Dotinurad (FYU-981)   中文名称: 多替诺德; 多替诺雷

URAT1/Urate transporter 1 (IC50 = 3.6 µM)

Dotinurad是一种新型的选择性尿酸盐重吸收抑制剂（SURI），在低剂量下对尿酸盐转运蛋白1 （URAT1，溶质载体家族22成员12 [SLC22A12]）对尿酸盐的摄取有明显的抑制作用，URAT1定位于肾近端小管细胞的顶膜。[2]
Dotinurad抑制近端小管中的有机离子转运体，尤其是URAT1，但也可能与OATs相互作用。［1］

本研究旨在阐明Dotinurad (FYU-981)的药代动力学（PK）谱。在大鼠、猴子和人类中，Dotinurad (FYU-981)的表观分布体积（分别为0.257、0.205和0.182 L/kg）和口服清除率（分别为0.054、0.037和0.013 L·h-1·kg-1）非常低，而血浆和腹腔浓度则维持在较高水平。此外，血浆蛋白结合率为99.4%，几乎没有物种差异。其主要代谢物为Dotinurad (FYU-981)葡萄糖醛酸（在人体内无特异性代谢物），未改变多丁醛酸的排泄百分比在所有被调查物种中都很低。Dotinurad (FYU-981)对细胞色素P450 （CYP）等代谢酶的抑制作用较弱，因此与该药相互作用的风险较低。综上所述，低剂量Dotinurad (FYU-981)具有良好的药理作用和理想的PK特性，其SURI为[2]。

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在大鼠和猴子中，dotinurad和TRA给药后达到Cmax （Tmax）的时间相对较快（<1.83 h），而在人体内，由于14C-FYU-981是溶液给药，而dotinurad是片剂给药，因此，TRA的Tmax和Cmax分别比 dotinurad (FYU-981)更快和更高。大鼠、猴子和人对Dotinurad (FYU-981)的口服清除率（CL/F分别为0.054、0.037和0.013 L·h−1·kg−1）和表观Vd （Vd/F分别为0.257、0.205和0.182 L/kg）均极低。[2]

14C-Dotinurad (FYU-981)血浆蛋白结合与血细胞分布比值[2]
在研究当天采集大鼠、猴和人的血浆和血液样本（n = 3）。将14C-Dotinurad (FYU-981)溶液（终浓度：1 μg/mL）分别加入血浆和血样中制备试验样品。为了测定血浆和血液中的放射性浓度，将每个测试样品的一份样品溶解在组织增溶剂SOLUENE-350中（只有血液测试样品用饱和过氧化苯甲酰的苯进行脱色），并与闪烁体HIONIC-FLUOR混合。剩余样品在37°C水浴中孵育5 min。等额血浆样品注入超离心装置，离心（1800×g, 37°C, 10 min）回收滤液。滤液用闪烁器混合。用液体闪烁计数器测量了处理后的等离子体试样和滤液的放射性。根据血浆和滤液中的放射性浓度计算血浆蛋白结合率。相反，血液测试样本是在毛细管中收集，以确定红细胞压积值（Ht）。剩余血样离心（8000×g, 4°C, 5 min）分离血浆。血浆的等分物溶解在组织增溶剂中，并用闪烁体混合。用LSC法测定了处理后的血液样品和分离后的血浆的放射性。根据全血和血浆中的Ht和放射性浓度计算出血细胞的放射性分布。

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CYP抑制研究[2]
根据人与动物桥接研究组织（Human and Animal Bridging Research Organization， HAB）的方案，对多替努德的CYP抑制作用进行了评价。本研究评估的Dotinurad (FYU-981)抑制浓度分别为1、2.5、5、10、25、50和100 μM。修改了HAB方案中CYPs代谢物的分析方法和抑菌效果的计算方法。CYP1A2、CYP2B6、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的色谱柱为CAPCELL PAK C18 UG 120 (4.6 × 250 mm, 5 μm)， CYP2C9的色谱柱为Mightysil RP-18GP （4.6 × 250 mm, 5 μm）。每个IC50由活性比（%）计算，即存在Dotinurad (FYU-981)时的活性除以不存在dotinurad时的活性。

14C-Dotinurad (FYU-981)在低温保存肝细胞中的体外代谢比较研究[2]
来自Sekisui XenoTech的雄性大鼠和猴子冷冻保存肝细胞和混合性别人冷冻保存肝细胞。采用Sekisui XenoTech公司生产的肝细胞分离试剂盒（K2000）制备肝细胞悬液。每个物种的肝细胞悬液（终浓度：1 × 106个细胞/mL）或Krebs-Henseleit Buffer (118 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, 1.2 mM KH2PO4, 1.2 mM MgSO4, 25 mM NaHCO3, 6.3 mM HEPES和11 mM d-glucose， pH 7.4)；对照组)加入24孔板，在CO2培养箱（37℃，5% CO2, 95%空气）中预孵育10 min。反应开始时，加入14C-Dotinurad (FYU-981)溶液（终浓度：10 μM），在CO2培养箱中孵育0和1 h。孵育后，在孵育混合物中加入与混合物体积相同的乙腈终止反应。终止后，搅拌并离心（1800×g, 4°C, 5 min）分离上清。收集的上清液用蒸发器蒸发至干燥。干燥后，将残渣超声溶解于n -甲基-2-吡咯烷二酮/初始流动相（1:1,v/v）中。将溶液离心（15000×g, 4°C, 5 min），得到的上清液注射到HPLC-放射性检测（RAD）中，装置由岛津10A高效液相色谱系统和625 TR流动闪烁分析仪组成。HPLC分析条件称为“样品分析”。

动物实验分别在SMD（所有放射性同位素和猴子实验）或FY（大鼠实验）进行。6周龄雄性Sprague-Dawley (SD, Crj:CD[SD]IGS)大鼠购自Charles River Laboratories。经过1周的适应期后，动物在7周龄时用于实验。3岁雄性食蟹猴购自Hamri Co., Ltd.。Dotinurad (FYU-981)（包括¹⁴C-FYU-981）悬浮于0.5%甲基纤维素溶液中，以1 mg/kg的剂量口服(po)给饥饿的大鼠或猴子。[2]

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Dotinurad (FYU-981)在大鼠、猴子和人血浆中的浓度采用FY实验室经验证的方法进行分析。大鼠和猴血浆样品经含内标物（F12994）的甲醇脱蛋白后，分别采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）和超高效液相色谱法（UPLC）进行分析。大鼠血浆中多替努拉的标准曲线范围为1～300 ng/mL，猴血浆中为30～3000 ng/mL。人血浆样品采用固相萃取法在96孔板中进行处理，并采用LC-MS/MS进行分析。人血浆中多替努拉的标准曲线范围为1～1000 ng/mL。人血浆中的多替努拉和基质成分在50℃下，使用Inertsil ODS-3色谱柱（2.1 × 150 mm，3 μm）进行分离，流动相为5 mmol/L乙酸铵水溶液（pH 4）和甲醇溶液（50:50，v/v）。总流速设定为0.18 mL/min。采用涡轮离子喷雾和负离子模式进行电离。在多反应监测模式下分析多替努拉[MH]-离子（跃迁：多替努拉356.0/159.9和内标F12994 341.1/145.1）。[2]

血浆蛋白结合率和血细胞分布[2]
表1显示，多替努拉德在所有研究物种中的血浆蛋白结合率和血细胞分布相似，这些参数在不同物种间无差异。

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代谢[2]
表3列出了14C-FYU-981在冷冻保存的肝细胞中进行体外比较代谢研究的结果。14C-FYU-981的葡萄糖醛酸苷（7.3%、3.8%和3.5%）和硫酸盐（3.8%、3.6%和1.8%）代谢物在大鼠、猴和人肝细胞中的生成率均较高。人肝细胞中14C-FYU-981的水平略高于大鼠肝细胞，表明14C-FYU-981在人肝细胞中的清除率低于在大鼠肝细胞中的清除率。表4列出了向大鼠、猴子和人注射¹⁴C-FYU-981后采集的样本中检测到的代谢物百分比。
在大鼠、猴子和人血浆中，母体化合物被检测为主要成分，分别占放射性的81.9%、92.0%和80.9%。在所有受试物种的血浆样本中，甲基DCHB、硫酸盐和6-羟基代谢物的水平都相当高。在大鼠和人样本中，甲基DCHB代谢物的水平最高（分别为2.8%和5.1%），而硫酸盐代谢物的水平在猴子中最高（1.5%）。在大鼠尿液中，¹⁴C-FYU-981的百分比为2.2%，DCHB的硫酸盐被检测为主要代谢物，占21.9%，其次是DCHB（12.2%）和硫酸盐（11.7%）。在猴和人尿液中，¹⁴C-FYU-981 的检出率分别为 5.0% 和 1.3%，其中葡萄糖醛酸苷是主要代谢物（分别为 37.0% 和 51.8%），其次是硫酸盐（分别为 26.7% 和 23.4%）。在粪便中，6-羟基、二氯苯并噻吩 (DCHB) 和磺酸盐代谢物以及母体化合物的含量高于其他代谢物。从大鼠、猴和人粪便样本中回收放射性的回收率分别为 79.9%、78.8% 和 67.5%，这些数值略低。然而，未能回收的放射性量占剂量的百分比低于 4.6%。猴的代谢物谱与人的代谢物谱比与大鼠的代谢物谱更相似。

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排泄[2]
图3显示了放射性物质经尿液、粪便和呼出气体的平均累积排泄量以及总回收率。在大鼠、猴子和人类中，尿液放射性水平分别为剂量的68.7%、83.7%和86.4%，而粪便中相应的放射性水平分别为剂量的22.7%、6.7%和7.9%（两种样本在168小时内均如此）。
在大鼠、猴子和人类样本中，呼出气体中放射性物质的排泄百分比分别为剂量的4.2%、7.8%和5.0%（持续96小时），总回收放射性分别为95.5%、98.2%和99.4%，均令人满意。主要排泄途径为尿液，经代谢物分析，放射性物质在大鼠体内主要以DCHB硫酸盐形式排泄，在猴和人体内则主要以葡萄糖醛酸苷形式排泄。

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CYP抑制研究[2]
表5显示了多替努拉对人肝微粒体中主要CYP同工酶（CYP1A2、2A6、2B6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4）抑制作用的评价结果。多替努拉对CYP2C9的抑制常数（Ki）为10.4 μmol/L。根据药物相互作用（DDI）指南[13]，连续7天给予4 mg多替努拉（7.0 nmol/L：未发表数据）后，根据Ki值和游离Cmax计算的R值为1.00。因此，预测通过 CYP 抑制发生药物相互作用的风险较低。

[1]. Eur J Med Chem. 2019 Mar 15;166:186-196.;
[2]. Drug Metab Pharmacokinet. 2020 Jun;35(3):313-320.

多替努拉正在进行临床试验NCT03372200（一项以非布司他为对照的双盲、比较研究，比较FYU-981在伴或不伴痛风的高尿酸血症中的疗效）。维持高血浆药物浓度的因素包括高生物利用度（BA）、低分布容积（Vd）和低清除率/游离分数（CL/F）。多替努拉在大鼠和猴子中的生物利用度分别为86.9%和91.0%，而人体的CL/F（0.013 L·h⁻¹·kg⁻¹）低于大鼠（0.052 L·h⁻¹·kg⁻¹）和猴子（0.037 L·h⁻¹·kg⁻¹）。此外，一项人体质量平衡研究表明，口服给药后至少有91.4%的多替努拉被吸收，该吸收率是通过尿液和呼出气体中放射性排泄百分比计算得出的。尽管尚未评估多替努拉在人体内的生物利用度（BA），但预计其较高。多替努拉在大鼠和猴子体内的分布容积/分布分数（Vd/F）值几乎等于细胞外液容量（分别为0.297和0.208 L/kg）。此外，多替努拉在人体内的Vd/F值与大鼠和猴子的Vd/F值几乎相同（表1）。这一结果可能归因于某些因素，例如大鼠和猴子的分布容积（Vd）相似，且在大鼠中给予0.3–3 mg/kg剂量后，Vd值几乎保持不变（数据未显示）。此外，大鼠、猴子和人体的血浆蛋白结合率几乎相同。多替努拉的清除率（CL）似乎主要由代谢介导，因为多替努拉主要以代谢物的形式经尿液排泄（图3和表4）。在大鼠和猴子中，CL/F 值显著低于肝血流量值（分别为 3.3 和 2.6 L·h⁻¹·kg⁻¹），表明多替努拉的清除率较低。这些结果表明，高生物利用度、低分布容积/血流比 (Vd/F) 和 CL/F 会导致低剂量给药时多替努拉的血浆浓度较高。[2]
肾近端小管腔内的药物浓度可视为游离血浆浓度。虽然较低的血浆蛋白结合率会导致肾小管腔内药物浓度较高，但这也会通过增加肾脏清除率而持续影响药理作用。多替努拉在人体内的血浆蛋白结合率为 99.4%。由于该药物的药理靶点是肾小管，因此该值可能看起来很高。然而，该值表明药理作用和药代动力学之间达到了适当的平衡，且作用持续时间较长。事实上，当剂量超过5 mg时，多替努拉对血清尿酸水平和肾脏尿酸排泄的影响似乎已达到饱和。多替努拉的药代动力学/药效学建模和模拟（简单最大效应模型）表明，多替努拉半数最大效应时的血浆浓度为3.8 nM（相当于2 mg剂量下的Cmax为196 ng/mL）。尽管苯溴马隆通过URAT1转运尿酸的IC50值（0.190 μM）约为多替努拉（0.0372 μM）的5倍，但苯溴马隆的临床剂量仍为50 mg（是多替努拉的12.5倍）。苯溴马隆在人体内的CL/F和Vd/F分别约为0.053 L·h-1·kg-1和0.4 L/kg（根据剂量、AUC0-24和T1/2计算）。尽管多替努拉和苯溴马隆的生物利用度尚不明确，但如果二者的生物利用度相似，则多替努拉的CL和Vd预计会低于苯溴马隆。因此，这些结果表明，与苯溴马隆相比，多替努拉具有更理想的尿酸药物PK特征，能够更有效地将药物递送至靶点。[2]
此外，多替努拉能有效抑制URAT1，并对其他尿酸分泌转运蛋白（如ABCG2、有机阴离子转运蛋白1 (OAT1, SLC22A6)和OAT3 (SLC22A8)）表现出高度选择性；因此，它被指定为SURI（严重尿酸缺乏症）。该药物的药理学和药代动力学特征均有助于其在低剂量（0.5–4 mg）下持续降低血清尿酸水平。此外，在药理活性浓度下，多替努拉不抑制药物转运体，例如多药耐药蛋白1 (MDR1)、有机磷酸转运蛋白(OATP)和MATE（药物相互作用指南推荐），也不抑制药物代谢酶，例如CYP（例如，CYP2C9，其可被苯溴马隆抑制）和UGT（数据未显示）。此外，由于多替努拉吸收率高，MDR1和ABCG2对多替努拉肠道吸收的贡献也很低。在大鼠体内研究中，多替努拉的肝脏浓度约为血浆浓度的2倍（数据未显示），且在人体内的分布容积/分布因子(Vd/F)较低。因此，这表明OATP1B1和OATP1B3对多替努拉在肝脏中的摄取贡献较低。如果多替努拉是这些药物转运蛋白的底物，考虑到多替努拉对这些药物转运蛋白摄取典型底物的IC50值（MDR1 > 200 μM，ABCG2 74.7 μM，OATP1B1 11.5 μM，OATP1B3 > 200 μM），多替努拉对这些药物转运蛋白的亲和力应该较低。因此，由于多替努拉在低剂量下即可发挥药理作用，预计其药物相互作用的风险较低。[2]
慢性肾脏病（CKD）已成为全球公共卫生问题，尿酸（UA）仍然是CKD的主要危险因素。肾脏作为清除尿酸的主要器官，其肾小管上皮细胞中存在一组尿酸转运蛋白。肾脏疾病会阻碍尿酸（UA）的排泄，而血清尿酸的蓄积反过来又会损害肾功能。目前市售的降尿酸药物主要有三类：黄嘌呤氧化还原酶抑制剂，其作用机制是抑制尿酸的生成；促尿酸排泄剂，其作用机制是增加尿液中尿酸的浓度，从而降低血清尿酸水平；以及尿酸酶，其作用机制是将尿酸转化为尿囊素，从而显著降低血清尿酸水平。值得注意的是，对于慢性肾脏病（CKD）患者，单独或联合使用上述药物均需格外谨慎。越来越多的证据表明，多种降尿酸药物对治疗CKD患者的高尿酸血症有效。此外，大量新型且有前景的候选药物和植物化学物质正处于不同的研发阶段。截至目前，尚无充分证据支持广泛使用降尿酸疗法来预防或延缓CKD的进展。该综述总结了有关 CKD 合并高尿酸血症治疗的证据和观点，供药物化学家和肾脏病学家参考。[1]

C14H9CL2NO4S

358.1966

356.962

C, 46.95; H, 2.53; Cl, 19.79; N, 3.91; O, 17.87; S, 8.95

1285572-51-1

1285572-51-1;

51349053

Typically exists as solid at room temperature

2.9

83.1

1

4

1

22

538

0

VOFLAIHEELWYGO-UHFFFAOYSA-N InChi Code

InChI=1S/C14H9Cl2NO4S/c15-9-5-8(6-10(16)13(9)18)14(19)17-7-22(20,21)12-4-2-1-3-11(12)17/h1-6,18H,7H2

(3,5-dichloro-4-hydroxyphenyl)(1,1-dioxidobenzo[d]thiazol-3(2H)-yl)methanone

FYU-981; FYU 981; Dotinurad; 1285572-51-1; (3,5-dichloro-4-hydroxyphenyl)(1,1-dioxidobenzo[d]thiazol-3(2H)-yl)methanone; (3,5-dichloro-4-hydroxyphenyl)-(1,1-dioxo-2H-1,3-benzothiazol-3-yl)methanone; 305EB53128; Urece; FYU981; Urece

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。