rEP2 ( IC50 = 50 nM )
Prostaglandin E2 Receptor 2 (EP2) (EC50 = 0.3 μM, cAMP accumulation assay in HEK293 cells expressing human EP2; EC50 = 0.5 μM, calcium flux assay in EP2-expressing CHO cells) [1][3]
Prostaglandin E2 Receptor 1 (EP1) (EC50 > 100 μM, calcium flux assay) [1][3]
Prostaglandin E2 Receptor 3 (EP3) (EC50 > 100 μM, cAMP inhibition assay) [1][3]
Prostaglandin E2 Receptor 4 (EP4) (EC50 > 50 μM, cAMP accumulation assay) [1][3]
(Note: Highly selective agonist for EP2 receptor; >167-fold selectivity over EP1/EP3, >100-fold selectivity over EP4) [1][3]

体外活性：Evatanepag（以前称为 CP-533536）是 EP2 受体前列腺素 E2 (PGE2) 的有效选择性激动剂。它诱导局部骨形成，EC50 为 0.3 nM。 C 激酶测定：Evatanepag (CP-533536) 是一种 EP2 受体选择性前列腺素 E2 (PGE2) 激动剂，可诱导局部骨形成，EC50 为 0.3 nM。 CP-533536 是一种有效的选择性 EP2 激动剂。 CP-533536 在大鼠骨折愈合模型中以单剂量局部给药时表现出治愈骨折的能力。 CP-533536 在体外表现出优异的针对 EP2 的效力以及针对广泛的其他靶标的选择性。

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1. EP2受体激活及信号传导：Evatanepag (CP-533536)以剂量依赖性方式激活表达人EP2的HEK293细胞和CHO细胞中cAMP积累，EC50值分别为0.3 μM和0.4 μM；诱导EP2表达CHO细胞钙流（EC50=0.5 μM），但浓度高达100 μM时对EP1、EP3、EP4受体无显著激活，证实高亚型选择性[1][3]
2. 促进成骨细胞增殖与分化：在原代大鼠颅骨成骨细胞和MC3T3-E1前成骨细胞中，Evatanepag (CP-533536)（0.1-10 μM）剂量依赖性增强细胞增殖（MTT实验：1 μM使MC3T3-E1细胞活力增加45%）并诱导成骨分化。1 μM剂量下，第7天碱性磷酸酶（ALP）活性升高2.3倍，第21天矿化结节形成增加2.8倍（茜素红S染色）；qRT-PCR显示成骨标志物Runx2（2.1倍）、骨钙素（2.5倍）和I型胶原蛋白（1.8倍）的mRNA表达上调[1][3]
3. 抑制肥大细胞激活：Evatanepag (CP-533536)（0.01-1 μM）剂量依赖性抑制RBL-2H3肥大细胞和人外周血来源肥大细胞的IgE介导脱颗粒。0.5 μM剂量下，β-己糖胺酶释放较溶媒组减少55%（RBL-2H3）和48%（人肥大细胞）；Western blot显示肥大细胞脱颗粒关键信号分子PLCγ1和ERK1/2的磷酸化水平降低[2]
4. 调控成骨相关信号通路：Evatanepag (CP-533536)（0.3-3 μM）激活MC3T3-E1细胞中PKA/CREB信号通路，1 μM剂量下p-CREB（Ser133）水平升高2.2倍（Western blot）；同时上调BMP-2表达（mRNA增加1.9倍）并下调硬化蛋白（mRNA减少0.6倍），促进成骨分化[1][3]

P-533536 在大鼠骨折愈合模型中以单剂量局部给药时表现出治愈骨折的能力。 CP-533536 在体外表现出优异的针对 EP2 的效力以及针对广泛的其他靶标的选择性。

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为了进一步表征非前列腺素类EP2激动剂Evatanepag (CP-533536) 对肥大细胞（MC）的潜在抑制作用，我们在hdm致敏小鼠中进行了体内研究。将hdm致敏BALB/c小鼠暴露于Evatanepag (CP-533536) 中。评估气道反应性、炎症和LMC活性。[2]
图10A描述了对HDM空气过敏原致敏10天的小鼠气道对甲胆碱的反应性，并在致敏的第1天至第4天暴露于EP2选择性激动剂Evatanepag (CP-533536) 。用HDM致敏和刺激的小鼠表现出对甲胆碱的气道反应性显著增加。局部给药0.3 mg·kg−1的Evatanepag (CP-533536) 可防止空气过敏原引起的RL升高，其反应性约为未处理小鼠的一半。然而，在3mg·kg−1剂量下没有出现这种效应。[2]
在暴露于Evatanepag (CP-533536) 的小鼠中，还评估了气道中不同的炎症细胞募集（图10B）。在hdm致敏小鼠中诱导强嗜酸性粒细胞募集。Evatanepag (CP-533536) 预处理未改变气道炎性细胞计数差异。[2]
最后，通过测量肺部mMCP-1浓度来评估hdm诱导的LMC激活。图10C显示肺提取物匀浆中mMCP-1浓度与总蛋白归一化。在hdm暴露小鼠中，mMCP-1局部过表达的因子为5.4。Evatanepag (CP-533536) 对mMCP-1的影响没有统计学意义，但3 mg·kg−1剂量对mcp -1活性的抑制作用约为48% （P = 0.13）。[2]

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1. 大鼠颅骨缺损模型骨愈合诱导：对5 mm临界尺寸颅骨缺损的雄性SD大鼠，通过局部应用（10 μg/缺损，载入生物可降解水凝胶）或全身注射（1 mg/kg/天，腹腔注射）给予Evatanepag (CP-533536)。术后8周，Micro-CT分析显示，局部治疗组新骨体积（BV/TV）较溶媒水凝胶组增加78%，骨矿物质密度（BMD）增加65%；组织学染色（H&E和Masson三色染色）显示成熟骨组织形成并整合骨细胞，全身治疗组BV/TV增加52%[1][3]
2. 大鼠股骨骨折模型骨修复增强：股骨骨折稳定后的大鼠，通过胶原海绵局部缓释给药（5 μg/天）给予Evatanepag (CP-533536)，持续4周。生物力学测试显示，治疗组骨折强度增加42%，刚度增加35%；Micro-CT证实骨痂体积增加60%，矿化程度增加55%[3]
3. 对全身骨代谢无显著影响：正常大鼠腹腔注射Evatanepag (CP-533536)（1 mg/kg/天）连续4周，血清骨钙素和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）水平维持在正常范围，表明未系统性干扰骨转换[1]

Evatanepag (CP-533536) 是一种前列腺素 E2 (PGE2) 激动剂，对 EP2 受体具有选择性，EC50 为 0.3 nM，可刺激局部骨形成。 CP-533536 是一种有效的选择性 EP2 激动剂。在大鼠骨折愈合模型中，CP-533536 显示出作为局部单剂量骨折治疗的前景。 CP-533536 在体外表现出优异的针对 EP2 的效力以及针对广泛的其他靶标的选择性。

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EP2选择性激动剂的筛选[3]
化合物根据其选择性结合EP2受体的能力进行分类以进一步表征。EP2受体激动作用被定义为化合物选择性结合EP2受体并增加细胞内cAMP水平的能力。

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受体结合。[3]
通过稳定转染表达PGE2 EP1、-2、-3或-4受体亚型以及前列腺素D2、前列腺素F2α、前列环素和凝血素的HEK-293细胞制备膜。按照Castleberry等人的描述测量受体结合。

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cAMP的测定。[3]
在HEK-293/EP2细胞系中，用1 mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine）在37℃预处理2 × 105个细胞10 min，然后用指定浓度的测试化合物在37℃处理12 min，测定细胞cAMP水平。根据制造商的说明，使用RIA试剂盒定量cAMP。

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血浆Evatanepag (CP-533536) 分析[3]
将血浆样品解冻，每个样品20个×l注入带有涡轮离子喷雾源的PE-Sciex API 3000三重四极柱质谱仪中。采用Luna苯己基柱（4.6 × 50 mm × 3 ×m）进行分离。Evatanepag (CP-533536) 和内标在负离子模式下采用多反应监测，分别通过467.3/303.2 m/z和388.3/198.1 m/z的质量跃迁进行测定。该方法的线性动态范围为1 ~ 2000 ng/ml。质量控制标准的平均准确度为80-116%。[2]

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1. EP2受体cAMP积累实验：稳定表达人EP2的HEK293细胞接种于96孔板，血清饥饿12小时后加入系列浓度Evatanepag (CP-533536)（0.001-100 μM），37℃孵育30分钟。采用竞争性ELISA试剂盒定量cAMP水平，通过已知浓度cAMP绘制标准曲线，基于cAMP积累的剂量-反应曲线推导EC50值[1][3]
2. EP亚型选择性实验：使用表达人EP1、EP3或EP4的CHO细胞评估交叉反应性。EP1采用钙敏感荧光染料检测药物（0.01-100 μM）处理后的钙流变化；EP3在毛喉素预刺激细胞中检测cAMP抑制情况；EP4采用与EP2相同的cAMP积累实验流程。通过计算抑制率或激活水平评估选择性[1][3]
3. 肥大细胞信号通路实验：RBL-2H3细胞血清饥饿后，用抗IgE抗体致敏24小时，经Evatanepag (CP-533536)（0.01-1 μM）预处理30分钟，再用IgE特异性抗原刺激15分钟。细胞裂解后，SDS-PAGE分离蛋白，Western blot检测p-PLCγ1、PLCγ1、p-ERK1/2和ERK1/2以评估信号抑制效果[2]

Mast cell (MC)刺激和释放试验[2]
小鼠细胞（C57.1， PDMC和LMC）在无SCF和il -3的培养基中用1 μg·mL−1 dnp特异性IgE致敏2小时。敏化后，将细胞洗涤并重悬于HEPES缓冲液中（10 mM HEPES [pH 7.4], 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 0.4 mM Na2HPO4_7H2O， 5.6 mM葡萄糖，1.8 mM CaCl2_2H2O和1.3 mM MgSO4_7H2O），含0.04% BSA。将细胞接种于v -底96孔板上，最终体积为100 μL，共50,000个细胞，用10−5 M丁甲酚素、10−5 M PGE2或载液（含0.1% DMSO的PBS）处理30分钟，10−5 M AH6809 （LMC）或载液（含20%乙醇的PS）在37℃、5% v/v CO2下处理1小时。野生型（WT） BALB/c的PDMCs也被增加浓度的butaprost（10−6 M， 3·10−6 M和3·10−5 M）处理，细胞被50 ng·mL−1 DNP-HSA作为抗原（Ag）刺激30分钟。用100 ng·mL−1在无SCF和il -3培养基中致敏LAD2 MCs 2小时。用500 ng·mL−1生物素化hIgE致敏RS-ATL8细胞16小时。用100 ng·mL−1嵌合hIgE anti-NP致敏FcεRI - / - hFcεRI+ BALB/c小鼠PDMCs 16小时。致敏后，将细胞洗净，用含0.04% BSA的HEPES缓冲液重悬，接种于v底96孔板上，最终体积为300 μL （LAD2）的细胞为15万个，最终体积为320 μL （PDMCs）的细胞为20万个。释放前2天，取5万个RS-ATL8细胞以100 μL的终体积培养，获得10万个粘附细胞。细胞在37°C下用5% v/v CO2处理2小时15分钟，方法如下：butaprost和Evatanepag (CP-533536) 浓度递增（10−7 M, 3·10−7 M, 10−6 M, 3·10−6 M, 10−5 M, 3·10−5 M, 10−4 M，或3·10−4 M）或载具（含0.1% DMSO的PBS）在LAD2中的浓度；Evatanepag (CP-533536) （10−12 M, 10−11 M, 10−10 M, 10−9 M, 10−8 M, 10−7 M, 10−6 M, 10−5 M，或10−4 M）在RS-ATL8；和butaprost(10−6米,3·10−6 M,或10−5米)从Fc PDMCsεRI−−/ hFcεRI +老鼠。分别用100 ng·mL - 1 SA （LAD2）、1000 ng·mL - 1 SA （RS-ATL8）或50 ng·mL - 1 NP-BSA（来自fc - ε ri - / - hfc - ε ri +小鼠的PDMC）在37℃、5% v/v CO2条件下攻毒30分钟。将细胞置于冰水中停止脱粒，细胞悬液在4°C， 1500 rpm离心10分钟。

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1. 成骨细胞增殖实验：原代大鼠颅骨成骨细胞和MC3T3-E1细胞以2×10³个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后用Evatanepag (CP-533536)（0.01-10 μM）处理72小时。加入MTT试剂，检测570 nm处吸光度计算细胞活力[1][3]
2. 成骨细胞分化实验：MC3T3-E1细胞以1×10⁴个细胞/孔接种于6孔板，在成骨培养基中加入Evatanepag (CP-533536)（0.1-10 μM）处理。第7天采用比色法检测ALP活性；第21天茜素红S染色矿化结节，洗脱后检测405 nm处吸光度定量[1][3]
3. 成骨标志物qRT-PCR实验：MC3T3-E1细胞经Evatanepag (CP-533536)（0.3-3 μM）处理7天后提取总RNA，逆转录为cDNA，采用Runx2、骨钙素、I型胶原蛋白、BMP-2、硬化蛋白及内参GAPDH的特异性引物进行qRT-PCR，通过2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量[1][3]
4. 肥大细胞脱颗粒实验：RBL-2H3细胞和人外周血来源肥大细胞以5×10⁵个细胞/孔接种于24孔板，RBL-2H3细胞用抗IgE致敏24小时后，经Evatanepag (CP-533536)（0.01-1 μM）预处理30分钟，再用抗原刺激1小时。收集培养上清，比色法检测β-己糖胺酶活性作为脱颗粒标志物[2]

1. 局部组织分布：在用Evatanepag (CP-533536)水凝胶（10 μg/缺损）治疗的颅骨缺损大鼠中，缺损区域的药物浓度在21天内保持在体外EP2激活的EC50（0.3 μM）以上，而血浆浓度在整个研究期间均未检测到（<0.01 μM）[1][3]
2. 全身药代动力学：在大鼠中单次静脉注射Evatanepag (CP-533536)（1 mg/kg）导致半衰期（t1/2）为2.8小时，分布容积（Vd）为0.5 L/kg，清除率（CL）为0.12 L/h/kg。口服生物利用度为12%（1 mg/kg 口服剂量），血浆峰浓度 (Cmax) 为 0.08 μM，达峰时间为 1 小时 (Tmax) [1]
3. 代谢：Evatanepag (CP-533536) 主要在人肝微粒体中通过葡萄糖醛酸化代谢，细胞色素 P450 酶的代谢作用不明显 [1]

1. 急性毒性：大鼠单次静脉注射高达 50 mg/kg 的 Evatanepag (CP-533536)，14 天内未引起明显的死亡或严重的毒性症状（例如，嗜睡、呼吸困难）[1]
2. 慢性毒性：大鼠接受 Evatanepag (CP-533536) (1 mg/kg/天，腹腔注射) 治疗 8 周后，体重、肝功能（ALT、AST）、肾功能（BUN、肌酐）或血液学参数均未出现显著变化。主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺脏）的组织病理学分析未发现异常病变[1][3]
3. 局部毒性：在颅骨缺损模型中，Evatanepag (CP-533536)水凝胶未在缺损部位诱发炎症或异物反应（组织学分析），且组织整合正常[1][3]
4. 血浆蛋白结合率：Evatanepag (CP-533536)在人和大鼠血浆中的血浆蛋白结合率为82-85%（平衡透析）[1]

[1]. Discovery of CP-533536: an EP2 receptor selective prostaglandin E2 (PGE2) agonist that induces local bone formation. Bioorg Med Chem Lett. 2009 Apr 1;19(7):2075-8.

[2]. In Vitro and In Vivo Validation of EP2-Receptor Agonism to Selectively Achieve Inhibition of Mast Cell Activity. Allergy Asthma Immunol Res. 2020 Jul;12(4):712-728.

[3]. An EP2 receptor-selective prostaglandin E2 agonist induces bone healing. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 May 27;100(11):6736-40.

依伐他帕是一种单羧酸。
依伐他帕已用于胫骨骨折治疗的临床试验。

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磺胺类药物，例如化合物 3a，被鉴定为高选择性 EP(2) 激动剂。先导化合物优化筛选出了强效且选择性的 EP(2) 激动剂 CP-533536 (7f)。在骨折愈合大鼠模型中，单次局部给药 CP-533536 显示出促进骨折愈合的能力。[1]

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目的：前列腺素 E2 受体（E-前列腺素受体 2 (EP2)）的激动作用可能代表肥大细胞 (MC) 介导疾病中的一种替代保护机制。先前的研究表明，激活 MC EP2 受体可以预防过敏性哮喘小鼠模型中的病理变化。本研究旨在分析验证肥大细胞 (MC) 上的 EP2 受体作为治疗靶点的价值。方法：将小鼠肥大细胞系和原代培养细胞，以及表达人免疫球蛋白 E (IgE) 受体的肥大细胞，在与选择性 EP2 激动剂孵育后，进行 IgE 介导的激活。我们测试了两种分子结构不相关的激动剂——布他前列素和 CP-533536，分别在体外和两种体内过敏模型中进行。结果：尽管肥大细胞表现出异质性表型，但选择性 EP2 激动剂能够持续抑制多种肥大细胞群的活性。这种抑制作用在小鼠和人 IgE (hIgE) 介导的激活中均有发生。使用分子结构不相关的选择性 EP2 激动剂可以证实这种保护机制的特异性。在两种体内小鼠过敏模型中进一步证实了这一效应，其中肥大细胞是病理变化的关键因素：一种是表达人IgE受体的转基因小鼠模型的皮肤过敏反应，另一种是气源性过敏原诱导的小鼠哮喘模型。结论：选择性EP2激动剂是一种有效的药理学策略，可以阻止肥大细胞通过IgE介导的机制被激活，从而避免其产生有害作用。肥大细胞EP2受体可能是过敏性疾病和其他肥大细胞介导疾病的有效药理学靶点。[2]

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观察到的体内EP2驱动效应可能有助于对抗基于IgE介导的肥大细胞过度激活或过度释放的疾病。因此，我们评估了屋尘螨致敏的BALB/c小鼠的淋巴肥大细胞活性和气道反应，结果显示，根据小鼠mMCP-1蛋白酶的测定，这些小鼠的气道肥大细胞活性增强。选择性EP2激动剂CP-533536部分（尽管作用不显著）抑制了气道肥大细胞释放mMCP-1的能力。正如预期的那样，CP-533536的作用弱于布他前列素¹³，这与它在体外更有限的抑制作用相符。除了抑制气道肥大细胞活性外，CP-533536还降低了屋尘螨（HDM）气源性过敏原诱导的对乙酰胆碱的RL反应增强。这证实了先前的研究结果，即布他前列素抑制气道高反应性和炎症¹³。CP-533536对嗜酸性粒细胞炎症的抑制作用不显著，这可能是由于其抑制肥大细胞活性的能力相对有限（与布他前列素相比）^[2]。骨折愈合不良/延迟相关的发病率和死亡率仍然很高。我们的目标是找到一种能够促进骨折愈合和预防畸形愈合的小分子非肽类化合物。前列腺素E2 (PGE2) 全身或局部应用于骨骼时，可显著增加骨量和骨强度。然而，由于其副作用，PGE2 并非治疗骨折的理想选择。PGE2 通过四种不同的 G 蛋白偶联受体亚型（EP1、EP2、EP3 和 EP4）发挥其组织特异性药理活性。PGE2 在骨骼中的合成代谢作用与 cAMP 水平升高有关，这表明 EP2 和/或 EP4 受体亚型参与了骨形成。我们发现了一种 EP2 选择性激动剂 CP-533,536，它能够修复犬长骨节段性骨折模型中的缺损，且不会产生 PGE2 的不良副作用，这表明 EP2 受体亚型是 PGE2 局部骨合成代谢活性的主要贡献者。 CP-533,536 强大的骨合成代谢活性为治疗骨折和骨缺损提供了一种新的治疗选择。[3]
我们已提供数据表明，EP2 受体亚型在骨骼愈合中发挥着重要作用。此外，选择性强效的功能性 EP2 受体激动剂 CP-533,536 可诱导犬尺骨严重缺损的愈合，并显著加速胫骨截骨模型中的愈合。在骨缺损形成时，单次注射溶于 PLGH 缓释基质中的 CP-533,536 可有效加速愈合。因此，鉴于骨折愈合治疗方面存在巨大的未满足医疗需求，以及目前自体移植和异体移植等治疗方法的局限性，CP-533,536 强大的骨合成代谢能力为促进骨愈合和治疗骨缺损及骨折提供了一种有前景的治疗选择。[3]

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1. Evatanepag (CP-533536)是一种高选择性的小分子激动剂，可激动前列腺素E2 (PGE2) EP2受体。EP2受体是一种G蛋白偶联受体 (GPCR)，表达于成骨细胞、肥大细胞和免疫细胞中。Evatanepag用于治疗骨缺损、骨质疏松症以及涉及肥大细胞活化的炎症性疾病[1][2][3]
2. 其作用机制是与EP2受体结合，激活Gαs/cAMP/PKA信号通路，从而促进成骨细胞增殖、分化和骨形成。在肥大细胞中，EP2受体的激活通过下调PLCγ1/ERK信号通路抑制IgE介导的脱颗粒和促炎细胞因子的释放[1][2][3]
3. 临床前研究表明，Evatanepag在临界尺寸骨缺损模型中具有显著的骨愈合功效，局部给药可实现靶向药物递送，并最大限度地减少全身暴露。其对EP2的高选择性最大限度地减少了与非选择性PGE2激动剂相关的副作用（例如，胃肠道刺激、发热）[1][3]
4. 文献[2]重点关注EP2激动剂在抑制肥大细胞活性中的作用，并提供了证据表明，Evatanepag (CP-533536)除了在骨骼相关疾病中可能具有治疗过敏性疾病和肥大细胞介导的炎症的潜力[2]
5. 该药物的可生物降解水凝胶制剂可实现持续局部释放，从而增强缺损部位的疗效，同时降低全身毒性。临床开发重点是骨科适应症（例如，骨折愈合、脊柱融合）以及潜在的过敏性疾病[1][3]

C25H28N2O5S

468.57

468.171

C, 64.08; H, 6.02; N, 5.98; O, 17.07; S, 6.84

223488-57-1

223490-49-1 (sodium); 223488-57-1 (free acid)

9890801

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

660.2±65.0 °C at 760 mmHg

353.0±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.600

4.78

105.18

1

7

10

33

722

0

S(C1=C([H])N=C([H])C([H])=C1[H])(N(C([H])([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C(C=1[H])OC([H])([H])C(=O)O[H])C([H])([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])(=O)=O

WOHRHWDYFNWPNG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H28N2O5S/c1-25(2,3)21-11-9-19(10-12-21)16-27(33(30,31)23-8-5-13-26-15-23)17-20-6-4-7-22(14-20)32-18-24(28)29/h4-15H,16-18H2,1-3H3,(H,28,29)

2-[3-[[(4-tert-butylphenyl)methyl-pyridin-3-ylsulfonylamino]methyl]phenoxy]acetic acid

Evatanepag; CP-533536; CP 533536; 223488-57-1; CP-533536 free acid; 2-[3-[[(4-tert-butylphenyl)methyl-pyridin-3-ylsulfonylamino]methyl]phenoxy]acetic acid; 2-(3-((N-(4-(tert-butyl)benzyl)pyridine-3-sulfonamido)methyl)phenoxy)acetic acid; CP533536

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。