RORgamma

体外活性：LYC-55716是Lycera公司开发的一种新型免疫调节药物，是一种合成的口服小分子RAR相关孤儿受体γ（RORγ）激动剂。它将多种抗肿瘤机制结合到单一治疗中，通过调节基因表达来重新编程免疫细胞以改善功能，并减少免疫抑制机制。 2018年1月，Lycera宣布启动一项多中心1B期联合研究，针对晚期、复发或难治性实体瘤（如转移性非小细胞肺癌）患者联合派姆单抗（pembrolizumab）。激酶检测：LYC-55716是Lycera开发的一种新型免疫调节药物，是一种合成的口服小分子RAR相关孤儿受体γ（RORγ）激动剂。它将多种抗肿瘤机制结合到单一治疗中，通过调节基因表达来重新编程免疫细胞以改善功能，并减少免疫抑制机制。细胞检测：LYC-55716选择性地与核受体转录因子RORγ结合，形成受体复合物，易位至细胞核，并与ROR反应元件（RORE）结合，增强17型T细胞的功能、增殖和存活，包括Th17（辅助性 T 细胞）和 Tc17（细胞毒性 T 细胞）可能会增加 T 细胞上共刺激分子的表达并减少共抑制分子的表达，导致 T 细胞产生细胞因子和趋化因子增加，从而减少增殖调节性 T 细胞 (Treg) 的作用，并消除肿瘤诱导的免疫抑制。这最终会诱导 T 细胞介导的针对癌细胞的免疫反应，并导致肿瘤细胞生长减少。 RORγ 是参与 Th17/Tc17 分化的核受体转录因子，在免疫激活中发挥着关键作用。 LYC-55716 具有口服生物利用度，而包括 PD-1/PD-L1 抑制剂在内的新一代免疫肿瘤药物则通过注射给药。

在PK/PD测定中进一步评估了化合物37c/Cintirorgon (LYC-55716) 。RORγt在胸腺中高度表达，调节对胸腺细胞存活和发育重要的基因的表达。RORγ激动剂可以增加胸腺中RORγ靶基因如BclXL和Fbxo27的表达。雌性C57/BL6小鼠服用不同剂量的载体（1%吐温80）或RORγ激动剂Cintirorgon (LYC-55716) （37c），6-16小时后，分离胸腺细胞，制备RNA，并使用Q-PCR检测RORγ靶基因的表达。同时采集样本以测定Cintirorgon (LYC-55716) 的血浆浓度。RORγ靶基因表达的增加与血浆浓度的关系如图3所示，数据拟合得到37c的EC50为338 nM（95%置信区间=202-564 nM）。[2]

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在小鼠同基因肿瘤模型中也评估了选择性RORγ激动剂。来源于小鼠肿瘤的细胞系，无论是自发的还是化学诱导的，并重新植入具有免疫能力的小鼠体内，已被用于评估其他免疫疗法。在我们的小鼠结直肠腺癌（MC38）肿瘤模型中，MC38肿瘤细胞被皮下植入雌性C57/BL6小鼠的侧腹。肿瘤植入后3天开始激动剂治疗，每天口服管饲两次。图4显示了用载体或37c（30mg/kg，bid）治疗的荷瘤小鼠的结果。这项研究表明，肿瘤生长抑制率为46%（p<0.05）。该研究又重复了两次，肿瘤生长减少相似（49%和63%，p<0.05）。研究结束时评估肿瘤重量。还观察到肿瘤重量的类似减少。该化合物在所有研究中均具有良好的耐受性，对动物体重没有不良影响。化合物37c和17也抑制了4T1乳腺肿瘤模型中的肿瘤生长。[2]

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Cintirgon（LYC-55716）是一种RORγ激动剂，口服给药后与核受体转录因子RORγ形成受体复合物。然后，药物转移到细胞核，在那里它与ROR反应元件（RORE）结合以改善功能。17型T细胞，如Th17（辅助T细胞）和Tc17（细胞毒性T细胞），增殖并存活。Th17/Tc17分化由核受体转录因子RORγ促进，RORγ也是免疫激活所必需的。虽然下一代免疫肿瘤药物，如PD-1/PD-L1抑制剂，是通过注射提供的，但口服Cintirorgon (LYC-55716) 也具有生物利用性[1]。

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药效学[3]
药效学/靶点结合试验评估了已知RORγ靶基因的mRNA和蛋白质表达：体外刺激后的IL-17A、IL-17F和IL-22（19，20）。RORγ激动剂对这些基因的调节在健康志愿者和癌症患者外周血单核细胞（PBMC）和血液的体外工作中得到证实（22）。如上所述，在第1、2和15天的不同时间点从所有患者身上采集血液样本，并运送到中央实验室进行检测。所有分析物的药效学特征显示，在折叠诱导、细胞因子绝对滴度和PDmax时间方面，患者内部和患者之间存在相当大的差异（见补充表S2和补充图S2中显示的代表性数据）。鉴于RORγ表达和内源性RORγ激动剂的基线水平存在患者特异性差异，观察到的变异性并不出乎意料（补充图S3；参考文献23）。正式的PK/PD分析因每位患者反应幅度的可变性以及血浆浓度低于啮齿动物靶基因调节相关暴露的样本数量不足而变得复杂。然而，药效学数据表明，已经发生了靶向作用，并提供了药效学反应的定性证据，这可以从治疗后细胞因子产生的增加中得到证明（图2A）。此外，32名患者中有31名在至少1次药效学读数中表现出大于2倍的诱导作用，这与预测有效范围内Cintirgon（LYC-55716）暴露水平的药代动力学证据一致。

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疗效[3]
在研究的32名患者中，有25名患者的反应可评估。7例因6周内疾病进展（n=4）、患者退出（n=2）和不良事件（n=1）而无法评估。在可评估的患者中，2名（8%）实现了部分缓解，11名（44%）实现了2至12个月的疾病稳定。部分应答者和6名（24%）病情稳定的患者接受了>4个月的Cintirorgon (LYC-55716) 治疗（图3）。一名患有非小细胞肺癌[NSCLC；腺癌；PD-L1肿瘤比例评分（TPS）>50%]的患者在进入研究前接受了pembrolizumab一线治疗（4个周期，首次评估时进展），然后接受了卡铂/培美曲塞一线治疗（3个周期，初次评估时发展），观察到部分反应（图4A）。从治疗开始到最初反应的时间约为6个月；独立的中央放射学审查证实了部分反应。在一名患有肉瘤样乳腺癌症（转移性梭形细胞癌）的患者中发现了第二种部分反应，该患者在研究前接受了卡铂/紫杉醇一线治疗（3个周期，首次评估时进展），然后接受了吉西他滨/多烯紫杉醇一线疗法（6个周期后进展）（图4B）。在该患者中，在肿瘤负荷逐渐减少之后，最初反应的时间为8个月。截至2018年6月，仍有两名患者在接受治疗：一名患有肉瘤样乳腺癌症但有部分反应的患者和一名患有子宫内膜癌症但病情稳定9个月的患者。12名（48%）患者的最佳反应是疾病进展。两名癌症结直肠癌患者在首次评估后，在4个周期结束时因进展而停药，接受irRECIST随访。

ROR激动剂活性的生物测定[2]
使用（i）ROR-配体结合结构域（LBD）TR-FRET测定和（ii）HEK-293T细胞中Gal4-RORγ萤光素酶报告物测定来测试化合物增加RORγ活性的能力。检测程序如下所述

（i） ROR-配体结合结构域TR-FRET测定程序[2]
使用杆状病毒表达系统在SF9细胞中表达HIS标记的ROR-LBD蛋白。将裂解物在测定缓冲液（50 mM Tris pH 7.0、50 mM KCl、1 mM EDTA、0.1 mM DTT、0.01%BSA）中稀释，以获得ROR-384孔测定板中LBD终浓度约为3 nM（需要滴定每批蛋白质）。在测定缓冲液中制备来自辅活化剂SRC1（BiotinCPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS）的生物素化LXXLL肽储备，并将其加入每个孔中（终浓度为200 nM）。还将铕标记的抗HIS抗体（终浓度0.6 nM）和APC偶联的链霉抗生物素蛋白（终浓度30 nM）的溶液加入到每个孔中。ROR拮抗剂熊果酸也以2µM的终浓度加入。将化合物在DMSO中稀释，并在最终DMSO浓度为1%的测定缓冲液中进一步稀释。所分析的测试化合物的最高浓度为10µM。 [2]
将最终的测定混合物在4°C下孵育过夜或在室温下孵育2小时，并在Envision平板阅读器上测量荧光信号：（激发滤光片=340 nm；APC发射=665 nm；铕发射=615 nm；二向色镜=D400/D630；延迟时间=100µs，积分时间=200µs）。测试化合物的50%有效浓度（EC50）值由665nm的荧光信号除以615nm的荧光信号的商计算得出。在没有熊果酸或测试化合物的情况下，荧光信号的商被设置为100。最大响应被定义为信号中的上平台，通过使用PRISM中的4参数逻辑斯蒂模型进行线拟合来确定。[2]

（ii）HEK-293T细胞中Gal4-RORγ萤光素酶报告物测定程序[2]
HEK-293细胞的转染在以下方案中，用包含融合到pcDNA3.1neo质粒中RORγ配体结合结构域的Gal4 DNA结合结构域（Gal4 RORγ-LBD）的构建体以及包含pGL4.31 Gal4萤光素酶的报告构建体转染HEK-293细胞。使用空的pcDNA3.1neo和pGL4.31载体类似地制备对照细胞。将室温下的反式-IT试剂（60µL）逐滴加入OptiMEM（Invitrogen，1.5ml）中。通过倒置混合该试剂混合物，然后在室温下孵育5至30分钟。然后将其加入两种表达载体（每种5µg）的溶液中，混合，并在室温下孵育约20分钟。通过移除培养基、用TrypLE Express处理并孵育直至细胞从培养瓶底部分离（约2-5分钟），从培养瓶中收获HEK-293细胞。通过离心收集1000万个细胞，并将其重新悬浮在10毫升的Dulbecco改良Eagle培养基中，该培养基含有10%胎牛血清和100国际单位的青霉素和链霉素。将重新悬浮的细胞和S22转染混合物加入T75烧瓶中，混合并在37°C和5%CO2下孵育过夜。

RORγ活性的细胞测定[2]
如上所述收获细胞，计数并离心以获得所需数量的细胞，然后以0.75 x 106个细胞/mL的浓度重新悬浮在完全生长培养基中。将RORγ拮抗剂熊果酸以2µM的终浓度加入细胞中。将细胞以20µL的细胞悬浮液/孔（10000-15000个细胞/孔）铺在经过白色组织培养处理的384孔板上。将测试化合物以10mM溶解在DMSO中，然后稀释到完全生长培养基中，达到最终预期测试浓度的5倍。将这些5µL/孔的药物储备溶液加入组织培养板中。DMSO的最终浓度为0.2%。将平板短暂离心，然后在37°C和5%CO2下孵育过夜。为了进行测定，使组织培养板平衡至室温，并加入一种Glo萤光素酶试剂（5µL/孔）。将平板短暂离心，然后在室温下孵育10分钟。萤光素酶强度在Envision平板读数器 读取。相对于对照组测定RORγ活性，并使用PRISM绘制试验化合物浓度的函数图，以确定50%有效浓度（EC50）。在没有熊果酸或测试化合物的情况下，萤光素酶信号定义为100。最大响应是使用PRISM中的4参数逻辑模型通过线拟合确定的信号的上平台。

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人全血检测方法[2]
简而言之，将人全血收集到肝素钠管中，并加入T细胞活化剂。加入化合物，在37°C和5%CO2的条件下孵育样品18至22小时。通过Trizol/氯仿和RNeasy试剂盒纯化RNA，然后用于RT-PCR和qPCR。S23化合物10、3、1、0.3、0.1、0.03、0µM的稀释范围测试程序分析和T细胞刺激条件在肝素钠管（50 mL）中收集新鲜血液在3种条件下将T细胞活化剂与血液混合：活化剂-1：Dynabeads人T活化剂CD3/CD28，终浓度为15µL/mL；IL-1β和IL23的终浓度为25ng/mL； 活化剂-2：以1µg/mL的终浓度加入可溶性抗CD3和抗CD28终浓度，以10 ng/mL的终浓度添加IL-1β和IL-23。活化剂-3：以10 ngg/mL的终剂量加入PMA，以1µg/mL的终剂量添加Ionomycin。向5 mL活化血液中加入5µL 1000倍的药物储备或DMSO。DMSO的最终浓度为0.1%。在12孔组织培养板上每孔取1.5 mL血液，一式三份在37°C下用5%的二氧化碳孵育18至22小时。

药效学分析[2]
视黄酸受体相关孤儿受体γ (RORγ) 是一种转录因子，与胸腺细胞分化和成熟以及17型T细胞的分化和功能相关。RORγ的激活可增强胸腺细胞的存活，并诱导转录程序，从而驱动17型免疫反应并降低免疫抑制机制。RORγ的小分子激动剂可调节靶基因的表达，包括参与胸腺细胞促存活通路以及成熟免疫细胞释放细胞因子和趋化因子的基因。在本研究中，雌性C57BL/6小鼠单次口服剂量为3至100 mg/kg的Cintirorgon (LYC-55716)，并在6、10或16小时后处死（每个时间点或剂量组分别有4、5或10只动物）。胸腺组织富含RORγ+细胞，因此被采集。提取胸腺组织RNA后，通过实时定量聚合酶链式反应（qPCR）分析特定RORγ靶基因（Fbxo27、Xkrx、ReverbA、BclXL）的表达，以确定Cintirorgon (LYC-55716)的药效学（PD）效应。同时采集胸腺组织并采集血浆样本，测定Cintirorgon (LYC-55716)的浓度。Fbxo27在Cintirorgon (LYC-55716)治疗后表现出最稳定和最强的诱导窗口，因此被用于测定Cintirorgon (LYC-55716)的半数有效浓度（EC50）。基于Fbxo27诱导，LYC 55716的EC50为204 ng/mL (338 nM)。

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同源肿瘤模型[2]
将MC38小鼠结肠癌细胞或4T1小鼠乳腺癌细胞分别皮下植入C57/BL6或Balb/c小鼠的侧腹部。植入三天后，小鼠每天两次接受载体（1% Tween 80）或测试化合物（剂量见正文）的给药。植入后10-12天可测量肿瘤体积，每周使用游标卡尺测量肿瘤的长度和宽度，评估两到三次。肿瘤体积计算公式为：0.5 × (长度 × (宽度)²)。此外，还使用SCID.beige小鼠作为MC38肿瘤细胞的宿主小鼠，以确定其对免疫系统的依赖性。当肿瘤体积达到伦理终点（2000 mm³）或24天后，处死小鼠。

药代动力学[3]
在本研究中，于第1周期内进行了数天的稳健药代动力学采样。在稳态（第29天），药物暴露量从最低剂量150 mg BID线性增加至最高剂量450 mg BID，且在150 mg和300 mg BID剂量下暴露量存在重叠（补充表S1）。每日一次给药组的终末期浓度足以确定Cintirorgon (LYC-55716)的血浆消除半衰期约为13小时（范围8-23小时；数据存档）。
以小鼠胸腺中RORγ依赖性基因表达的调节作为临床前PK/PD模型，确定了50%和90%有效浓度（EC50和EC90）分别为204 ng/mL和1777 ng/mL（数据存档）。在所有队列中，第 29 天可获得药代动力学数据的患者（n = 27）中，100% 的患者 Cmax 超过了 EC50，93% 的患者超过了 EC90。在第 29 天的 Cmin 值方面，93% 的患者超过了 EC50，44% 的患者超过了 EC90。在 450 mg BID 给药方案（队列 5）下，中位最低血浆药物浓度 (Cmin) 超过了 EC50 约 22 倍，超过了 EC90 约 2.5 倍。每日两次给药方案的最低血浆药物浓度始终高于每日一次给药方案，从而更好地覆盖了 EC50 和 EC90 目标值（图 2B）。对 Cintirorgon (LYC-55716) (37c) 的进一步表征表明，它对 RORγ 具有选择性激活作用，而对其他核受体（包括 RORα 和 RORβ）则无明显作用（二者的 EC50 > 10 μM）。该化合物未显示遗传毒性，且在膜片钳实验中，其对人醚-a-go-go 相关钾通道 (hERG) 的 IC20 > 50 μM。该化合物对主要细胞色素 P450 (CYP) 同工酶（2D6、3A4、2C19）无抑制作用，代谢稳定性极佳，血浆蛋白结合率中等（小鼠 96.7%；人 98.6%）。对 37c 的钠盐进行了单剂量药代动力学研究，受试者为雄性和雌性 Sprague Dawley 大鼠（静脉注射 1 mg/kg，雄性大鼠口服 30、100 和 300 mg/kg，雌性大鼠口服 100 mg/kg）。口服生物利用度高（≥100%）。静脉注射后，半衰期为2.8小时，清除率高（2.8小时，48 mL/min/kg），分布容积（Vd）高（5.7 L/kg）。在雄性食蟹猴中也进行了37c钠盐的单剂量药代动力学研究（1 mg/kg静脉注射，10、30、100 mg口服）。口服生物利用度良好（≥100%），半衰期为6.6小时，清除率中等（6.6小时，7.49 mL/min/kg）。分布容积（Vd）中等（1.42 L/kg）。单剂量和多日研究的AUC值相似。这些研究结果为开展GLP毒理学研究提供了信心，并最终选择LYC-55716（Cintirorgon，37c）作为临床开发的候选药物。[2]

安全性和耐受性[2]
LYC-55716总体耐受性良好，大多数治疗相关不良事件为1-2级（表2）。未发生4级治疗相关不良事件。3级治疗相关不良事件包括贫血（n = 2，分别于第7周和第10周出现）、γ-谷氨酰转移酶升高（n = 1，于第3周出现）和低磷血症（n = 1，3次独立事件，于第4周出现）。研究期间无患者需要减少剂量。共有6例患者出现剂量中断，但均非由于治疗相关不良事件所致。 4a 组有两名患者因不良事件而退出研究：1 名患者因疲劳（2 级；可能与治疗相关）和体重减轻（2 级；与治疗无关）而退出，1 名患者因疾病进展而退出，并被记录为“因不良事件而退出”。

[1]. Lycera Announces Initiation of Phase 1/2a Study ARGON of Immuno-Oncology Candidate LYC-55716 in Patients with Advanced Solid Tumors. Jan 04, 2017.

[2]. Discovery of LYC-55716: A Potent, Selective, and Orally Bioavailable Retinoic Acid Receptor-Related Orphan Receptor-γ (RORγ) Agonist for Use in Treating Cancer. J Med Chem. 2021 Sep 23;64(18):13410-13428.

[3]. Phase 1 Open-Label, Multicenter Study of First-in-Class RORγ Agonist LYC-55716 (Cintirorgon): Safety, Tolerability, and Preliminary Evidence of Antitumor Activity. Clin Cancer Res. 2019 Jun 15;25(12):3508-3516.

辛替罗根是一种口服生物利用度高的视黄酸相关孤儿受体γ (RORγ) 激动剂，具有潜在的免疫调节和抗肿瘤活性。口服辛替罗根后，该药物选择性地与核受体转录因子RORγ结合，形成受体复合物，该复合物转位至细胞核，并与ROR反应元件 (RORE) 结合，从而增强17型T细胞（包括Th17辅助性T细胞和Tc17细胞）的功能、增殖和存活。这可能增加T细胞上共刺激分子的表达，并降低共抑制分子的表达，从而导致T细胞产生更多的细胞因子和趋化因子，减少调节性T细胞 (Treg) 的增殖，并消除肿瘤诱导的免疫抑制。最终，这会诱导T细胞介导的针对癌细胞的免疫反应，并导致肿瘤细胞生长减少。 RORg 是参与 Th17/Tc17 分化的核受体转录因子，在免疫激活中起着关键作用。 CINTIRORGON 是一种小分子药物，目前已完成 I 期临床试验（涵盖所有适应症），并有 2 个在研适应症。

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纽约和密歇根州安娜堡，2017 年 1 月 4 日 /PRNewswire/ -- 致力于开发突破性免疫调节药物的私营生物制药公司 Lycera Corp. 今日宣布，公司新型免疫肿瘤治疗候选药物 LYC-55716 已启动 I/IIa 期临床试验，用于治疗晚期、复发或难治性实体瘤患者。“我们在新型免疫调节剂的研发方面持续取得快速而显著的进展。这是 Lycera 在过去 12 个月内启动的第三项临床试验，也是我们首个进入临床的免疫肿瘤化合物，”Lycera 总裁兼首席执行官 Paul Sekhri 表示。 “我们临床前项目的良好结果证实，LYC-55716 可以调节表达 RORγ 的 T 淋巴细胞的基因表达，从而增强效应功能并降低免疫抑制，最终抑制肿瘤生长，并在体内临床前模型中提高生存率。这种重编程免疫细胞的过程与其他目前已获批准的免疫疗法不同，基于此，以及该药物可口服给药的特性，我们相信 LYC-55716 有望成为患者的一项重大突破。”达拉斯玛丽·克劳利医学研究中心主任兼首席研究员约翰·内穆奈蒂斯表示：“与许多刺激免疫系统或降低免疫抑制的免疫疗法不同，Lycera 的 RORγ 激动剂在临床前模型中已证明，它可以同时增强 T 细胞功能并降低免疫抑制机制。口服 RORγ 激动剂疗法可能展现出单药疗效，并与其他免疫疗法联合使用时显示出协同作用。” TX。“我们很高兴能与 Lycera 合作，并共同研发这种具有全新作用机制的化合物。”ARGON 试验（RORγ 激动剂 LYC-55716 治疗晚期癌症的试验）是一项针对晚期、复发或难治性实体瘤患者的 LYC-55716 的 1/2a 期研究。该研究的初始 1 期部分旨在确定 LYC-55716 的生物活性剂量或最大耐受剂量。该研究将采用 3+3 研究设计，即对复发或难治性实体瘤患者口服 LYC-55716。主要终点是安全性和耐受性，该研究旨在确定最大耐受剂量 (MTD) 和 2 期推荐剂量。确定剂量后，LYC-55716 将进入 2a 期，预计将招募约 40 名患者。该研究的2a期部分的主要疗效终点是根据实体瘤疗效评价标准（RECIST）评估的客观缓解率（ORR）。关于LYC-55716：LYC-55716是一种首创的口服选择性RORγ激动剂。视黄酸相关孤儿受体γ（RORγ）是一种核受体转录因子，可作为免疫细胞的主控开关。RORγ激动剂通过调节基因表达来重编程免疫细胞，从而增强其功能，并降低免疫抑制机制，最终在体内癌症临床前模型中抑制肿瘤生长并延长生存期。本质上，Lycera的RORγ激动剂策略“解除了免疫功能的刹车”，并“加速了免疫功能的发挥”。 [1]视黄酸受体相关孤儿受体γ（RORc、RORγ或NR1F3）是一种核受体主转录因子，驱动产生IL-17的辅助性T细胞（Th17）、细胞毒性T细胞（Tc17）以及部分固有淋巴细胞的功能和发育。肿瘤微环境中RORγ+ T细胞的激活被认为能够增强免疫浸润对抗肿瘤生长的能力。为了验证这一假设，研究人员优化了一类苯并恶嗪类化合物，最终获得了LYC-55716（37c），一种高效、选择性强且口服生物利用度高的小分子RORγ激动剂。LYC-55716在临床前肿瘤模型中能够抑制肿瘤生长并延长生存期，因此被提名为实体瘤患者的临床开发候选药物。 [2]

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目的：转录因子视黄酸受体相关孤儿受体γ (RORγ) 调控17型效应T细胞的分化和功能，是免疫细胞调控的关键。合成的RORγ激动剂通过调节免疫细胞基因表达来增强效应T细胞活性并降低免疫抑制。一项I期研究评估了LYC-55716（cintirorgon）——一种首创的口服小分子RORγ激动剂——在复发/难治性转移性癌症成人患者中的安全性和耐受性。患者和方法：患者接受为期28天的口服LYC-55716治疗；剂量和给药方案根据药代动力学特征和安全性确定。主要终点是安全性和耐受性。次要终点包括药代动力学和客观肿瘤缓解率。结果：32例入组患者接受了LYC-55716 150 mg BID至450 mg BID的治疗，未发生剂量限制性毒性。治疗相关不良事件（AE）主要为1-2级，包括腹泻（n = 11）、疲乏（n = 7）、贫血（n = 4）、食欲下降（n = 4）和恶心（n = 4）。3级AE包括贫血（n = 2）、γ-谷氨酰转移酶升高（n = 1）和低磷血症（n = 1）。药代动力学浓度达到了靶基因调控的预期水平。药效学结果表明RORγ通路被激活。两例患者（非小细胞肺癌和肉瘤样乳腺癌）获得确认的部分缓解； 11 例患者病情稳定 2 至 12 个月（其中 6 例接受了超过 4 个月的治疗）。结论：这些数据支持 LYC-55716 的安全性和耐受性，并支持选择 450 mg BID 剂量开展 2a 期研究，以评估 LYC-55716 在非小细胞肺癌、头颈癌、胃食管癌、肾细胞癌、尿路上皮癌和卵巢癌患者中的临床活性、安全性和生物标志物。[3]

C27H22F6NNAO6S

625.5119

625.096

C, 51.84; H, 3.55; F, 18.22; N, 2.24; Na, 3.68; O, 15.35; S, 5.13

2055538-47-9

2055538-47-9 (sodium);2055536-64-4 (free acid);

134694329

Typically exists as solid at room temperature

104

0

13

8

42

1030

1

S(C1=C([H])C([H])=C([H])C(C(F)(F)F)=C1[H])(N1C2C([H])=C(C3C([H])=C(C([H])=C(C=3[H])OC([H])(F)F)F)C([H])=C([H])C=2O[C@]([H])(C1([H])[H])C([H])([H])C(C(=O)[O-])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])(=O)=O.[Na+]

NWMACPZNQFABGF-BDQAORGHSA-M

InChI=1S/C27H23F6NO6S.Na/c1-26(2,24(35)36)13-20-14-34(41(37,38)21-5-3-4-17(11-21)27(31,32)33)22-10-15(6-7-23(22)39-20)16-8-18(28)12-19(9-16)40-25(29)30/h3-12,20,25H,13-14H2,1-2H3,(H,35,36)/q+1/p-1/t20-/m0./s1

sodium (S)-3-(6-(3-(difluoromethoxy)-5-fluorophenyl)-4-((3-(trifluoromethyl)phenyl)sulfonyl)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-2-yl)-2,2-dimethylpropanoate

LYC 55716;Cintirorgon sodium; 2055538-47-9; sodium;3-[(2S)-6-[3-(difluoromethoxy)-5-fluorophenyl]-4-[3-(trifluoromethyl)phenyl]sulfonyl-2,3-dihydro-1,4-benzoxazin-2-yl]-2,2-dimethylpropanoate; T6S6P87405; Cintirorgon Sodium?; LYC-55716 SODIUM; UNII-T6S6P87405; NWMACPZNQFABGF-BDQAORGHSA-M; Cintirorgon sodium; LYC-55716 sodium salt; LYC55716

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。