鞘氨醇是一种广泛应用于鞘脂生物学研究的荧光脂质探针。NBD荧光团对环境敏感,在疏水环境(例如细胞膜)中荧光强度显著增强。由于其快速且选择性的定位能力,该化合物是活细胞中高尔基体可视化的重要工具。它还用于高通量筛选,以鉴定鞘脂代谢的新型调节剂。本产品仅供研究使用,不得用于诊断或治疗用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C30H51N5O6
分子量
577.755848169327
精确质量
577.383
CAS号
114301-97-2
PubChem CID
71311691
外观&性状
Yellow to orange solid powder
密度
1.1±0.1 g/cm3
折射率
1.554
LogP
8.38
tPSA
169.82
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
24
重原子数目
41
分子复杂度/Complexity
697
定义原子立体中心数目
2
SMILES
CCCCCCCCCCCCCCC[C@H]([C@H](CO)NC(=O)CCCCCNC1=CC=C(C2=NON=C12)[N+](=O)[O-])O
InChi Key
GEZLBJRDZRUTOE-AHKZPQOWSA-N
InChi Code
InChI=1S/C30H51N5O6/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-15-18-27(37)25(23-36)32-28(38)19-16-14-17-22-31-24-20-21-26(35(39)40)30-29(24)33-41-34-30/h20-21,25,27,31,36-37H,2-19,22-23H2,1H3,(H,32,38)/t25-,27+/m0/s1
化学名
N-[(2S,3R)-1,3-dihydroxyoctadecan-2-yl]-6-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]hexanamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7308 mL 8.6541 mL 17.3082 mL
5 mM 0.3462 mL 1.7308 mL 3.4616 mL
10 mM 0.1731 mL 0.8654 mL 1.7308 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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