| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Cyanine5.5 maleimide chloride is not a pharmaceutical drug and does not target a biological receptor. It is a chemical labeling reagent specifically designed to covalently label thiol groups. The maleimide group targets free sulfhydryl groups (-SH) on cysteine residues in proteins and peptides. Once conjugated, the near-infrared fluorescent dye enables visualization of the labeled biomolecule in various applications, including fluorescence microscopy, live-cell imaging, Western blotting, flow cytometry, and in vivo imaging, where NIR fluorescence minimizes tissue autofluorescence and allows deep tissue penetration (up to 1-2 cm).
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| 体外研究 (In Vitro) |
最佳储备液制备方法:1. 蛋白质制备:加入浓度为 2 mg/mL 的蛋白质(抗体)以获得标记效果。1) 蛋白质溶液的 pH 值应为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0,则使用 1 M 二氧化碳。2) 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL,标记效率将显著降低。理想的标记效率可通过确保蛋白质浓度在 2 至 10 mg/mL 范围内来实现。3) 为确保最佳标记效果,蛋白质需要存在于含有伯胺(例如 Tris 或甘氨酸)和铵离子的澄清缓冲液中。2. 染料制备:将 CY 染料与无水 DMSO 混合,得到 10 mM 的储备液。分装后,CY 储备液应避光储存于 -20°C 或 -80°C。使用时,用玻璃管或涡旋振荡器剧烈混匀。 3. 工作染料溶液的用量 标记蛋白的量决定了标记反应所需的CY染料的量。以下是理想的蛋白和CY染料用量:假设需要500 μL浓度为2 mg/mL的IgG(分子量=150,000)作为标记蛋白。将含有1 mg CY染料的试管溶解于100 μL DMSO中,得到所需的3.95 μL CY溶液。以CY3-NHS酯为例,详细计算步骤如下:1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) × mL (IgG) / MW (IgG) = 2 mg/mL × 0.5 mL / 150,000 mg/mmol = 6.7 × 10⁻⁶ mmol 2) mmol (CY3-NHS酯) = mmol (IgG) × 10 = 6.7 × 10⁻⁶ mmol × 10 = 6.7 × 10⁻⁵ mmol 3) μL (甲基琥珀酸酮) = mmol (琥珀酸酮) × MW (琥珀酸酮) / mg/μL (琥珀酸酮) = 6.7 × 10⁻⁵ mmol × 590.15 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 3.95 μL (琥珀酸酮) 使用方法 1. 标记反应1) 仔细量取含有 10 mg/mL CY 染料的新鲜载体。轻轻摇晃混匀,然后迅速从反应管底部收集离心后的样品。将其加入 0.5 mL 蛋白质样品溶液中。避免重复操作。2) 将反应管置于光线昏暗处,轻轻摇晃,并在初始条件下静置 60 分钟。每周一次,每次 10 至 15 分钟,小心地将反应管翻转多次。2. 蛋白质脱盐和抑制 以 SepHadex G-25 柱封闭的染料偶联物为例,采用以下方法。1) 按照制造商的说明,安装 SepHadex G-25 柱。2) 将反应混合物加入 SepHadex G-25 柱的上部。3) 当样品低于上部树脂表面时,加入 PBS(pH 7.2–7.4)。 4) 为完成柱收缩,立即向目标样品中加入更多 PBS 缓冲液(pH 7.2–7.4)。将包含所选染料-蛋白质组合的部件组装在一起。
在体外,马来酰亚胺氯化物花菁5.5可用于标记含硫醇的生物分子,特别是具有可及半胱氨酸残基的蛋白质和抗体。马来酰亚胺基团在pH 6.5-7.5时与巯基反应,形成稳定的硫醚键。花菁5.5的近红外荧光(激发/发射波长约为675/694 nm)可降低生物样品中的背景自发荧光。标记的蛋白质保持其生物活性,可用于检测蛋白质-蛋白质相互作用、可视化亚细胞定位、通过蛋白质印迹法定量蛋白质表达以及追踪活细胞中的生物分子等应用。该染料具有高光稳定性和灵敏度,使其成为长期成像实验的理想选择。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内,花菁5.5马来酰亚胺氯化物并非直接给药;它用于预先标记靶向生物分子(例如抗体、肽、纳米颗粒),然后将这些标记物注射到动物体内进行近红外荧光成像研究。近红外波长(NIR)能够实现无创的深层组织成像(深度可达1-2厘米),且自发荧光极低,因此适用于监测活体小鼠体内的肿瘤靶向、药物递送、炎症和其他生物学过程。例如,可以将用Cy5.5马来酰亚胺标记的抗EGFR抗体静脉注射到携带皮下肿瘤异种移植瘤的小鼠体内,然后使用体内成像系统观察并定量分析标记抗体在肿瘤中的积累情况。
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| 酶活实验 |
对于非细胞标记实验,采用标准方案将花菁5.5马来酰亚胺氯化物偶联到含硫醇的蛋白质上。将蛋白质(2-10 mg/mL)溶于标记缓冲液(PBS,pH 7.2,含1-5 mM EDTA以防止二硫键形成)中。如果蛋白质含有需要还原以生成游离硫醇的二硫键,则用DTT(5-10 mM)或TCEP在室温下处理30分钟,然后进行缓冲液交换以去除还原剂。将染料溶解于无水DMSO中,浓度为10 mM。向蛋白质溶液中加入5-20倍摩尔过量的染料并混匀。反应在室温下避光孵育2小时或在4℃下过夜。未偶联的染料可通过尺寸排阻色谱(例如,Zeba旋转柱或Sephadex G-25)或透析去除。标记度 (DOL) 是通过测量 280 nm(蛋白质)和 675 nm(染料)处的吸光度,并使用制造商的校正因子来确定的。
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| 细胞实验 |
对于体外细胞实验,将细胞(例如 HeLa、MDA-MB-231)接种于玻璃底培养皿或 96 孔板中。使用上述方法,用花菁 5.5 马来酰亚胺氯化物标记目标蛋白(例如转铁蛋白、抗体、凝集素)。将细胞与标记蛋白(通常浓度为 1-50 ug/mL)在培养基中于 37℃ 孵育 30-60 分钟。对于活细胞成像,用 PBS 洗涤细胞以去除未结合的标记物,并置于不含酚红的培养基中培养。使用共聚焦显微镜采集图像,激发波长为 640 nm 或 660 nm,发射波长为 690-720 nm。对于固定细胞成像,洗涤细胞后,用 4% 多聚甲醛固定 15 分钟,然后用含有 DAPI 的荧光封片剂封片。对于流式细胞术分析,细胞通过胰蛋白酶消化收集,洗涤,重悬于 PBS 中,并在配备 640 nm 激光器和 660/20 nm 发射滤光片的流式细胞仪上进行分析。
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| 动物实验 |
在体内动物研究中,采用小鼠异种移植瘤模型评估肿瘤靶向性。将携带皮下肿瘤异种移植瘤(例如,MDA-MB-231乳腺癌或A549肺癌,体积为100-200 mm³)的裸鼠(6-8周龄,每组n=5)经尾静脉注射Cy5.5标记的肿瘤靶向抗体(例如,抗EGFR抗体)。剂量通常为50-200 μg标记抗体(溶于100-200 μL PBS)。小鼠用2%异氟烷麻醉,并在注射后不同时间点(0、6、12、24、48和72小时)使用配备640 nm激发滤光片和700 nm发射滤光片的体内成像系统采集近红外荧光图像。对肿瘤区域和主要器官(肝脏、肾脏、肺、心脏、脾脏)的荧光强度进行定量分析。在最终时间点,处死小鼠,并取出器官进行离体荧光成像,以确认生物分布情况。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
花菁5.5马来酰亚胺氯化物是一种近红外染料,具有优异的光稳定性和水溶性。马来酰亚胺基团在温和条件下可与硫醇发生特异性反应,生成的硫醚键在生理条件下稳定。该染料可溶于DMSO,在DMSO中可溶解至50 mg/mL (67.44 mM),用于标记应用。对于体内制剂,标记的偶联物通常用PBS配制。近红外荧光(激发/发射波长675/694 nm)使其具有深层组织穿透性和极低的自发荧光,使其成为体内成像研究的理想选择。该染料应储存在-20℃,避光防潮。DMSO储备液应储存在-80℃,保存时间最长可达6个月。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
该马来酰亚胺染料上不存在NHS酯基团;该化合物为马来酰亚胺,而非NHS酯。马来酰亚胺基团可能对皮肤和眼睛有刺激性。应遵循标准化学品安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜。该化合物应储存在-20℃,避光防潮。目前尚无具体的毒性数据。在用于标记的浓度(微摩尔至低毫摩尔)下,该化合物未表现出明显的细胞毒性。氯离子可提高溶解度和稳定性。该化合物不适用于人体治疗,仅供研究用途。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
花菁5.5马来酰亚胺氯化物是花菁(CY)染料家族的成员,其特征在于两个氮原子通过奇数个甲基单元连接,赋予染料较长的吸收和发射波长、较高的消光系数以及良好的水溶性。花菁染料常用于标记蛋白质、抗体和小分子化合物,以应用于基于荧光的检测和成像。马来酰亚胺官能团可与巯基选择性反应,这对于在特定位点(例如抗体中还原铰链区的半胱氨酸残基)标记抗体和蛋白质尤为有用。该化合物广泛应用于荧光显微镜、流式细胞术、蛋白质印迹和体内成像等研究领域。本产品仅供研究使用。
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| 分子式 |
C46H49CLN4O3
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|---|---|
| 分子量 |
741.359270811081
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| 精确质量 |
740.349
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| CAS号 |
2409591-45-1
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| PubChem CID |
91757869
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| 外观&性状 |
Purple to purplish red solid powder
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| tPSA |
72.7
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
12
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| 重原子数目 |
54
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| 分子复杂度/Complexity |
1530
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1(C(N(CCCCCC(=O)NCCN2C(C=CC2=O)=O)C2C=CC3=CC=CC=C3C1=2)=CC=CC=CC1=[N+](C2C=CC3=CC=CC=C3C=2C1(C)C)C)C.[Cl-]
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| InChi Key |
VNFHENZPAYHJJQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C46H48N4O3.ClH/c1-45(2)38(48(5)36-25-23-32-16-11-13-18-34(32)43(36)45)20-8-6-9-21-39-46(3,4)44-35-19-14-12-17-33(35)24-26-37(44)49(39)30-15-7-10-22-40(51)47-29-31-50-41(52)27-28-42(50)53;/h6,8-9,11-14,16-21,23-28H,7,10,15,22,29-31H2,1-5H3;1H
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| 化学名 |
6-[(2E)-1,1-dimethyl-2-[(2E,4E)-5-(1,1,3-trimethylbenzo[e]indol-3-ium-2-yl)penta-2,4-dienylidene]benzo[e]indol-3-yl]-N-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyl]hexanamide;chloride
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3489 mL | 6.7444 mL | 13.4887 mL | |
| 5 mM | 0.2698 mL | 1.3489 mL | 2.6977 mL | |
| 10 mM | 0.1349 mL | 0.6744 mL | 1.3489 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。