FBBBE

别名: Bis{[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)oxy]-3H-[spiro(isobenzofuran-1,9,-xanthen]-3-one} FBBBE
目录号: V42329 纯度: ≥98%
FBBBE 可用于检测细胞产生的 H2O2。
FBBBE CAS号: 1522117-83-4
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
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产品描述
FBBBE可用于检测细胞产生的H2O2。FBBBE可被细胞内H2O2触发并转化为荧光素,从而导致细胞内荧光增强(激发波长=4480 nm,发射波长=512 nm)。
FBBBE(CAS号:1522117-83-4),又称荧光素双(苄基硼酸酯),是一种非荧光、可透过细胞的荧光素衍生物,用作活细胞成像中特异性检测细胞内过氧化氢(H2O2)的荧光探针。它含有两个苄基硼酸酯基团,可与H2O2特异性反应释放荧光素。
生物活性&实验参考方法
靶点
The target is intracellular hydrogen peroxide (H2O2), a key reactive oxygen species (ROS). The probe's mechanism is based on a specific chemical reaction: H2O2 cleaves the boronic ester groups, triggering a self-immolative process that releases the highly fluorescent fluorescein. This design ensures that the signal is specific to H2O2 and not other ROS.
体外研究 (In Vitro)
建议(以下是我们建议的实验方案,仅供参考,请根据您的具体需求进行调整)[1]。1. 在底部为玻璃的 35 mm 培养皿中,以 250,000 个细胞/皿的密度接种 RAW 264.7 细胞,并使其贴壁 5 小时。2. 向部分培养皿中加入 1 μg/mL LPS,持续一天。接种后的第二天,向剩余的培养皿中加入 100 μM H2O2 或 PBS,分别处理 1 小时。3. 用 PBS 洗涤细胞两次后,用冰冷的 95% 乙醇固定 15 分钟。4. 用 PBS 洗涤细胞两次后,在室温下用 50 μM 探针 (FBBBE) 孵育 1 小时。5. 用 PBS 洗涤细胞两次后,使用 Aqua Mount 将盖玻片封片于细胞上。 5. 使用奥林巴斯FV1000共聚焦激光扫描显微镜(80倍放大倍率)采集共聚焦图像。6. 使用ImageJ程序处理图像。
FBBBE是一种探针,而非药物。它的“活性”体现在与H2O2反应后荧光强度的增加,该增加值可作为细胞内活性氧(ROS)水平的指标。在溶液中,它表现出显著的荧光增强反应。该化合物在被H2O2裂解之前几乎不发荧光。由于其具有细胞渗透性,因此可以特异性地检测细胞内H2O2,而不能检测细胞外H2O2。
体内研究 (In Vivo)
不适用。这是一种诊断成像探针,在体内不具有治疗生物学效应。其“体内活性”是指其在遇到H2O2时产生荧光信号的能力,但由于在完整动物体内清除迅速且存在自发荧光问题,因此主要用于体外细胞检测。
酶活实验
不适用。作为一种与小分子(H2O2)反应的化学探针,它不采用经典的酶/受体结合试验进行评估。其性能是在比色皿中使用缓冲溶液进行评估的。标准的“活性”测试方法是将H2O2加入FBBBE溶液中,并使用荧光计测量荧光强度(激发/发射波长约为480/512 nm)随时间的变化。
细胞实验
细胞检测的标准流程:1. 将细胞(例如 HeLa 细胞、巨噬细胞)接种于 96 孔板或盖玻片上。2. 移除培养基,并用 PBS 洗涤细胞。3. 在无血清培养基中加入 FBBBE(1-10 uM),于 37℃ 避光孵育 30-60 分钟。4. 移除上样缓冲液,并洗涤细胞以去除过量的探针。5. 加入激动剂(例如 100 nM PMA 或 H2O2 作为阳性对照)刺激 ROS 生成。6. 使用荧光酶标仪(激发/发射波长 = 480/512 nm)立即或随时间测量荧光强度,或通过共聚焦显微镜采集图像。
动物实验
不适用。FBBBE 专为体外检测而设计,由于其背景荧光高且荧光素衍生物在体内代谢迅速,因此不适用于动物模型。典型的体内 ROS 探针需要不同的化学方法来保证其生物分布和稳定性。
药代性质 (ADME/PK)
不适用。这是一种用于体外成像的探针。由于它并非用于全身给药,因此药代动力学特性无关紧要。其关键特性是细胞渗透性,使其能够穿过活细胞完整的质膜,从而检测细胞内H₂O₂。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
不适用(工作浓度下无毒荧光探针)。应遵循有机溶剂(DMSO)的标准处理和处置规程。该化合物本身用作诊断试剂,在标准规程所述的短期加载和成像期间不会诱导细胞毒性。
参考文献

[1]. Readily accessible fluorescent probes for sensitive biological imaging of hydrogen peroxide. Chembiochem 14(5), 593-598 (2013).

其他信息
不适用。FBBBE 是一种用于研究细胞培养中氧化应激和氧化还原生物学的研究工具。它是一种“开启型”探针,可以实时监测细胞内 H₂O₂ 的产生。它并非候选药物,因此没有临床试验或审批状态。它是一种实验室用化学试剂。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C46H46B2O9
分子量
764.474
精确质量
584.238
CAS号
1522117-83-4
PubChem CID
77461126
外观&性状
Off-white to light yellow solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
595.2±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
313.8±32.9 °C
蒸汽压
0.0±1.7 mmHg at 25°C
折射率
1.600
tPSA
90.9
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
8
重原子数目
57
分子复杂度/Complexity
1320
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C1C2=CC=CC=C2C2(C3=CC=C(OCC4C=CC(B5OC(C)(C)C(C)(C)O5)=CC=4)C=C3OC3=CC(OCC4C=CC(B5OC(C)(C)C(C)(C)O5)=CC=4)=CC=C23)O1
InChi Key
UKXLQKOGCSYSOD-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C46H46B2O9/c1-42(2)43(3,4)55-47(54-42)31-17-13-29(14-18-31)27-50-33-21-23-37-39(25-33)52-40-26-34(22-24-38(40)46(37)36-12-10-9-11-35(36)41(49)53-46)51-28-30-15-19-32(20-16-30)48-56-44(5,6)45(7,8)57-48/h9-26H,27-28H2,1-8H3
化学名
3',6'-bis[[4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)phenyl]methoxy]spiro[2-benzofuran-3,9'-xanthene]-1-one
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3081 mL 6.5405 mL 13.0810 mL
5 mM 0.2616 mL 1.3081 mL 2.6162 mL
10 mM 0.1308 mL 0.6540 mL 1.3081 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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