CY2 Non-Sulfonated

The primary "target" of CY2 Non-Sulfonated is not a biological receptor but rather primary amine groups (-NH2) on biomolecules such as proteins, peptides, and oligonucleotides. The dye contains a reactive group (typically an N-hydroxysuccinimide ester or other amine-reactive moiety) that forms a stable covalent bond with primary amines under mild conditions. This labeling allows the biomolecule to be detected or tracked using fluorescence-based techniques. The dye's spectral properties-excitation at 488 nm and emission at 520 nm-make it suitable for use in fluorescence microscopy, flow cytometry, and other fluorescence-based applications.

最佳储备液制备方法：1. 蛋白质制备：加入浓度为 2 mg/mL 的蛋白质（抗体）以达到标记效果。1) 蛋白质溶液的 pH 值应为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0，则使用 1 M 二氧化碳。2) 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，标记效率将显著降低。理想的标记效率可通过确保蛋白质浓度在 2 至 10 mg/mL 范围内来实现。3) 为确保最佳标记效果，蛋白质需要存在于含有伯胺（例如 Tris 或甘氨酸）和铵离子的澄清缓冲液中。2. 染料制备：要制备 10 mM 的储备液，请将无水 DMSO 加入 CY 染料中。使用玻璃管或涡旋振荡器充分混合。分装后，建议将 CY 储备液避光储存在 -20°C 或 -80°C 的环境中。 3. 染料工作液的用量 标记蛋白的量决定了标记反应所需的CY染料的用量。理想的CY染料和蛋白用量如下：假设使用500 μL标记的IgG（2 mg/mL；分子量=150,000）。将1 mg CY染料溶于100 μL DMSO中。这意味着需要3.95 μL的CY染料溶液。以CY3-NHS酯为例，详细计算步骤如下：1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) × mL (IgG) / MW (IgG) = 2 mg/mL × 0.5 mL / 150,000 mg/mmol = 6.7 × 10⁻⁶ mmol 2) mmol (CY3-NHS酯) = mmol (IgG) × 10 = 6.7 × 10⁻⁶ mmol × 10 = 6.7 × 10⁻⁵ mmol 3) μL (CY3-NHS酯) = mmol (CY3-NHS酯) × MW (CY3-NHS酯) / mg/μL (CY3-NHS酯) = 6.7 × 10⁻⁵ mmol × 590.15 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 3.95 μL (CY3-NHS酯) 使用方法 1. 标记反应 1：将 0.5 mL 蛋白质样品溶液加入到预估量的含有 10 mg/mL CY 染料的新鲜载体中。轻轻摇晃混匀，然后短暂收集反应管底部的离心物。避免重复操作。2) 将反应管置于黑暗处，轻轻摇晃，并在初始条件下静置 60 分钟。每周一次，每次 10 至 15 分钟，小心地将反应管翻转多次。2. 蛋白质封闭和脱盐 以下方法以 SepHadex G-25 柱封闭的染料偶联物为例。1) 按照制造商的说明，安装 SepHadex G-25 柱。2) 将反应混合物加入 SepHadex G-25 柱的上部。3) 当样品低于上部树脂表面时，加入 PBS（pH 7.2–7.4）。 4) 立即向所需样品中加入额外的 PBS 缓冲液（pH 7.2-7.4），以完成柱收缩。将包含所选染料-蛋白质组合的部件组装在一起。注意事项：1. CY 染料对光和湿度敏感。请立即配制 CY 溶液并丢弃未使用的部分。2. 低浓度的叠氮化钠（≤3 mM 或 0.02%）或硫柳汞（≤0.02 mM 或 0.01%）不会显著影响蛋白质标记；而 20-50% 的甘油会降低标记效率。3. 避免使用含有伯胺（例如 Tris、甘氨酸）或铵离子的缓冲液。它们会与待标记的蛋白质竞争，从而降低标记效率。 4. 对于未活化的染料，需先使用缩合溶液（500 ug/mL）（25952-53-8）。5. 本产品仅供专业人员进行科学研究，不得用于临床诊断或治疗，也不得用于食品或药品中。6. 为了您的安全和健康，请穿戴实验服并密切关注操作。

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在体外，非磺化CY2可用作生物分子的荧光标记物，用于检测和追踪。该染料通过与伯胺基团形成共价键来标记抗体、蛋白质、肽和寡核苷酸。标记后的生物分子可用于多种应用，包括免疫荧光、蛋白质印迹、流式细胞术和荧光原位杂交（FISH）。该染料的高消光系数和良好的水溶性使其在水性环境中具有高亮度和易用性。对于某些不需要磺化的应用，非磺化版本可能是更佳选择。

非磺化CY2主要用于体外标记应用，通常不用作体内治疗剂。然而，该染料可用于标记生物分子，随后将标记后的生物分子注射到动物体内进行成像研究。例如，可将CY2标记的抗体或肽注射到动物体内，利用荧光成像追踪其生物分布。该染料的激发波长为488 nm，发射波长为520 nm，可使用标准荧光成像系统进行成像。此外，该染料还可用于离体组织和细胞成像。

CY2非磺化型无细胞检测通常包括评估其标记效率和光谱特性。典型的蛋白质标记方案是将蛋白质溶解于合适的缓冲液（例如，pH 7.4的PBS）中，然后加入染料（溶于DMSO或其他合适的溶剂），染料与蛋白质的摩尔比为5-20:1。反应在室温下孵育1-2小时，然后使用尺寸排阻色谱或透析将标记的蛋白质与未反应的染料分离。通过测量标记蛋白质在488 nm和280 nm处的吸光度并计算染料与蛋白质的比例来确定标记效率。

在体外细胞实验中，将细胞培养于合适的培养基中，并与CY2非磺化标记的生物分子（例如抗体、肽）孵育。将标记的生物分子以不同浓度添加到培养基中，并在37℃下孵育1-24小时。孵育后，洗涤细胞以去除未结合的标记物，并使用荧光显微镜或流式细胞仪在488/520 nm的激发/发射波长下测量荧光强度。标记的生物分子可用于研究蛋白质定位、受体结合或内吞作用。

使用CY2非磺化染料进行的体内动物实验通常是成像研究，即将染料标记的生物分子注射到动物体内。常用的实验方案是将标记的生物分子（例如抗体、肽）通过静脉或腹腔注射注入小鼠或大鼠体内。然后在不同时间点使用配备合适激发和发射滤光片（激发波长488 nm，发射波长520 nm）的荧光成像系统对动物进行成像。由此可以评估标记生物分子在组织中的生物分布和积累情况。实验结束后，处死动物并收集组织进行离体成像。

非磺化CY2的分子量约为430 g/mol，分子式为C25H26N2O4。该染料可溶于水和有机溶剂，例如DMSO和甲醇。通常以粉末形式储存于-20℃，并避光保存。作为一种荧光染料，由于其不用作治疗剂，因此通常不对其药代动力学性质进行表征。当与生物分子偶联时，偶联物的药代动力学性质取决于生物分子，而非染料本身。

由于CY2非磺化荧光染料是一种用于标记和成像而非治疗的荧光染料，其毒性特征尚未得到充分表征。通常认为，在用于标记和成像的浓度下，该染料的毒性较低。然而，与任何化学品一样，应采取标准的实验室预防措施进行操作，包括使用个人防护装备，并应避光以防止光漂白。该化合物仅供研究使用。

[1]. Cyanine fluorophore derivatives with enhanced photostability. Nat Methods. 2011 Nov 13;9(1):68-71.

[2]. Shindy, H. A. (2017). Fundamentals in the chemistry of cyanine dyes: A review. Dyes and Pigments, 145, 505–513. doi:10.1016/j.dyepig.2017.06.029.

非磺化CY2（花菁2）（CAS号：260430-02-2）是一种花菁染料，用于标记肽、蛋白质和寡核苷酸中的氨基。其激发波长为488 nm，发射波长为520 nm，与FITC滤光片组兼容。该染料具有长波长、可调谐的吸收和发射、高消光系数和良好的水溶性等特点。它可用于荧光显微镜、流式细胞术和其他基于荧光的分析应用。非磺化CY2目前仅作为研究化合物用于标记和成像研究，尚未获准用于临床。

C25H26N2O4

418.484946727753

418.189

260430-02-2

Cy2 (iodine)

9953812

Pink to red solid powder

6

69.6

0

5

8

31

658

0

CCN\1C2=CC=CC=C2O/C1=C/C=C/C3=[N+](C4=CC=CC=C4O3)CCCCCC(=O)[O-]

WORLWSFCGZCFSW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H26N2O4/c1-2-26-19-11-5-7-13-21(19)30-23(26)15-10-16-24-27(18-9-3-4-17-25(28)29)20-12-6-8-14-22(20)31-24/h5-8,10-16H,2-4,9,17-18H2,1H3

6-[2-[(E,3E)-3-(3-ethyl-1,3-benzoxazol-2-ylidene)prop-1-enyl]-1,3-benzoxazol-3-ium-3-yl]hexanoate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 30 mg/mL (~71.69 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。