Cyanine5.5 maleimide chloride

目录号: V43502 纯度: ≥98%
Cyanine5.5 马来酰亚胺氯化物是一种 CY 染料。
Cyanine5.5 maleimide chloride CAS号: 2409591-45-1
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
花菁5.5马来酰亚胺氯化物是一种花菁染料。花菁(CY)是花菁的缩写,它是由两个氮原子通过奇数个甲基单元连接而成的化合物。花菁化合物具有长波长、吸收和发射可调、消光系数高、水溶性好、合成相对简单等特点。花菁染料常用于标记蛋白质、抗体和小分子化合物。对于蛋白质抗体的标记,可通过简单的混合反应完成结合。下面我们将介绍蛋白质抗体的标记方法,具有一定的参考意义。
花菁5.5马来酰亚胺氯化物(CAS号:2409591-45-1)是一种近红外(NIR)荧光染料,其分子结构中包含一个马来酰亚胺反应基团,可选择性地与生物分子上的巯基(-SH)偶联。在温和条件下(pH 6.5-7.5),该马来酰亚胺基团能特异性且高效地与蛋白质和肽中半胱氨酸残基的巯基反应,形成稳定的硫醚键。该化合物的分子式为C46H49ClN4O3,分子量为741.36 g/mol,最大激发波长/发射波长约为675/694 nm。氯离子可提高其溶解度和稳定性。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cyanine5.5 maleimide chloride is not a pharmaceutical drug and does not target a biological receptor. It is a chemical labeling reagent specifically designed to covalently label thiol groups. The maleimide group targets free sulfhydryl groups (-SH) on cysteine residues in proteins and peptides. Once conjugated, the near-infrared fluorescent dye enables visualization of the labeled biomolecule in various applications, including fluorescence microscopy, live-cell imaging, Western blotting, flow cytometry, and in vivo imaging, where NIR fluorescence minimizes tissue autofluorescence and allows deep tissue penetration (up to 1-2 cm).
体外研究 (In Vitro)
最佳储备液制备方法:1. 蛋白质制备:加入浓度为 2 mg/mL 的蛋白质(抗体)以获得标记效果。1) 蛋白质溶液的 pH 值应为 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0,则使用 1 M 二氧化碳。2) 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL,标记效率将显著降低。理想的标记效率可通过确保蛋白质浓度在 2 至 10 mg/mL 范围内来实现。3) 为确保最佳标记效果,蛋白质需要存在于含有伯胺(例如 Tris 或甘氨酸)和铵离子的澄清缓冲液中。2. 染料制备:将 CY 染料与无水 DMSO 混合,得到 10 mM 的储备液。分装后,CY 储备液应避光储存于 -20°C 或 -80°C。使用时,用玻璃管或涡旋振荡器剧烈混匀。 3. 工作染料溶液的用量 标记蛋白的量决定了标记反应所需的CY染料的量。以下是理想的蛋白和CY染料用量:假设需要500 μL浓度为2 mg/mL的IgG(分子量=150,000)作为标记蛋白。将含有1 mg CY染料的试管溶解于100 μL DMSO中,得到所需的3.95 μL CY溶液。以CY3-NHS酯为例,详细计算步骤如下:1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) × mL (IgG) / MW (IgG) = 2 mg/mL × 0.5 mL / 150,000 mg/mmol = 6.7 × 10⁻⁶ mmol 2) mmol (CY3-NHS酯) = mmol (IgG) × 10 = 6.7 × 10⁻⁶ mmol × 10 = 6.7 × 10⁻⁵ mmol 3) μL (甲基琥珀酸酮) = mmol (琥珀酸酮) × MW (琥珀酸酮) / mg/μL (琥珀酸酮) = 6.7 × 10⁻⁵ mmol × 590.15 mg/mmol / 0.01 mg/μL = 3.95 μL (琥珀酸酮) 使用方法 1. 标记反应1) 仔细量取含有 10 mg/mL CY 染料的新鲜载体。轻轻摇晃混匀,然后迅速从反应管底部收集离心后的样品。将其加入 0.5 mL 蛋白质样品溶液中。避免重复操作。2) 将反应管置于光线昏暗处,轻轻摇晃,并在初始条件下静置 60 分钟。每周一次,每次 10 至 15 分钟,小心地将反应管翻转多次。2. 蛋白质脱盐和抑制 以 SepHadex G-25 柱封闭的染料偶联物为例,采用以下方法。1) 按照制造商的说明,安装 SepHadex G-25 柱。2) 将反应混合物加入 SepHadex G-25 柱的上部。3) 当样品低于上部树脂表面时,加入 PBS(pH 7.2–7.4)。 4) 为完成柱收缩,立即向目标样品中加入更多 PBS 缓冲液(pH 7.2–7.4)。将包含所选染料-蛋白质组合的部件组装在一起。
在体外,马来酰亚胺氯化物花菁5.5可用于标记含硫醇的生物分子,特别是具有可及半胱氨酸残基的蛋白质和抗体。马来酰亚胺基团在pH 6.5-7.5时与巯基反应,形成稳定的硫醚键。花菁5.5的近红外荧光(激发/发射波长约为675/694 nm)可降低生物样品中的背景自发荧光。标记的蛋白质保持其生物活性,可用于检测蛋白质-蛋白质相互作用、可视化亚细胞定位、通过蛋白质印迹法定量蛋白质表达以及追踪活细胞中的生物分子等应用。该染料具有高光稳定性和灵敏度,使其成为长期成像实验的理想选择。
体内研究 (In Vivo)
在体内,花菁5.5马来酰亚胺氯化物并非直接给药;它用于预先标记靶向生物分子(例如抗体、肽、纳米颗粒),然后将这些标记物注射到动物体内进行近红外荧光成像研究。近红外波长(NIR)能够实现无创的深层组织成像(深度可达1-2厘米),且自发荧光极低,因此适用于监测活体小鼠体内的肿瘤靶向、药物递送、炎症和其他生物学过程。例如,可以将用Cy5.5马来酰亚胺标记的抗EGFR抗体静脉注射到携带皮下肿瘤异种移植瘤的小鼠体内,然后使用体内成像系统观察并定量分析标记抗体在肿瘤中的积累情况。
酶活实验
对于非细胞标记实验,采用标准方案将花菁5.5马来酰亚胺氯化物偶联到含硫醇的蛋白质上。将蛋白质(2-10 mg/mL)溶于标记缓冲液(PBS,pH 7.2,含1-5 mM EDTA以防止二硫键形成)中。如果蛋白质含有需要还原以生成游离硫醇的二硫键,则用DTT(5-10 mM)或TCEP在室温下处理30分钟,然后进行缓冲液交换以去除还原剂。将染料溶解于无水DMSO中,浓度为10 mM。向蛋白质溶液中加入5-20倍摩尔过量的染料并混匀。反应在室温下避光孵育2小时或在4℃下过夜。未偶联的染料可通过尺寸排阻色谱(例如,Zeba旋转柱或Sephadex G-25)或透析去除。标记度 (DOL) 是通过测量 280 nm(蛋白质)和 675 nm(染料)处的吸光度,并使用制造商的校正因子来确定的。
细胞实验
对于体外细胞实验,将细胞(例如 HeLa、MDA-MB-231)接种于玻璃底培养皿或 96 孔板中。使用上述方法,用花菁 5.5 马来酰亚胺氯化物标记目标蛋白(例如转铁蛋白、抗体、凝集素)。将细胞与标记蛋白(通常浓度为 1-50 ug/mL)在培养基中于 37℃ 孵育 30-60 分钟。对于活细胞成像,用 PBS 洗涤细胞以去除未结合的标记物,并置于不含酚红的培养基中培养。使用共聚焦显微镜采集图像,激发波长为 640 nm 或 660 nm,发射波长为 690-720 nm。对于固定细胞成像,洗涤细胞后,用 4% 多聚甲醛固定 15 分钟,然后用含有 DAPI 的荧光封片剂封片。对于流式细胞术分析,细胞通过胰蛋白酶消化收集,洗涤,重悬于 PBS 中,并在配备 640 nm 激光器和 660/20 nm 发射滤光片的流式细胞仪上进行分析。
动物实验
在体内动物研究中,采用小鼠异种移植瘤模型评估肿瘤靶向性。将携带皮下肿瘤异种移植瘤(例如,MDA-MB-231乳腺癌或A549肺癌,体积为100-200 mm³)的裸鼠(6-8周龄,每组n=5)经尾静脉注射Cy5.5标记的肿瘤靶向抗体(例如,抗EGFR抗体)。剂量通常为50-200 μg标记抗体(溶于100-200 μL PBS)。小鼠用2%异氟烷麻醉,并在注射后不同时间点(0、6、12、24、48和72小时)使用配备640 nm激发滤光片和700 nm发射滤光片的体内成像系统采集近红外荧光图像。对肿瘤区域和主要器官(肝脏、肾脏、肺、心脏、脾脏)的荧光强度进行定量分析。在最终时间点,处死小鼠,并取出器官进行离体荧光成像,以确认生物分布情况。
药代性质 (ADME/PK)
花菁5.5马来酰亚胺氯化物是一种近红外染料,具有优异的光稳定性和水溶性。马来酰亚胺基团在温和条件下可与硫醇发生特异性反应,生成的硫醚键在生理条件下稳定。该染料可溶于DMSO,在DMSO中可溶解至50 mg/mL (67.44 mM),用于标记应用。对于体内制剂,标记的偶联物通常用PBS配制。近红外荧光(激发/发射波长675/694 nm)使其具有深层组织穿透性和极低的自发荧光,使其成为体内成像研究的理想选择。该染料应储存在-20℃,避光防潮。DMSO储备液应储存在-80℃,保存时间最长可达6个月。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
该马来酰亚胺染料上不存在NHS酯基团;该化合物为马来酰亚胺,而非NHS酯。马来酰亚胺基团可能对皮肤和眼睛有刺激性。应遵循标准化学品安全操作规程:佩戴手套、实验服和护目镜。该化合物应储存在-20℃,避光防潮。目前尚无具体的毒性数据。在用于标记的浓度(微摩尔至低毫摩尔)下,该化合物未表现出明显的细胞毒性。氯离子可提高溶解度和稳定性。该化合物不适用于人体治疗,仅供研究用途。
参考文献

[1]. Physalis Mottle Virus-Like Particles as Nanocarriers for Imaging Reagents and Drugs. Biomacromolecules. 2017 Dec 11;18(12):4141-4153.

[2]. Ptaszek M. Rational design of fluorophores for in vivo applications. Prog Mol Biol Transl Sci. 2013;113:59-108.

[3]. Shindy, H. A. (2017). Fundamentals in the chemistry of cyanine dyes: A review. Dyes and Pigments, 145, 505–513. doi:10.1016/j.dyepig.2017.06.029.

其他信息
花菁5.5马来酰亚胺氯化物是花菁(CY)染料家族的成员,其特征在于两个氮原子通过奇数个甲基单元连接,赋予染料较长的吸收和发射波长、较高的消光系数以及良好的水溶性。花菁染料常用于标记蛋白质、抗体和小分子化合物,以应用于基于荧光的检测和成像。马来酰亚胺官能团可与巯基选择性反应,这对于在特定位点(例如抗体中还原铰链区的半胱氨酸残基)标记抗体和蛋白质尤为有用。该化合物广泛应用于荧光显微镜、流式细胞术、蛋白质印迹和体内成像等研究领域。本产品仅供研究使用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C46H49CLN4O3
分子量
741.359270811081
精确质量
740.349
CAS号
2409591-45-1
PubChem CID
91757869
外观&性状
Purple to purplish red solid powder
tPSA
72.7
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
12
重原子数目
54
分子复杂度/Complexity
1530
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CC1(C(N(CCCCCC(=O)NCCN2C(C=CC2=O)=O)C2C=CC3=CC=CC=C3C1=2)=CC=CC=CC1=[N+](C2C=CC3=CC=CC=C3C=2C1(C)C)C)C.[Cl-]
InChi Key
VNFHENZPAYHJJQ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C46H48N4O3.ClH/c1-45(2)38(48(5)36-25-23-32-16-11-13-18-34(32)43(36)45)20-8-6-9-21-39-46(3,4)44-35-19-14-12-17-33(35)24-26-37(44)49(39)30-15-7-10-22-40(51)47-29-31-50-41(52)27-28-42(50)53;/h6,8-9,11-14,16-21,23-28H,7,10,15,22,29-31H2,1-5H3;1H
化学名
6-[(2E)-1,1-dimethyl-2-[(2E,4E)-5-(1,1,3-trimethylbenzo[e]indol-3-ium-2-yl)penta-2,4-dienylidene]benzo[e]indol-3-yl]-N-[2-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)ethyl]hexanamide;chloride
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3489 mL 6.7444 mL 13.4887 mL
5 mM 0.2698 mL 1.3489 mL 2.6977 mL
10 mM 0.1349 mL 0.6744 mL 1.3489 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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