| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
D-18 targets two distinct mechanisms: 1) TLR7 and TLR8 - endosomal receptors that recognize single-stranded RNA. D-18 acts as an agonist for both human TLR7 (EC50 = 24 nM) and TLR8 (EC50 = 10 nM) in NF-kappaB reporter assays. Activation leads to MyD88-dependent signaling, resulting in pro-inflammatory cytokine production (IFN-alpha, TNF-alpha, IL-12) and DC maturation. 2) Histone methyltransferase G9a (EHMT2) - D-18 inhibits G9a (IC50 not disclosed), leading to reduced H3K9me2 at the PD-L1 promoter, thereby increasing PD-L1 transcription. This dual activity is unique, as most TLR agonists do not affect PD-L1 epigenetically.
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| 体外研究 (In Vitro) |
在无细胞TLR结合实验中，D-18可与TLR7胞外结构域（SPR，Kd = 80 nM）和TLR8（Kd = 35 nM）结合，但不与TLR3、TLR4或TLR9结合。在G9a酶活性测定（使用重组G9a和组蛋白H3肽底物）中，D-18抑制G9a的IC50值为120 nM（通过基于荧光的甲基转移酶测定法测定）。在基于细胞的PD-L1启动子荧光素酶报告基因测定（在B16-F10黑色素瘤细胞中），D-18（0.1-10 uM）可使荧光素酶活性增加至6倍（3 uM时EC50 = 0.5 uM）。G9a抑制剂UNC0638可消除此效应，证实了G9a的参与。在人外周血单核细胞 (PBMC) 中，D-18 (10-1000 nM) 可诱导 IFN-α (EC50 = 50 nM)、TNF-α (EC50 = 30 nM) 和 IL-12p70 (EC50 = 80 nM) 的分泌，该结果通过 ELISA 检测得出。它还能上调 CD14+ 单核细胞上的 CD80、CD86 和 HLA-DR 表达（树突状细胞成熟标志物）。在 B16-F10 小鼠黑色素瘤细胞（PD-L1 基础表达水平较低）中，D-18 (1-10 uM) 可在 24 小时内使细胞表面 PD-L1 表达增加 2 至 3 倍（通过流式细胞术检测），而 G9a 抑制剂 BIX-01294 可阻断这一效应。 D-18 与 IFN-γ 联合作用可协同上调 PD-L1。在浓度高达 10 uM 时，48 小时内未观察到对 B16-F10 细胞的细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在同源黑色素瘤小鼠模型（将B16-F10细胞皮下植入C57BL/6小鼠体内）中，单独使用D-18（10 mg/kg，每日腹腔注射）可使肿瘤生长减少40%，与对照组相比（第18天肿瘤体积：800 mm3 vs 1400 mm3）。当与抗PD-1抗体（200 ug，每3天腹腔注射）联合使用时，肿瘤体积减少85%（肿瘤体积200 mm3），30%的小鼠肿瘤完全消退。在CT26结肠癌模型（BALB/c小鼠）中，D-18（10 mg/kg，口服）联合抗PD-1抗体可抑制70%的肿瘤生长并延长生存期。在4T1乳腺癌模型（转移性）中，D-18（10 mg/kg，腹腔注射）联合抗PD-1抗体可使肺转移减少80%，与单独使用抗PD-1抗体相比。从机制上讲，D-18 处理的小鼠的肿瘤中 CD8+ T 细胞浸润增加（通过 IHC 检测增加 3 倍），肿瘤细胞上的 PD-L1 表达增加（增加 2.5 倍），同时 Ifng、Gzmb 和 Cxcl9 转录本也升高。
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| 酶活实验 |
TLR7/8 结合实验：SPR：将生物素标记的重组人 TLR7（胞外结构域）固定在链霉亲和素传感器芯片上。将 D-18（0.1-1000 nM）溶于运行缓冲液（PBS，0.05% Tween-20，0.1% BSA）中，注入芯片上方。监测结合和解离过程。使用 1:1 Langmuir 模型计算 Kd 值。TLR8 的实验方案类似。 G9a抑制实验：将重组G9a（0.5 ng/uL）与2 uM组蛋白H3肽（氨基酸残基1-21，生物素标记）和1 uM SAM（S-腺苷甲硫氨酸）在含有不同浓度D-18（0.01-1000 nM）的测定缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 8.5，50 mM NaCl，1 mM DTT，0.01% Tween-20）中孵育。25℃孵育60分钟后终止反应，使用抗H3K9me2抗体通过时间分辨荧光法检测甲基化产物，并测定IC50值。
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| 细胞实验 |
PBMC细胞因子诱导实验：将从健康供体分离的人PBMC接种于96孔板（2×10⁵个细胞/孔），培养基为RPMI-1640 + 10% FBS。加入D-18（1-1000 nM）或溶剂（0.1% DMSO）。20小时后收集上清液，并用ELISA法检测细胞因子水平（IFN-α、TNF-α、IL-12p70）。B16-F10细胞PD-L1上调实验：将细胞接种于6孔板（5×10⁵个细胞/孔），并用D-18（0.1-10 uM）处理24小时。收集细胞，用PE标记的抗小鼠PD-L1抗体（克隆10F.9G2）染色，并通过流式细胞术进行分析。计算平均荧光强度（MFI）。为了产生协同作用，用 D-18 加重组 IFN-γ (10 ng/mL) 处理细胞。
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| 动物实验 |
B16-F10同源肿瘤模型：将5×10⁵个B16-F10细胞皮下注射到6-8周龄雌性C57BL/6小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约50 mm³（第7天）时，将小鼠随机分组（n=10）。D-18溶于10% DMSO/40% PEG400/50%生理盐水中，以10 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，连续14天。抗PD-1抗体（克隆RMP1-14，BioXCell）以200 μg的剂量腹腔注射，每3天一次。每2天测量一次肿瘤体积，并记录体重。第21天，切除肿瘤，称重，并进行流式细胞术（CD45、CD3、CD8、CD4、FoxP3）和qPCR（Ifng、Gzmb、Pdcd1、Cd274）分析。为评估生存率，持续观察小鼠直至肿瘤体积达到2000 mm³或第60天。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠药代动力学研究（n=4）：D-18（腹腔注射10 mg/kg，口服20 mg/kg）。腹腔注射：Cmax = 1.8 μM，Tmax = 0.5 h，t1/2 = 2.3 h，AUC = 5.1 μM·h。口服：Cmax = 0.9 μM，Tmax = 1 h，AUC = 3.2 μM·h，生物利用度 = 31%。分布容积（Vss）= 1.6 L/kg，清除率 = 1.2 L/h/kg。血浆蛋白结合率：小鼠89%，人85%。体外人肝微粒体代谢稳定性：t1/2 = 42 min。主要代谢物为葡萄糖醛酸苷（UPLC-QTOF）。10 μM浓度下未观察到CYP抑制。脑/血浆比值 = 0.1。该化合物具有中等的口服药代动力学特性，适合每日给药。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在小鼠14天重复给药毒性研究中（腹腔注射，5、15、30 mg/kg/天），无观察到不良反应剂量（NOAEL）为15 mg/kg。30 mg/kg剂量组小鼠出现轻度体重下降（8%）、毛发蓬乱，血清IL-6（升高3倍）和TNF-α（升高2.5倍）水平升高，与TLR7/8激动剂（细胞因子释放）作用一致。无死亡，无器官毒性（肝、肾、脾组织学检查正常）。30 mg/kg剂量组观察到轻度脾肿大（脾脏重量增加20%），可能由免疫激活引起。ALT、AST、BUN和肌酐水平无显著变化。在大鼠7天口服研究中（10、30、100 mg/kg），NOAEL为30 mg/kg。在 100 mg/kg 剂量下，观察到腹泻、轻度脱水和 ALT 升高（2.5 倍）。未观察到 hERG 抑制（IC50 > 30 μM）。未观察到 Ames 突变性。D-18 在有效剂量（10 mg/kg）下相对安全，但在较高剂量下可能引起细胞因子相关的不良反应。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
D-18 是一种在研的免疫肿瘤化合物，尚未获批。该化合物由中国公司深圳晶芯生物科技有限公司（Shenzhen Chipscreen Biosciences）在一项专利（WO2019242635A1）中公开。目前该化合物处于临床前阶段；截至2026年，尚未注册任何临床试验。D-18 的独特之处在于它将 TLR7/8 激动剂与 G9a 抑制剂相结合，从而上调 PD-L1 的表达，增强免疫检查点阻断作用。这种策略有望解决 PD-L1 低表达肿瘤对 PD-1/PD-L1 抑制剂的耐药性问题。D-18 可用于研究用途，常被用作研究先天免疫和适应性免疫之间相互作用的工具。进一步的优化有望开发出临床候选药物。该化合物不适用于人体。
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| 分子式 |
C21H28N6
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|---|---|
| 分子量 |
364.487223625183
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| 精确质量 |
364.237
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| CAS号 |
2230218-36-5
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| PubChem CID |
147429730
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
3.6
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| tPSA |
80
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
423
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(N)=NC(NCCCC)=C2N=C(CC3=CC=C(CN(C)C)C=C3)C=CC2=N1
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| InChi Key |
DUCCCPVHDPRCEB-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H28N6/c1-4-5-12-23-20-19-18(25-21(22)26-20)11-10-17(24-19)13-15-6-8-16(9-7-15)14-27(2)3/h6-11H,4-5,12-14H2,1-3H3,(H3,22,23,25,26)
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| 化学名 |
4-N-butyl-6-[[4-[(dimethylamino)methyl]phenyl]methyl]pyrido[3,2-d]pyrimidine-2,4-diamine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7436 mL | 13.7178 mL | 27.4356 mL | |
| 5 mM | 0.5487 mL | 2.7436 mL | 5.4871 mL | |
| 10 mM | 0.2744 mL | 1.3718 mL | 2.7436 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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