| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
FGFR; VHL E3 ligase
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
DGY-09-192是一种双价降解剂，将泛fgfr抑制剂BGJ398偶联到CRL2VHL E3连接酶招募配体上，优先诱导fgfr1和2降解，同时在很大程度上保留fgfr3和4。DGY-09-192对野生型FGFR2和几种FGFR2融合物均表现出两位数纳摩尔DC50 s，在代表性胃癌和胆管癌细胞中产生降解依赖性抗增殖活性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
重要的是，DGY-09-192在异种移植物模型中诱导了临床相关FGFR2融合蛋白的降解。
研究人员通过静脉注射（静脉，1mg /kg）、腹腔注射（IP, 3mg /kg）或口服（10mg /kg）给药，对小鼠进行了单剂量DGY-09-192的药代动力学（PK）研究。DGY-09-192表现出相当长的半衰期（5小时的T1/2），通过静脉注射和IP给药清除率低，但口服生物利用度可以忽略不计（表4）。然后我们选择使用CCLP1-FGFR2-PHGDH异种移植模型来评估体内降解。当肿瘤达到~200 mm3时，小鼠给予DGY-09-192(20或40 mg/kg， IP QD) 6d。对末次给药后4小时分离的肿瘤样本进行免疫印迹分析显示，FGFR2-PHGDH蛋白水平和下游标记FRS2和ERK1/2的磷酸化均呈剂量依赖性降低[1]。 |
| 酶活实验 |
基于tmt的定量LCMS蛋白质组学[1]
Kelly细胞用DMSO（生物三副本）或DGY-09-192在1µM浓度下处理5小时，4℃离心收获细胞。通过添加尿素缓冲液（8 M尿素，50 mM NaCl, 50 mM 4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸（EPPS） pH 8.5，蛋白酶和磷酸酶抑制剂）进行细胞裂解，然后通过21号（1.25英寸）的手动均质仪进行20次均质。长)针。裂解液经离心澄清，用bradford （Bio-Rad）法测定蛋白质含量。如前所述，每个样品中200µg的蛋白质被还原、烷基化并使用甲醇/氯仿沉淀。将所得的沉淀蛋白重悬于4 M尿素（50 mM HEPES pH 7.4）缓冲液中进行增溶，然后加入200 mM EPPS （pH 8）稀释至1 M尿素。蛋白质在室温下用LysC（1:50比例）消化12小时，然后稀释到0.5 M尿素，第二步通过添加胰蛋白酶（1:50比例）在37℃下消化6小时。在每个肽样品中加入无水ACN至终浓度为30%，然后加入串联质量标签（Tandem mass tag， TMT）试剂，标记比例为1:4肽：TMT标签。TMT标记在室温下进行1.5小时的孵育，然后加入羟胺至终浓度为0.3%进行淬火。每个样品使用调节体积组合，在高速真空中干燥，然后用C18 SPE脱盐。采用高pH反相高效液相色谱法，采用aeris peptide xb-c18色谱柱，流动相A为5%乙腈和10 mM NH4HCO3，液相色谱为LC-MS级H2O (pH均为8.0)，流动相B为90%乙腈和5 mM NH4HCO3。得到的96个馏分以不连续的方式重组为24个馏分，用C18固相萃取板脱盐，随后进行质谱分析。数据的收集使用了Orbitrap Eclipse Tribrid质谱仪和UltiMate 3000 rslnano系统。肽在EasySpray ES803a上分离。Rev2 75 μm内径微毛细管柱。在1.0%甲酸溶液中，以6 - 27%乙腈梯度190 min，流速300 nL/min分离多肽。如前所述，使用基于ms3的TMT方法进行量化（McAlister et al., 2014）。数据采集的质量范围为m/z 340 - 1350，分辨率为120,000，AGC靶5 × 105，最大进样时间为100 ms，在Orbitrap中动态排除120秒。在归一化碰撞能量（NCE）为35%，AGC目标为1.8 104，最大注入时间为120 ms的离子阱中，获得了与数据相关的MS2光谱。在Orbitrap中获得MS3扫描，HCD碰撞能量设置为55%，AGC目标设置为2 105，最大注入时间为150 ms，分辨率为50,000，最大同步前驱体选择（SPS）前驱体设置为10 |
| 细胞实验 |
抗增殖试验[1]
16个细胞以3000个细胞的密度在96孔板中被镀。24小时后，加入抑制剂药物，再培养3天。然后用MTT法测定细胞活力。每个剂量点与DMSO对照归一化以估计相对生存能力。采用GraphPad Prism 9.0.0软件进行非线性回归拟合，生成剂量-响应曲线。数据以mean±SEM表示（n = 3， n表示每种处理条件下使用的生物重复），如图图例所示。 细胞VHL接合试验[1] 将表达BRD4BD2-eGFP蛋白融合和mCherry报告基因的稳定细胞以1000-4000个细胞/孔的密度接种于384孔板中。BRD4BD2-GFP报告细胞在0.25uM AT1存在下，用增加浓度的来那度胺或指示化合物处理5小时。采用激光扫描细胞术检测BRD4BD2-GFP的相对丰度。绿色荧光信号(激发激光：488nm；滤光片：500-530 nm)和红光信号(激发激光：561 nm；过滤器：575-640 nm)已单独测试并导出用于分析。数据分析可以使用Cell Profiler进行，并且使用非线性拟合变斜率模型计算导致50%降解的浓度（DC50）的值。数据用三个重复的平均值±标准差表示（n = 3）。 |
| 动物实验 |
药代动力学研究 我们在斯克里普斯佛罗里达研究所的DMPK核心实验室（https://www.scripps.edu/science-and-medicine/cores-and-services/dmpk-core/index.html）进行了药代动力学研究。采用尾静脉注射、腹腔注射和灌胃三种给药途径，在雄性C57Bl/6小鼠中测试了药代动力学。每组小鼠重复三次，分别以1mg/kg的剂量进行静脉注射，3mg/kg的剂量进行腹腔注射，10mg/kg的剂量进行灌胃。药物配制浓度分别为0.1mg/mL（静脉注射）、0.3mg/mL（腹腔注射）和1mg/mL（灌胃），溶剂为5/95 (v/v) DMSO/10% (w/v) Captisol。分别于给药后5、15、30、60、120、240、360、480和1440分钟采集约20 µl血液样本。我们采用微量取样技术，将血液收集到毛细管血细胞比容管中，以减少从小鼠身上采集的总血量。这使得单只小鼠即可用于整个实验过程，并降低了个体间差异。此外，由于样本量小，小鼠的健康也得以维持。采用标准离心技术制备血浆，最终得到约10 µl血浆，并立即冷冻保存。使用配备多反应监测功能的ABSciex 5500质谱仪，通过质谱法测定药物浓度。药代动力学参数采用非房室模型（Phoenix WinNonlin，Pharsight公司）计算。所有程序均已获得斯克里普斯佛罗里达动物实验伦理委员会（IACUC）的批准，且斯克里普斯动物房已获得AAALAC认证。药效学研究：小鼠饲养于特定病原体清除（SPF）环境中。所有实验均按照麻省总医院（MGH）研究动物护理小组委员会批准的2019N000116号实验方案进行。实验采用6至8周龄雄性NSG小鼠（NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ，00557，杰克逊实验室）。将经FGFR2-PHGDH融合基因改造的CCLP-1细胞皮下注射到NSG小鼠体内（每只小鼠1×10⁶个细胞）。使用数字游标卡尺监测和测量肿瘤大小。当肿瘤体积达到约200 mm³时，将小鼠随机分组，分别腹腔注射赋形剂（5% DMSO，10% Solutol溶于5%葡萄糖溶液）、DGY09-192 20 mg/kg或DGY09-192 40 mg/kg，连续6天。在最后一次给药后 4 小时采集肿瘤样本，并进行信号传导研究。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
DGY-09-192 表现出相当长的半衰期（T1/2 为 5 小时），通过静脉注射和腹腔注射清除率低，但口服生物利用度可忽略不计。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
FGFR信号通路异常激活在多种癌症中均有发生，ATP竞争性FGFR抑制剂已获得监管机构批准。尽管这些抑制剂展现出临床疗效，但由于其对FGFR家族成员缺乏选择性，导致剂量限制性毒性，且耐受性较差。本文报道了DGY-09-192的发现和表征，DGY-09-192是一种二价降解剂，它将泛FGFR抑制剂BGJ398与CRL2VHL E3连接酶募集配体偶联，优先诱导FGFR1和2降解，而对FGFR3和4的影响较小。DGY-09-192对野生型FGFR2和多种FGFR2融合蛋白均表现出两位数纳摩尔级的DC50值，从而在代表性的胃癌和胆管癌细胞中表现出降解依赖性的抗增殖活性。重要的是，DGY-09-192 在异种移植模型中诱导了具有临床意义的 FGFR2 融合蛋白的降解。综上所述，我们证明 DGY-09-192 具有作为 FGFR 降解剂原型的潜力。[1]
突变型 FGFR 是多种癌症类型的有效靶点，但现有药物不仅缺乏对密切相关的 FGFR1、2 和 3 的选择性，而且也无法区分野生型和突变型 FGFR。因此，本研究旨在探讨：1）FGFR 及其融合变体是否是可降解的靶点；以及 2）降解剂是否能够对特定的 FGFR 亚型实现选择性。我们最初开发的基于酰亚胺的降解剂能够降解在小鼠 Ba/F3 细胞中表达的 TEL-FGFR2，但未能降解 KATO III 细胞中的全长 FGFR2 蛋白。通过引入VHL E3连接酶克服了这一局限性，最终发现了DGY-09-192，一种对野生型和融合突变型FGFR2蛋白均具有低纳摩尔级降解活性的化合物。此外，尽管DGY-09-192对所有四种FGFR亚型均保持了同等的生化抑制活性，但它对FGFR1和FGFR2表现出高度选择性的降解作用，并且降解全长FGFR2或FGFR2融合蛋白均能在多种FGFR2依赖性细胞中产生显著的降解依赖性抗增殖活性。此外，我们的先导化合物DGY-09-192具有一个短的双碳连接基，这可能有利于提高细胞渗透性和生物利用度。我们证实DGY-09-192具有良好的药代动力学特征，并能在体内诱导FGFR2融合蛋白的降解。然而，作为一种原型分子，DGY-09-192 仍存在一些需要克服的局限性。例如，DGY-09-192 在抗增殖活性方面并不优于 FGFR 亲本抑制剂 BGJ398，并且不太可能克服 BGJ398 诱导的 FGFR 蛋白上的耐药点突变（表 S3）。此外，DGY-09-192 仍然能有效抑制所有 FGFR 亚型，因此其抗增殖活性不能仅仅归因于降解作用。需要进一步优化以降低其与 FGFR 的结合、提高口服生物利用度、增强对特定 FGFR 的选择性、减少与 PDE6D 的非靶向结合，并提高其对耐药突变体的效力。此外，我们设想，通过进一步优化，还可以开发出对致癌突变体或融合体相对于野生型 FGFR 具有选择性的降解剂，从而提高治疗指数。[1] |
| 分子式 |
C49H59CL2N11O7S
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|---|---|
| 分子量 |
1017.0332672596
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| 精确质量 |
1015.369
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| CAS号 |
2504949-52-2
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| PubChem CID |
164889465
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
6.8
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| tPSA |
235
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
14
|
| 可旋转键数目(RBC) |
16
|
| 重原子数目 |
70
|
| 分子复杂度/Complexity |
1720
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
CC1=C(SC=N1)C2=CC=C(C=C2)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](CN3C(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)CN4CCN(CC4)C5=CC=C(C=C5)NC6=CC(=NC=N6)N(C)C(=O)NC7=C(C(=CC(=C7Cl)OC)OC)Cl)O
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| InChi Key |
WDBUEMWHXKHQNB-AURZXHAXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C49H59Cl2N11O7S/c1-28(30-9-11-31(12-10-30)44-29(2)54-27-70-44)55-46(65)35-21-34(63)24-62(35)47(66)45(49(3,4)5)57-40(64)25-60-17-19-61(20-18-60)33-15-13-32(14-16-33)56-38-23-39(53-26-52-38)59(6)48(67)58-43-41(50)36(68-7)22-37(69-8)42(43)51/h9-16,22-23,26-28,34-35,45,63H,17-21,24-25H2,1-8H3,(H,55,65)(H,57,64)(H,58,67)(H,52,53,56)/t28-,34+,35-,45+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[4-[[6-[(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)carbamoyl-methylamino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]piperazin-1-yl]acetyl]amino]-3,3-dimethylbutanoyl]-4-hydroxy-N-[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]pyrrolidine-2-carboxamide
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| 别名 |
DGY-09-192; 2504949-52-2; (2S,4R)-1-((S)-2-(2-(4-(4-((6-(3-(2,6-Dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-methylureido)pyrimidin-4-yl)amino)phenyl)piperazin-1-yl)acetamido)-3,3-dimethylbutanoyl)-4-hydroxy-N-((S)-1-(4-(4-methylthiazol-5-yl)phenyl)ethyl)pyrrolidine-2-carboxamide; GLXC-26164; EX-A6660; (2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-[4-[4-[[6-[(2,6-dichloro-3,5-dimethoxyphenyl)carbamoyl-methylamino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]piperazin-1-yl]acetyl]amino]-3,3-dimethylbutanoyl]-4-hydroxy-N-[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]pyrrolidine-2-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9833 mL | 4.9163 mL | 9.8326 mL | |
| 5 mM | 0.1967 mL | 0.9833 mL | 1.9665 mL | |
| 10 mM | 0.0983 mL | 0.4916 mL | 0.9833 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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