Cyanine7 DBCO

目录号: V43335 纯度: ≥98%
Cyanine7 DBCO 是一种水溶性(可溶于 H2O)的环状炔烃近红外荧光染料。
Cyanine7 DBCO CAS号: 2692677-77-1
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Cyanine7 DBCO 是一种水溶性(H2O 可溶性)近红外荧光染料,含有环状炔烃。
花菁7 DBCO(CAS号:2692677-77-1)是一种水溶性近红外(NIR)荧光染料,其分子结构中包含一个二苯并环辛炔(DBCO)基团,可用于无铜、应变促进的炔-叠氮环加成(SPAAC)点击化学反应。其分子式为C58H65F6N4O2P,分子量为995.13 g/mol。DBCO基团能够快速、特异性地与叠氮功能化的生物分子进行无催化剂偶联,而Cy7荧光团则提供近红外荧光,可用于深层组织成像。该化合物广泛应用于荧光显微镜、活细胞成像和体内成像研究。
生物活性&实验参考方法
靶点
Cyanine7 DBCO is not a pharmaceutical drug and does not target a biological receptor. Instead, the DBCO group specifically targets azide (-N3) groups on azide-functionalized biomolecules via copper-free, strain-promoted alkyne-azide cycloaddition (SPAAC). The reaction proceeds rapidly at room temperature without the need for a cytotoxic copper catalyst. The Cy7 fluorophore serves as a detection label, enabling visualization and tracking of azide-tagged molecules in biological systems. This compound is a chemical tool for bioconjugation and imaging applications.
体外研究 (In Vitro)
在体外,Cyanine7 DBCO 可用于通过无铜点击化学反应标记叠氮修饰的生物分子,例如蛋白质、肽、核酸、聚糖和脂质。DBCO 基团在室温下于水性缓冲液(PBS,pH 7.4)中与叠氮基团反应,无需铜,从而避免了 CuAAC 反应相关的细胞毒性。Cyanine7 的近红外荧光(激发/发射波长约为 750/773 nm)可降低背景自发荧光,增强组织穿透深度,并最大限度地减少光毒性,使其成为活细胞成像的理想选择。标记反应可在 30-120 分钟内完成。标记的生物分子保持其生物活性,可通过荧光显微镜或流式细胞仪进行可视化。
体内研究 (In Vivo)
在体内,Cyanine7 DBCO 可用作生物正交标记工具,用于活体动物的近红外荧光成像。DBCO 基团能够快速、无铜地与叠氮功能化的靶向配体(例如抗体、肽、纳米颗粒)偶联,而 Cyanine7 近红外荧光团则具有极低的自发荧光,可实现深层组织穿透(达 1-2 厘米)。Cyanine7 DBCO 的水溶性和高光稳定性使其成为实时追踪活体小鼠体内叠氮标记分子生物分布、荧光引导手术以及研究复杂生物环境中分子相互作用的理想选择。其成像深度和灵敏度均优于可见光波长染料。
酶活实验
对于非细胞介导的点击偶联反应,标准方案采用应变促进的炔-叠氮环加成反应(SPAAC)。将叠氮功能化的生物分子(0.5-1 mg/mL)与1.2-5倍摩尔过量的Cyanine7 DBCO在PBS缓冲液(pH 7.4)或必要时含5-10% DMSO的100 mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)中混合。反应在室温下避光孵育1-2小时。反应进程可通过SDS-PAGE电泳结合荧光扫描(激发波长750 nm,发射波长780 nm)或LC-MS进行监测。未偶联的染料可通过尺寸排阻色谱(Sephadex G-25,Zeba旋转柱)或透析去除。标记程度是通过使用分光光度计和制造商的校正因子测量 280 nm(蛋白质)和 750 nm(染料)处的吸光度来确定的。
细胞实验
对于体外细胞实验,首先用叠氮修饰的糖(例如,用Ac4GalNAz进行聚糖标记)对细胞进行代谢标记,或用叠氮功能化的抗体或靶向配体孵育细胞。将细胞接种于玻璃底培养皿中,培养24小时。对于代谢标记,将细胞在含有10-100 uM叠氮糖的培养基中孵育48-72小时。对于直接标记,将细胞在4℃下与叠氮功能化的抗体(10 ug/mL)孵育30分钟。然后洗涤细胞,并用4%多聚甲醛在室温下固定15分钟(用于固定细胞成像),或直接用于活细胞实验。将固定细胞在室温下与10-20 uM Cyanine7 DBCO在PBS中孵育30-60分钟。对于活细胞标记,将细胞在无血清培养基中与 10-20 uM Cyanine7 DBCO 于 37°C 孵育 30 分钟。洗涤后,使用具有 750 nm 激发光和 780 nm 发射光滤光片的共聚焦显微镜对细胞进行成像。
动物实验
活体动物近红外荧光成像:使用皮下移植肿瘤异种移植瘤(100-200 mm³)的雌性BALB/c裸鼠(6-8周龄)。首先将叠氮基功能化的肿瘤靶向抗体(例如抗EGFR抗体)在室温下于PBS缓冲液中通过SPAAC反应与Cyanine7 DBCO偶联2小时。纯化标记抗体后,以每只小鼠100-200 μg的剂量,溶于200 μL PBS中,经尾静脉注射给药。小鼠用2%异氟烷麻醉。注射后0、2、6、12、24、48和72小时,使用配备745 nm激发滤光片和800 nm发射滤光片的活体成像系统采集全身荧光图像。对肿瘤及主要器官(肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、心脏)的荧光强度进行定量分析。在实验结束时处死小鼠,并取出器官进行离体成像,以确认生物分布情况。
药代性质 (ADME/PK)
花菁7 DBCO的分子量为995.13 g/mol,分子式为C58H65F6N4O2P。该化合物具有高水溶性(水溶性近红外荧光染料)、高消光系数和良好的光稳定性。它可溶于DMSO和水。储备液(10 mM)用DMSO配制。工作液(0.5-5 μM,用于标记)用PBS或细胞培养基配制。该化合物应储存于-20℃,避光防潮。在溶液中,密封避光保存,于-80℃可稳定保存6个月,于-20℃可稳定保存1个月。DBCO基团在pH 6-8的水性缓冲液中可稳定保存数小时,但长时间储存可能导致水解。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
作为一种用于研究的荧光探针,Cyanine7 DBCO 不适用于人类治疗或诊断。目前尚无具体的毒性数据。该化合物应被视为潜在刺激物,并应遵循标准的化学品安全防护措施(佩戴手套、实验服和护目镜)。DBCO 基团在标记浓度下被认为是生物正交的且无毒的。在细胞培养中,该化合物的使用浓度为 5-20 μM,未观察到明显的细胞毒性。在动物研究中,标记的抗体或偶联物通常耐受性良好。该化合物对光敏感,应避光保存以防止光漂白。
参考文献

[1]. Design and Synthesis of Core–Shell Microgels with One-Step Clickable Crosslinked Cores and Ultralow Crosslinked Shells. Macromol Chem Phys. 2020, 221, 2000156.

其他信息
Cyanine7 DBCO 是一种用途广泛的生物正交标记试剂,适用于近红外荧光成像。DBCO 基团可实现无铜点击化学反应,这对于铜具有毒性的活细胞和体内应用至关重要。Cyanine7 近红外荧光团具有深层组织穿透性和极低的背景自发荧光,可实现对活体动物的非侵入性成像。该化合物广泛应用于化学生物学、糖成像和临床前成像研究,用于实时追踪叠氮功能化分子。它在荧光引导手术、肿瘤成像和药物递送研究中尤为重要。本产品仅供研究使用。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C58H65F6N4O2P
分子量
995.126497030258
精确质量
994.474
CAS号
2692677-77-1
PubChem CID
164577390
外观&性状
Pale purple to purple solid powder
tPSA
55.7
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
15
重原子数目
71
分子复杂度/Complexity
1940
定义原子立体中心数目
0
SMILES
P(F)(F)(F)(F)F.C([N+]1=C(C(C)(C)C2=CC=CC=C12)C=CC1CCC/C(=C\C=C2\N(C3=CC=CC=C3C\2(C)C)C)/C=1)CCCCC(=O)NCCCCCC(N1CC2=CC=CC=C2C#CC2=CC=CC=C12)=O.[F-] |t:19|
InChi Key
BCPAGJWDXBIMJR-UHFFFAOYSA-O
InChi Code
InChI=1S/C58H64N4O2.F6P/c1-57(2)48-26-13-16-29-51(48)60(5)53(57)37-33-43-21-20-22-44(41-43)34-38-54-58(3,4)49-27-14-17-30-52(49)61(54)40-19-7-8-31-55(63)59-39-18-6-9-32-56(64)62-42-47-25-11-10-23-45(47)35-36-46-24-12-15-28-50(46)62;1-7(2,3,4,5)6/h10-17,23-30,33-34,37-38,41H,6-9,18-22,31-32,39-40,42H2,1-5H3;/q;-1/p+1
化学名
N-[6-(2-azatricyclo[10.4.0.04,9]hexadeca-1(16),4,6,8,12,14-hexaen-10-yn-2-yl)-6-oxohexyl]-6-[3,3-dimethyl-2-[2-[3-[2-(1,3,3-trimethylindol-1-ium-2-yl)ethenyl]cyclohex-2-en-1-ylidene]ethylidene]indol-1-yl]hexanamide;hexafluorophosphate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.0049 mL 5.0245 mL 10.0489 mL
5 mM 0.2010 mL 1.0049 mL 2.0098 mL
10 mM 0.1005 mL 0.5024 mL 1.0049 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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