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DiFMUP

别名: DiFMUP; 214491-43-7; 6,8-difluoro-4-methyl-umbelliferyl phosphate; 6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate; (6,8-difluoro-4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate; 6,8-difluoro-MUP; SCHEMBL329996; BDBM13432; 6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯
目录号: V10336 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
DiFMUP 是一种荧光底物，已广泛用于连续检测磷酸酶活性。
DiFMUP CAS号: 214491-43-7
产品类别: New1
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
DiFMUP是一种荧光底物，已被广泛用于磷酸酶活性的连续检测。荧光底物6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯（DIFMUP）已被广泛用于检测丝氨酸和苏氨酸磷酸酶的活性。它也可用于表征蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）以及筛选PTP抑制剂。DIFMUP裂解的动力学常数和抑制剂常数与广泛使用但选择性和实用性较低的底物——对硝基苯磷酸酯和含磷酸酪氨酸的肽——的相应参数相当。此外，这种连续且高灵敏度的检测方法能够快速准确地研究小分子抑制剂的类型、动力学行为和结合模式。
DiFMUP（CAS# 214491-43-7），又称6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯，是一种高灵敏度的磷酸酶荧光底物。其分子式为C₁₀H₇F₂O₆P，分子量为292.13 g/mol。DiFMUP用于酶活性测定，以测量碱性磷酸酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和酸性磷酸酶等磷酸酶的活性。经酶促裂解磷酸基团后，生成一种荧光产物（6,8-二氟-7-羟基-4-甲基香豆素），该产物发生蓝移，且量子产率高于标准伞形酮类化合物。
生物活性&实验参考方法
靶点
fluorogenic substrate; phosphatase
The target of DiFMUP is not a biological receptor but rather the active site of phosphatase enzymes. It serves as a substrate that is dephosphorylated by these enzymes, releasing the highly fluorescent product. Its affinity for phosphatases is determined by the enzyme's catalytic efficiency. The compound is a research tool used to monitor phosphatase activity in high-throughput screening and kinetic studies.
体外研究 (In Vitro)
蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B) 以时间依赖性方式水解DIFMUP (100 μM；0–4 min)，初始反应速率随酶浓度增加而升高 (30–600 ng/mL) [2]。
在体外，DiFMUP可用于多种测定磷酸酶活性的方法。其荧光特性使其能够实时连续监测酶动力学。激发和发射最大值分别约为358 nm和450 nm。该化合物在生理pH条件下稳定，并与多种生物缓冲液兼容。其高灵敏度使其能够检测低浓度酶，适用于筛选抑制剂。
体内研究 (In Vivo)
DiFMUP在体内不适用于治疗。它仅用于体外酶活性测定。然而，它可用于细胞释放或检测磷酸酶的细胞实验，例如细胞裂解实验或原位磷酸酶活性检测。DiFMUP不可用于活体动物。
酶活实验
为了确定合适的酶浓度，将PTP预先用反应缓冲液稀释至指定浓度，最终体积为90 μl。加入10 μl含有1 mM DIFMUP的反应体系启动反应，然后在37 °C下孵育10分钟，同时监测水解情况。[2]
体外酶活性测定中，使用DiFMUP将底物与目标磷酸酶在合适的缓冲液中孵育。通过在358 nm激发下测量450 nm处的荧光强度增加来监测反应。荧光强度增加的初始速率与酶活性成正比。在抑制研究中，化合物以固定浓度（例如10-100 µM）使用，并将抑制剂加入反应混合物中。
细胞实验
使用 DiFMUP 的体外细胞检测通常包括用裂解缓冲液处理细胞，以释放细胞内磷酸酶。然后将裂解液与 DiFMUP 孵育，并通过测量荧光强度来量化磷酸酶活性。或者，如果细胞膜通透化，也可以将活细胞与底物孵育。该检测方法兼容 96 孔板，并用于药物筛选。
动物实验
由于 DiFMUP 是一种生化试剂，因此不适用于体内动物实验。然而，若用于离体组织匀浆，则可将该化合物与组织提取物孵育，以测定总磷酸酶活性。具体操作步骤包括：在适当的缓冲液中匀浆组织，离心，然后取上清液进行荧光测定。所有操作均需遵循标准实验室操作规程。
药代性质 (ADME/PK)
DiFMUP并非药物，因此其药代动力学性质无关紧要。它是一种小分子，分子量为292.13 g/mol，可溶于水和DMSO。在-20°C避光保存时稳定。用于研究时，通常将其溶解于DMSO中配制成储备液，然后用水性缓冲液稀释。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
由于DiFMUP仅用于体外实验，其毒性特征尚未得到充分阐明。作为一种无毒探针，它通常被认为在实验室操作中是安全的。然而，仍应遵循化学品操作的标准安全预防措施，包括佩戴手套和护目镜。DiFMUP不可用于人类食用。
参考文献

[1]. Fluorogenic substrates based on fluorinated umbelliferones for continuous assays of phosphatases and beta-galactosidases. Anal Biochem. 1999 Aug 15;273(1):41-8.

[2]. 6,8-Difluoro-4-methylumbiliferyl phosphate: a fluorogenic substrate for protein tyrosine phosphatases. Anal Biochem. 2005 Mar 1;338(1):32-8.
其他信息
6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯是一种香豆素类化合物，其功能与香豆素类似。它是6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯(2-)的共轭酸。基于4-甲基伞形酮(4-MU)的荧光底物已被广泛用于检测磷酸酶和糖苷酶的活性。然而，这些底物的缺点在于，由于4-MU的pKa值约为8，反应产物的最大荧光强度需要碱性pH条件。在初步筛选了五种基于4-MU氟化衍生物（所有pKa值均低于4-MU）的磷酸酶底物后，我们发现其中一种底物，6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯(DiFMUP)，显著提高了酸性磷酸酶活性的检测灵敏度。在酸性磷酸酶反应的最佳pH值（5.0）下，DiFMUP产生的荧光信号比4-甲基伞形酮磷酸酯（MUP）高10倍以上。在pH 7时，DiFMUP在检测蛋白磷酸酶1活性方面优于MUP；而在pH 10时，DiFMUP检测碱性磷酸酶活性的灵敏度与MUP相当。此外，还制备了一种基于6,8-二氟-4-甲基伞形酮的β-半乳糖苷酶底物。在pH 7条件下检测β-半乳糖苷酶活性时，底物6,8-二氟-4-甲基伞形酮β-D-半乳糖苷（DiFMUG）的灵敏度显著高于常用的底物4-甲基伞形酮β-D-半乳糖苷（MUG）。DiFMUP和DiFMUG分别在中性和酸性pH条件下连续测定磷酸酶和β-半乳糖苷酶活性方面具有广阔的应用前景。[1]
荧光底物6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯（DIFMUP）已被广泛用于检测丝氨酸和苏氨酸磷酸酶的活性。本文将介绍该底物在蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）表征和PTP抑制剂筛选中的应用。 DIFMUP裂解的动力学常数和抑制常数与广泛使用但选择性和实用性较低的底物——对硝基苯磷酸酯和含磷酸酪氨酸的肽——相当。此外，这种连续且高灵敏度的检测方法能够快速准确地研究小分子抑制剂的类型、动力学行为和结合模式。我们讨论了该检测系统对各种PTP的验证及其在PTP1B抑制剂筛选中的应用。[2]
补充信息：DiFMUP也称为6,8-二氟-4-甲基伞形酮磷酸酯二钠盐。由于其性能优于传统的4-甲基伞形酮磷酸酯（MUP），因此是荧光磷酸酶测定的常用选择。该产品仅供研究使用，未获准用于诊断或治疗用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C10H7O6F2P
分子量
292.12958
精确质量
291.995
元素分析
C, 41.12; H, 2.42; F, 13.01; O, 32.86; P, 10.60
CAS号
214491-43-7
PubChem CID
2786976
外观&性状
White to off-white solid
LogP
1.851
tPSA
106.78
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
19
分子复杂度/Complexity
461
定义原子立体中心数目
0
SMILES
FC1=CC2C(C)=CC(=O)OC=2C(F)=C1OP(O)(O)=O
InChi Key
DZANYXOTJVLAEE-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C10H7F2O6P/c1-4-2-7(13)17-9-5(4)3-6(11)10(8(9)12)18-19(14,15)16/h2-3H,1H3,(H2,14,15,16)
化学名
(6,8-Difluoro-4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate
别名
DiFMUP; 214491-43-7; 6,8-difluoro-4-methyl-umbelliferyl phosphate; 6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate; (6,8-difluoro-4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate; 6,8-difluoro-MUP; SCHEMBL329996; BDBM13432;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~171.16 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.4231 mL 17.1157 mL 34.2313 mL
5 mM 0.6846 mL 3.4231 mL 6.8463 mL
10 mM 0.3423 mL 1.7116 mL 3.4231 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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电话: 020-31522723 传真: 463611831 邮箱: sales@invivochem.cn
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