cyt-PTPε Inhibitor-1

目录号: V30553 纯度: ≥98%
cyt-PTPε Inhibitor-1 是细胞质蛋白酪氨酸磷酸酶 cyt-PTPε 的有效抑制剂。
cyt-PTPε Inhibitor-1 CAS号: 428478-94-8
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
cyt-PTPε Inhibitor-1 是细胞质蛋白酪氨酸磷酸酶 cyt-PTPε 的有效抑制剂。它与 cyt-PTPε 的催化结构域结合并抑制 c-Src 的激活(c-Src 去磷酸化)。具有抗破骨细胞活性。
生物活性&实验参考方法
靶点
- Protein Tyrosine Phosphatase epsilon (cyt-PTPε):cyt-PTPε Inhibitor-1 exhibited potent inhibitory activity against recombinant human cyt-PTPε, with an IC₅₀ value of 0.85 μM. It showed high selectivity for cyt-PTPε, with no significant inhibition (IC₅₀ > 50 μM) against other related protein tyrosine phosphatases (PTPs) including PTP1B, TCPTP, SHP-1, and SHP-2[1]
体外研究 (In Vitro)
cyt-PTPε Inhibitor-1(化合物 62)是一种强效细胞质蛋白酪氨酸磷酸酶 epsilon 抑制剂,具有抗破骨特性 [1]。
- cyt-PTPε酶抑制活性:cyt-PTPε Inhibitor-1以剂量依赖性方式抑制重组cyt-PTPε。在0.1、0.5、1和5 μM浓度下,cyt-PTPε活性的抑制率分别为12.3%、45.6%、82.1%和96.8%(相对于DMSO对照组)[1]
- 抑制RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化:在核因子κB受体激活剂配体(RANKL,50 ng/mL)刺激的RAW264.7细胞中,cyt-PTPε Inhibitor-1(0.5、1、2 μM)呈剂量依赖性减少抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性破骨细胞数量。2 μM浓度下,TRAP阳性细胞数从RANKL对照组的85±7个降至23±4个,抑制率达72.9%[1]
- 抑制破骨细胞功能(骨吸收):在磷酸钙包被板的骨吸收实验中,cyt-PTPε Inhibitor-1(2 μM)较RANKL对照组减少68.3%的骨吸收陷窝面积;每个破骨细胞的平均吸收陷窝面积从1250±110 μm²降至398±45 μm²[1]
- 调节RANKL介导的信号通路:Western blot分析显示,cyt-PTPε Inhibitor-1(2 μM)抑制RAW264.7细胞中RANKL诱导的细胞外信号调节激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化;同时减少破骨细胞分化关键转录因子——活化T细胞核因子c1(NFATc1)的核转位[1]
体内研究 (In Vivo)
- 抑制去卵巢(OVX)诱导的小鼠骨丢失:8周龄雌性C57BL/6小鼠行OVX手术建立骨质疏松模型,口服cyt-PTPε Inhibitor-1(10、20 mg/kg/天)8周后,腰椎骨密度(BMD)显著升高。20 mg/kg剂量下,腰椎BMD为0.185±0.006 g/cm²,较OVX对照组(0.150±0.005 g/cm²)升高23.3%,接近假手术组(0.192±0.007 g/cm²)[1]
- 改善OVX小鼠骨微结构:显微计算机断层扫描(μCT)分析显示,cyt-PTPε Inhibitor-1(20 mg/kg)使骨小梁数量(Tb.N)从OVX对照组的2.1±0.2 mm⁻¹增至3.8±0.3 mm⁻¹,骨小梁厚度(Tb.Th)从0.065±0.004 mm增至0.092±0.005 mm,同时减少骨小梁分离度(Tb.Sp)从0.45±0.03 mm降至0.28±0.02 mm[1]
- 体内减少破骨细胞数量:OVX小鼠股骨切片的TRAP染色显示,cyt-PTPε Inhibitor-1(20 mg/kg)较OVX对照组减少56.7%的骨表面TRAP阳性破骨细胞数量(从12.5±1.3个/mm降至5.4±0.8个/mm)[1]
酶活实验
- cyt-PTPε抑制活性实验:将重组人cyt-PTPε(50 nM)与不同浓度的cyt-PTPε Inhibitor-1(0.01-50 μM)在含50 mM HEPES(pH 7.4)、100 mM NaCl、5 mM二硫苏糖醇(DTT)和0.1%牛血清白蛋白(BSA)的反应缓冲液中,于37°C孵育30分钟。加入4-硝基苯磷酸酯(pNPP,5 mM)作为底物启动反应,37°C继续孵育60分钟后,在405 nm处测定吸光度以计算酶活性,通过剂量-反应曲线确定IC₅₀值[1]
- 其他PTPs选择性实验:采用与cyt-PTPε实验相同的反应体系,检测cyt-PTPε Inhibitor-1(50 μM)对PTP1B、TCPTP、SHP-1和SHP-2的抑制活性。测定各PTP的酶活性并计算抑制率,评估化合物的选择性[1]
细胞实验
- RAW264.7细胞破骨细胞分化实验:将RAW264.7细胞以5×10³个/孔的密度接种于24孔板,用含10%胎牛血清(FBS)的α-MEM培养基培养。24小时后,更换为含RANKL(50 ng/mL)和不同浓度cyt-PTPε Inhibitor-1(0.5、1、2 μM)的新鲜培养基,每2天换液一次,共培养5天。第5天用4%多聚甲醛固定细胞15分钟,经TRAP染色试剂盒染色后,在光学显微镜下计数TRAP阳性多核细胞(≥3个核)[1]
- 骨吸收实验:在磷酸钙包被的24孔板中接种RAW264.7细胞(1×10⁴个/孔),加入RANKL(50 ng/mL)和cyt-PTPε Inhibitor-1(2 μM)培养7天,每2天换液一次。7天后用5%次氯酸钠处理5分钟去除细胞,蒸馏水清洗平板后,显微镜下观察骨吸收陷窝,通过图像分析软件计算吸收面积[1]
- 信号通路Western blot实验:将RAW264.7细胞接种于6孔板(2×10⁵个/孔),用cyt-PTPε Inhibitor-1(2 μM)处理1小时后,加入RANKL(50 ng/mL)分别刺激0、15、30和60分钟。用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞,蛋白裂解液经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜,加入抗p-ERK、ERK、p-p38、p38和NFATc1的一抗孵育,再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗,通过增强化学发光(ECL)系统显影,图像分析软件定量条带强度[1]
动物实验
卵巢切除(OVX)诱导骨质疏松小鼠模型的建立:8周龄雌性C57BL/6小鼠用异氟烷麻醉。沿腹部正中线切开,切除双侧卵巢(OVX组)。假手术组进行相同的手术操作,但不切除卵巢。小鼠术后恢复1周后进行药物治疗[1]
- 给药方案:将细胞色素PTPε抑制剂-1溶解于二甲基亚砜(DMSO)、聚乙二醇400(PEG400)和生理盐水(体积比1:4:5)的混合溶液中。OVX+药物组的小鼠每日一次灌胃给予该化合物,剂量分别为10 mg/kg或20 mg/kg,持续8周。卵巢切除(OVX)对照组和假手术组均灌胃给予等体积的溶剂(DMSO/PEG400/生理盐水)[1]
- 样本采集和分析方案:治疗8周后,将小鼠麻醉并处死。采集腰椎,采用双能X射线吸收法(DXA)测量骨密度(BMD)。取右侧股骨,用4%多聚甲醛固定48小时,然后进行μCT分析以评估骨微结构。取左侧股骨,用10%乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙2周,石蜡包埋,切片,并用抗坏血酸酸性磷酸酶(TRAP)染色以计数破骨细胞[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外细胞毒性:浓度高达 5 μM 时,cyt-PTPε 抑制剂-1 对 RAW264.7 细胞未显示出明显的细胞毒性。与 DMSO 对照组相比,细胞活力(MTT 法测定)>90%。即使在 10 μM 浓度下,细胞活力仍保持在 82.5%[1]
- 体内毒性:在接受 cyt-PTPε 抑制剂-1(20 mg/kg/天,持续 8 周)治疗的卵巢切除 (OVX) 小鼠中,未观察到明显的毒性迹象,包括体重无显著变化(药物组:24.5 ± 1.2 g;OVX 对照组:23.8 ± 1.1 g),以及血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 和肌酐水平正常。肝脏、肾脏和脾脏的组织学检查也未发现异常病理变化[1]
参考文献

[1]. Identification of N-(5-(phenoxymethyl)-1,3,4-thiadiazol-2-yl)acetamide derivatives as novel protein tyrosine phosphatase epsilon inhibitors exhibiting anti-osteoclastic activity. ioorg Med Chem. 2018 Oct 1;26(18):5204-5211.

其他信息
cyt-PTPε抑制剂-1是一种新型的N-(5-(苯氧甲基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺衍生物,被设计为胞质蛋白酪氨酸磷酸酶ε (cyt-PTPε) 的选择性抑制剂[1]
- cyt-PTPε抑制剂-1的抗破骨细胞机制涉及抑制cyt-PTPε的活性,进而抑制RANKL介导的ERK/p38 MAPK信号通路的激活,并减少NFATc1的核转位,从而抑制破骨细胞分化和骨吸收功能[1]
- cyt-PTPε抑制剂-1显示出作为骨质疏松症治疗药物的潜力,因为它能有效逆转卵巢切除术(OVX)小鼠的骨丢失,且无明显毒性,凸显了其临床转化应用前景。潜力[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C19H20N4O2S
分子量
368.452702522278
精确质量
368.13
CAS号
428478-94-8
PubChem CID
1418650
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
3.9
tPSA
104
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
26
分子复杂度/Complexity
459
定义原子立体中心数目
0
SMILES
S1C(=NN=C1COC1C=CC(C)=CC=1C)NC(NC1C=CC(C)=CC=1)=O
InChi Key
QUSAMXSWOZSTRQ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C19H20N4O2S/c1-12-4-7-15(8-5-12)20-18(24)21-19-23-22-17(26-19)11-25-16-9-6-13(2)10-14(16)3/h4-10H,11H2,1-3H3,(H2,20,21,23,24)
化学名
1-[5-[(2,4-dimethylphenoxy)methyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]-3-(4-methylphenyl)urea
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.7141 mL 13.5704 mL 27.1407 mL
5 mM 0.5428 mL 2.7141 mL 5.4281 mL
10 mM 0.2714 mL 1.3570 mL 2.7141 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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