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Dihydrocyclosporin A

别名: Dihydrocyclosporin A; Dihydrocyclosporin-A; Dihydrocyclosporin A; 59865-15-5; Dihydro Cyclosporin A; (3S,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,30S,33S)-30-Ethyl-33-[(1R,2R)-1-hydroxy-2-methylhexyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-undecone; Dihydrocyclosporine A; 3eov; Dihydrociclosporin A; 6-[(2S,3R,4R)-3-Hydroxy-4-methyl-2-(methylamino)octanoic acid]cyclosporin A; 6-[(3R,4R)-3-Hydroxy-N,4-dimethyl-L-2-aminooctanoic acid]cyclosporin A; 1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-Undecaazacyclotritriacontane, cyclic peptide deriv.; Cyclosporin A, dihydro-; Dihydrocyclosporin A; 2x2c; Dihydrocyclosporin A. 双氢环孢菌素A;二氢环孢菌素 A;双氢环孢菌素A,Dihydrocyclosporin A,植物提取物,标准品,对照品;二氢环孢素 A
目录号: V19902 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
二氢环孢菌素 A 是环孢菌素 A 的密切相关代谢物，不具有免疫抑制活性，可用作确定免疫抑制在环孢菌素 A 药理学中的作用的对照，特别是在治疗寄生虫感染中。
Dihydrocyclosporin A CAS号: 59865-15-5
产品类别: New1
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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10mg
25mg
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产品说明书
产品描述
二氢环孢素A是环孢素A的密切相关代谢产物，不具有免疫抑制活性，已被用作对照，以确定免疫抑制在环孢素A药理学中的作用，尤其是在治疗寄生虫感染方面。
二氢环孢素A（CAS 59865-15-5）是环孢素A的密切相关共代谢产物，是环孢素A的衍生物。它不具有免疫抑制活性，已被用作对照，以确定免疫抑制在环孢素A药理学中的作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
Antileishmanial
Dihydrocyclosporin A does not have immunosuppressant activity, unlike cyclosporin A. It significantly inhibits promastigotes and intracellular amastigotes. It is highly cytotoxic. It serves as a model compound for studying peptide synthesis and modification.
体外研究 (In Vitro)
结果表明，二氢环孢素A (DHCsA-d) 能够抑制体外利什曼原虫前鞭毛体（24 h 和 48 h 的 IC50 值分别为 21.24 μM 和 12.14 μM）和胞内无鞭毛体（24 h 和 48 h 的 IC50 值分别为 5.23 μM 和 4.84 μM）的增殖，而环孢素A (CsA) 处理则会增加宿主细胞内无鞭毛体的数量。DHCsA-d 和 CsA 均引起利什曼原虫形态和超微结构的多种改变，尤其是线粒体。然而，DHCsA-d 对小鼠巨噬细胞系 RAW264.7 表现出较高的细胞毒性，其 CC50 值分别为 7.98 μM (24 h) 和 6.65 μM (48 h)。此外，DHCsA-d 可增加感染巨噬细胞中 IL-12、TNF-α 和 IFN-γ 的产生，并降低 IL-10、IL-4、NO 和 H2O2 的水平。相反，CsA 则降低感染巨噬细胞中 IL-12、TNF-α 和 IFN-γ 的产生，并增加 IL-10、IL-4、NO 和 H2O2 的水平。与未处理组相比，CsA 处理组中利什曼原虫前鞭毛体和胞内无鞭毛体中亲环蛋白 A (LdCyPA) 的表达以及 RAW 264.7 细胞中亲环蛋白 A (CyPA) 的表达均显著下调。然而，DHCsA-d 或 SSG 处理后，LdCyPA 和 CyPA 的水平未见显著变化。结论：研究结果初步解决了关于环孢素A (CsA) 和二氢环孢素A-d (DHCsA-d) 治疗内脏利什曼病疗效的争议。CsA 对细胞内无鞭毛体没有显著的抑制作用。DHCsA-d 能显著抑制前鞭毛体和细胞内无鞭毛体，但具有很高的细胞毒性。因此，不推荐使用 CsA 和 DHCsA-d 作为抗利什曼病药物。[1]
体外实验表明，二氢环孢素A 能显著抑制前鞭毛体和细胞内无鞭毛体，且具有很高的细胞毒性。它常被用作对照，以确定环孢素A在药理学中的作用，尤其是在寄生虫感染方面的作用。它能抑制杜氏利什曼原虫前鞭毛体（已报道 IC50 值）。
体内研究 (In Vivo)
在体内，二氢环孢素A被用作环孢素A药理学研究中的对照化合物。它没有免疫抑制活性，这使得研究人员能够将环孢素A的免疫抑制作用与其他药理作用区分开来。
酶活实验
体外抑制试验[1]
将处于对数生长期的原鞭毛体以1.0 × 10⁶ 个细胞/ml 的细胞密度培养，并加入不同浓度的 CsA、DHCsA-d 或 SSG（均由浓缩储备液配制而成）：CsA 浓度分别为 5、10、15、20 和 25 μM [11]；DHCsA-d 浓度分别为 5、10、15、20 和 25 μM；SSG 浓度分别为 5、10、25、50 和 90 μM。使用 FITC Annexin V 凋亡检测试剂盒 I，按照制造商的说明，在 24 小时和 48 小时后，通过流式细胞术评估寄生虫抑制率。抑制率（%）按以下方式计算：抑制率（%）= 100% − [（处理样本中活寄生虫的数量/未处理对照中活寄生虫的数量）× 100%]。为了评估 CsA、DHCsA-d 或 SSG 对细胞内无鞭毛体的抑制作用，我们用对数期前鞭毛体感染小鼠巨噬细胞稳定细胞系 (RAW 264.7) 的巨噬细胞。将 RAW 264.7 细胞（5.0 × 10⁵ 个细胞/孔）接种于 24 孔板中的圆形玻璃盖玻片上，并在添加 10% FBS 的 PRMI 1640 培养基中，于 37 °C、5% CO₂ 条件下培养 24 小时，使其贴壁。然后，以 1:20 的巨噬细胞与寄生虫比例，在 37 °C、5% CO₂ 条件下用杜氏利什曼原虫前鞭毛体感染贴壁的巨噬细胞 6 小时。之后，用 PBS 洗涤三次以去除未感染的寄生虫，并将感染的巨噬细胞在 37 °C、5% CO₂ 条件下继续培养。将盖玻片置于含 5% CO2、PRMI 1640 培养基和 10% FBS 的培养箱中，在不添加药物的条件下培养 24 小时。之后移除培养基，加入不同浓度的 CsA（3、6、10、15、20 μM）、DHCsA-d（3、6、10、15、20 μM）或 SSG（5、10、25、50、90 μM）（溶于新鲜培养基中），继续培养 2 天。分别在 24 小时和 48 小时后，用甲醇固定盖玻片，并用 Wright 染色。使用光学显微镜计数每张玻片上至少 200 个细胞，以确定寄生虫的数量。结果以三次独立实验的平均值表示。通过非线性曲线分析拟合数值，计算前鞭毛体和胞内无鞭毛体的 50% 抑制浓度 (IC50)。电子显微镜[1]
用环孢素A (CsA)、二氢环孢素A-d (DHCsA-d) 或SSG处理的对照前鞭毛体和RAW 264.7细胞系巨噬细胞内的无鞭毛体，用2.5%戊二醛（溶于0.1 M二甲胂酸钠缓冲液，pH 7.2）固定，再用含1%四氧化锇、1.25%亚铁氰化钾和0.1 M二甲胂酸钠缓冲液（pH 7.2）的溶液进行后固定。然后，将细胞用丙酮脱水，并包埋于环氧树脂中。用柠檬酸铅染色后，在日立HT7700透射电子显微镜下观察。
二氢环孢素A的体外试验通常包括测定其对前鞭毛体和细胞内无鞭毛体的抗寄生虫活性。寄生虫的存活率采用比色法或荧光法进行评估。IC50值根据剂量反应曲线计算。在哺乳动物细胞系中评估细胞毒性。
细胞实验
本研究评估了环孢素A (CsA) 及其衍生物二氢环孢素A (DHCsA-d) 对杜氏利什曼原虫前鞭毛体和胞内无鞭毛体的疗效。葡萄糖酸锑钠 (SSG) 用作阳性对照。[1]
细胞毒性评估：采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 评估CsA、DHCsA-d 或 SSG 对小鼠巨噬细胞 (RAW 264.7) 的细胞毒性。将小鼠巨噬细胞接种于含10%胎牛血清 (FBS) 的PRIM 1640培养基中，置于96孔板中，在37℃、5% CO2条件下培养24小时。接下来，加入不同浓度的药物（CsA 和 DHCsA-d 的浓度分别为 7、10、20、50 和 100 μM；SSG 的浓度分别为 60、75、90、105 和 120 μM）。按照标准方案，在 24 小时和 48 小时后测定细胞毒性。[1]
二氢环孢素 A 的细胞毒性测定方法包括用该化合物处理感染利什曼原虫的巨噬细胞，并测量细胞内无鞭毛体的存活率。寄生虫载量通过显微镜或报告基因活性进行定量。同时评估该化合物的细胞毒性。
动物实验
二氢环孢素A的体内动物研究通常在寄生虫感染模型中进行。该化合物用作对照，以区分环孢素A的免疫抑制作用和抗寄生虫作用。疗效评估通过测量寄生虫载量和存活率来实现。
药代性质 (ADME/PK)
二氢环孢素A的药代动力学性质与环孢素A相似。该化合物的分子量为1201.64 g/mol，分子式为C62H113N11O12，是一种环状肽。其吸收、分布、代谢和排泄均具有环孢素类似物的特征。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
二氢环孢素A具有高度细胞毒性，在实验室操作时应格外小心。处理该化合物时应采取适当的安全预防措施。其毒性与其环孢素样结构有关。
参考文献
[1]. Evaluation of in vitro antileishmanial efficacy of cyclosporin A and its non-immunosuppressive derivative, dihydrocyclosporin A. Parasit Vectors. 2020 Feb 21;13(1):94.
[2]. Isolation of (4R)-4-[(E)-2-butenyl]-4-methyl-L-threonine, the characteristic structural element of cyclosporins, from a blocked mutant of Tolypocladium inflatum. J Antibiot (Tokyo). 1990 Jun;43(6):707-14.
其他信息
另见：二氢环孢素A（注：已移至此处）。
二氢环孢素A是环孢素A的密切相关共代谢物，用作研究工具和对照化合物。它不具有免疫抑制活性。它用于确定免疫抑制在环孢素A药理学中的作用，尤其是在治疗寄生虫感染方面。它未获准用于治疗用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C62H113N11O12
分子量
1204.651
精确质量
1203.857
元素分析
C, 61.82; H, 9.46; N, 12.79; O, 15.94
CAS号
59865-15-5
相关CAS号
59865-15-5;
PubChem CID
25023708
外观&性状
Typically exists as solid at room temperature
密度
1.0±0.1 g/cm3
沸点
1285.3±65.0 °C at 760 mmHg
熔点
120-125ºC
闪点
731.1±34.3 °C
蒸汽压
0.0±0.6 mmHg at 25°C
折射率
1.465
LogP
3.67
tPSA
278.8
氢键供体(HBD)数目
5
氢键受体(HBA)数目
12
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
85
分子复杂度/Complexity
2280
定义原子立体中心数目
12
SMILES
O[C@H]([C@H](C)CCCC)[C@H]1C(N[C@H](C(N(C)CC(N(C)[C@H](C(N[C@H](C(N(C)[C@H](C(N[C@@H](C)C(N[C@H](C)C(N(C)[C@@H](CC(C)C)C(N(C)[C@H](C(N(C)[C@H](C(N1C)=O)C(C)C)=O)CC(C)C)=O)=O)=O)=O)CC(C)C)=O)C(C)C)=O)CC(C)C)=O)=O)CC)=O
InChi Key
TYFOVYYNQGNDKH-HHPJSCBPSA-N
InChi Code
InChI=1S/C62H113N11O12/c1-25-27-28-40(15)52(75)51-56(79)65-43(26-2)58(81)67(18)33-48(74)68(19)44(29-34(3)4)55(78)66-49(38(11)12)61(84)69(20)45(30-35(5)6)54(77)63-41(16)53(76)64-42(17)57(80)70(21)46(31-36(7)8)59(82)71(22)47(32-37(9)10)60(83)72(23)50(39(13)14)62(85)73(51)24/h34-47,49-52,75H,25-33H2,1-24H3,(H,63,77)(H,64,76)(H,65,79)(H,66,78)/t40-,41+,42-,43+,44+,45+,46+,47+,49+,50+,51+,52-/m1/s1
化学名
(3S,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,30S,33S)-30-Ethyl-33-[(1R,2R)-1-hydroxy-2-methylhexyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-undecone
别名
Dihydrocyclosporin A; Dihydrocyclosporin-A; Dihydrocyclosporin A; 59865-15-5; Dihydro Cyclosporin A; (3S,6S,9S,12R,15S,18S,21S,24S,30S,33S)-30-Ethyl-33-[(1R,2R)-1-hydroxy-2-methylhexyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-undecone; Dihydrocyclosporine A; 3eov; Dihydrociclosporin A; 6-[(2S,3R,4R)-3-Hydroxy-4-methyl-2-(methylamino)octanoic acid]cyclosporin A; 6-[(3R,4R)-3-Hydroxy-N,4-dimethyl-L-2-aminooctanoic acid]cyclosporin A; 1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-Undecaazacyclotritriacontane, cyclic peptide deriv.; Cyclosporin A, dihydro-; Dihydrocyclosporin A; 2x2c; Dihydrocyclosporin A.
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.8301 mL 4.1506 mL 8.3012 mL
5 mM 0.1660 mL 0.8301 mL 1.6602 mL
10 mM 0.0830 mL 0.4151 mL 0.8301 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
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计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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