Geissoschizine methyl ether   中文名称: 缝籽嗪甲醚

5-HT_1A Receptor

Geissoschizine methyl ether与5-HT1A受体的激动性结合[2]
图6显示了七种UH衍生生物碱对[3H]8-OH-DPAT与5-HT1A受体结合的体外竞争结合试验结果<与其他六种生物碱相比，GM（0.01-100μM）以浓度依赖的方式强烈抑制[3H]8-OH-DPAT与5-HT1A受体的结合。GM的50%抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别估计为0.904μM和0.517μM。

为了阐明Geissoschizine methyl ether/GM对5-HT1A受体[35S]GTPγS的激动作用，进行了体外结合试验（图7）。GM（0.1-100μM）或5-HT（1-300 nM）以浓度依赖的方式增加[35S]GTPγS结合。然而，GM的结合率约为5-HT的40%。

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YKS中的GM/Geissoschizine methyl ether浓度[2]
表1显示了YKS中含有的七种UH衍生生物碱的浓度。转基因约占YKS提取物的0.014%。因此，可以确认1.0 g YKS中含有约140μg GM。

GM/Geissoschizine methyl ether对社交孤立小鼠攻击行为增加和社交行为减少的影响[2]
单次给予转基因（75-300μg/kg）并没有改变增加的攻击行为（图8A），而转基因在300μg/kg时显著改善了减少的社会行为（P<0.01）（图8B）。

连续14天重复服用GM/Geissoschizine methyl ether显著降低了150μg/kg（P<0.01）和300μg/kg（P<0.01）的攻击行为（图9A），并增加了150μ/kg（P<0.01）、300μg/kg的社会行为（P<0.01）（图9B）。连续14天给予GM（300μg/kg）的这些改善作用在GM给药后第14天30分钟单次给予WAY-100635（0.1mg/kg）时被抵消（P<0.01）（图9A，B），YKS（图3）和UH（图5）也是如此。

WAY-100635联合给药对反复给药盖氏嗪甲醚/GM[2]
改善攻击行为和社会行为的影响 为了研究重复给药WAY-100635对重复给药GM/Geissoschizine methyl ether改善相互作用行为的影响，口服GM（300μg/kg）15天，WAY-100638（0.1mg/kg）与GM联合给药14天（图10）。在第15天的社交互动测试中，连续15天给予GM对攻击行为（图10A）和社交行为（图10B）的改善作用被连续14天给予WAY-100635抵消（P<0.05）。

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通过反复服用Geissoschizine methyl ether/GM[2]
，维持攻击行为和社会行为的改善效果 对离体小鼠口服GM/Geissoschizine methyl ether（300μg/kg）14天，然后在第15天进行社交互动测试（图11）。在第15天，也就是在行为测试日未服用GM的情况下，观察到对攻击行为（P<0.05）和社会行为（P<0.01）的改善作用（图11A，B）。

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单独使用WAY-100635对社交孤立小鼠攻击行为增加和社交行为减少的影响[2]
如图3、图5、图9、图10所示，WAY-100635与YKS、UH或Geissoschizine methyl ether/GM的联合给药抵消了这些受试物质对攻击性和社会行为的改善作用。在这里，我们研究了单独使用WAY-100635对隔离诱导的攻击性和社交行为的影响（图12）。单次（0.1和1.0 mg/kg）或重复（0.1 mg/kg）服用WAY-100635 14天不会影响隔离小鼠的攻击性（图12A，D）和社交行为（图12B，E）。所有组的运动活动也没有显著差异（图12C，F）。

5-HT1A受体的竞争性结合试验 [2]
通过将各种浓度的钩藤碱、异钩藤碱，Corynoxein，异Corynoxine，hirsuteine，hirsutine和Geissoschizine methyl ether/GM溶解在0.5%的二甲亚砜（DMSO）中制备。 使用先前描述的方法进行5-HT1A受体的竞争性结合测定（Terawaki等人，2010）。简而言之，将5.25μl试验化合物溶液或载体与500μl CHO-h5-HT1A细胞膜溶液（60-92μg蛋白质/mL）和20μl 40 nM[3H]8-OH-DPAT在pH 7.4的50 mM Tris-HCl缓冲液中，在25°C下孵育60分钟，该缓冲液含有0.1%抗坏血酸、0.5 mM EDTA和10 mM MgSO4。通过添加10μM甲草啉来测定非特异性结合。孵育后，使用细胞采集器通过Whatman GF/B过滤器快速过滤分离5-HT1A受体配体复合物。用3ml冰冷的50mM Tris-HCl缓冲液冲洗被捕获的放射性复合物四次并干燥。使用液体闪烁计数器测量干燥过滤器上捕获的放射性（每分钟计数，cpm）。 特异性结合是通过从总结合中减去非特异性结合来确定的，并使用以下公式表示为抑制百分比：抑制率（%）=[1-（c-a）/（b-a）]×100，其中“a”是非特异性结合的平均cpm，“b”是总结合的平均cpm，“c”是受试物质存在时的平均cpm。

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[35S]GTPγS与5-HT1A受体的结合分析 [2]
使用之前描述的方法检查了Geissoschizine methyl ether/GM对[35S]GTPγS与5-HT1A受体结合的影响（Terawaki等人，2010）。简而言之，将溶解在50%DMSO或载体中的0.42μlGeissoschizine methyl ether/GM溶液在30°C下与50μl CHO-h5-HT1A膜溶液（25-30μg蛋白质/mL）和25μl 10μM GDP在pH 7.4的20 mM HEPES缓冲液中预孵育20分钟，该缓冲液含有100 mM NaCl、10 mM MgCl2、1 mM DTT和1 mM EDTA，在加入小麦胚芽凝集素包被的闪烁邻近测定珠后，在相同温度下进一步孵育60分钟。通过向混合物中加入10μl 3.3 nM[35S]GTPγS引发结合反应。孵育30分钟后，使用液体闪烁计数器测量放射性。通过添加100μM GTPγS确定非特异性结合。将受试物质诱导的[35S]GTPγS结合率与300 nM 5-HT（5HT1A受体的完全激动剂）诱导的结合率进行比较。

单次给予YKS、UH和Geissoschizine methyl ether/GM对社会隔离小鼠攻击性和社交行为的影响[2]
将YKS（0.5和1.0 g/kg）、UH（75和150 mg/kg）或Geissoschizine methyl ether/GM（75、150和300 μg/kg）单次口服给予已隔离4周的小鼠。YKS和UH组小鼠口服给予蒸馏水（10.0 ml/kg），GM组小鼠口服给予0.5% Tween-80溶液（10.0 ml/kg），给药方案与上述相同。给药60分钟后进行社交互动测试。

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重复给予YKS、UH和盖索斯基嗪甲醚/GM对社会隔离小鼠攻击性和社交行为的影响[2]
从第4周到第6周，每天一次，连续14天，对隔离小鼠口服给予YKS（0.5和1.0 g/kg）、YKS-UH（1.0 g/kg）、UH（75和150 mg/kg）或盖索斯基嗪甲醚/GM（150和300 μg/kg）。对于YKS和UH试验，给予相应的隔离对照组或群养小鼠口服给予蒸馏水（10.0 ml/kg）；对于GM试验，给予0.5% Tween-80溶液（10.0 ml/kg）。给药方案与上述相同。在本实验中，于第14天分别腹腔注射YKS（1.0 g/kg）、UH（150 mg/kg）或GM（300 μg/kg）30分钟后，腹腔注射WAY-100635（0.1 mg/kg）或生理盐水（10.0 ml/kg）。社交互动测试于第14天最后一次注射试验物质后60分钟进行。

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WAY-100635 与重复给药的盖索斯基嗪甲醚/GM 联合用药的影响 [2]
从第 4 周到第 6 周，每天一次口服给予隔离小鼠 GM/盖索斯基嗪甲醚（300 μg/kg），连续 15 天；同时，每天一次腹腔注射 WAY-100635（0.1 mg/kg）或生理盐水（10.0 ml/kg），与 GM 联合用药，连续 14 天；第 15 天不给予 WAY-100635。在社交互动测试当天（第 15 天），在行为测试前 60 分钟给予 GM。

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关于重复给药后盖索斯基辛甲醚/GM 的持续作用[2]
从第4周到第6周，每天一次口服给予隔离小鼠GM/盖索斯基辛甲醚（300 μg/kg）或0.5% Tween-80（10.0 ml/kg），连续14天，然后在第15天进行社交互动测试；第15天不给予GM。

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WAY-100635单独作用对社会隔离小鼠攻击性行为增加和社交行为减少的影响[2]
为了评估WAY-100635单独单次给药的效果，对隔离4周的小鼠腹腔注射WAY-100635（0.1和1.0 mg/kg）或生理盐水（10.0 ml/kg）。在给予WAY-100635后30分钟进行社交互动测试。为了评估单独重复给药WAY-100635的效果，从第4周到第6周，每天一次腹腔注射WAY-100635（0.1 mg/kg）或生理盐水（10.0 mg/kg），连续14天，对隔离饲养的小鼠进行测试。在第15天，停止给予WAY-100635，再次进行社交互动测试。

1. 抑肝散（YKS）是一种日本传统中药，也称汉方药，用于治疗神经衰弱、失眠、儿童夜间哭闹和烦躁不安等症状。钩藤中的主要吲哚生物碱——钩藤碱甲醚（GM）已被证实是抑肝散的主要活性成分，具有精神活性作用。近期有报道称，GM对5-羟色胺1A受体具有部分激动作用。然而，尽管已有数项研究报道了GM在大鼠和人体内的血液动力学，但关于GM在人体内的代谢信息仍然有限。本研究旨在探讨GM在人体内的代谢途径和代谢酶。 2. 利用重组人细胞色素P450 (CYP) 同工酶和针对CYP同工酶的多克隆抗体，我们发现GM在某些CYP同工酶的作用下代谢为羟基化、脱氢化、羟基化+脱氢化、去甲基化和水加合物形式。3. 计算了人肝微粒体中各CYP同工酶的相对活性因子，以确定各CYP同工酶对人肝微粒体(HLM)中GM代谢的相对贡献。我们鉴定出CYP3A4是人肝微粒体中GM代谢的主要CYP同工酶。4. 这些发现为理解GM和YKS的药代动力学和药效学提供了重要的基础。[1]

[1]. In vitro identification of human cytochrome P450 isoforms involved in the metabolism of Geissoschizine methyl ether, an active component of the traditional Japanese medicine Yokukansan. Xenobiotica. 2016;46(4):325-34.

[2]. Geissoschizine methyl ether, an alkaloid in Uncaria hook, is a potent serotonin ₁A receptor agonist and candidate for amelioration of aggressiveness and sociality by yokukansan. Neuroscience. 2012 Apr 5;207:124-36.

已有报道称，钩藤（Uncaria sinensis）和钩藤（Uncaria rhynchophylla）中含有钩藤碱甲醚，并有相关数据报道。

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奥干散（YKS）是一种日本传统中药，由七种干燥草药组成。临床上广泛用于治疗精神疾病，例如痴呆患者的攻击性行为。我们之前已证实，奥干散及其组成草药钩藤（Uncaria hook，UH）在体外对5-HT(1A)受体具有部分激动作用。然而，这种体外作用是否在体内也存在，以及其活性成分是什么，目前尚不清楚。本研究旨在寻找奥干散的活性成分，并验证其在体内的作用。在本研究中，我们首先研究了奥干散和钩藤对社会隔离小鼠攻击性和社交性的影响。 YKS 和 UH 均能改善隔离引起的攻击性增强和社交性下降，而这些改善作用可被 5-HT(1A) 受体拮抗剂 WAY-100635 联合给药所抵消，或从 YKS 中去除 UH 后消失。这些结果表明，YKS 的作用主要归因于 UH，其活性成分存在于 UH 中。为了寻找候选成分，我们利用人工表达 5-HT(1A) 受体的中国仓鼠卵巢细胞，对 UH 中的七种主要生物碱进行了竞争性结合实验和 [(35)S] 鸟苷 5'-O-(3-硫代三磷酸) (GTPγS) 结合实验。结果表明，七种生物碱中只有吉索西辛甲醚(GM) 能有效结合 5-HT(1A) 受体并发挥部分激动剂的作用。体外实验中GM的作用在社会隔离小鼠中得到了进一步证实。与YKS和UH类似，GM能够改善隔离引起的攻击性增强和社交性下降，而WAY-100635的联合给药则抵消了这种作用。这些结果表明，UH中的GM是一种有效的5-HT(1A)受体激动剂，可能是YKS改善社会隔离小鼠攻击性和社交性的药理作用的候选成分。[1] 因此，我们筛选了UH中的成分，以确定与5-HT1A受体结合的候选成分。具体而言，我们检测了七种UH衍生的生物碱的体外竞争性结合。结合实验结果表明，只有GM/Geissoschizine methyl ether与5-HT1A受体具有很强的结合力，并且其作用与YKS和UH类似，均为部分激动剂（图6，图7）。这一结果与先前报道的其他体外实验结果相符：一些源自豚鼠的生物碱，例如GM、柯楠碱和二氢柯楠碱，已被证实对豚鼠回肠中的5-HT受体具有部分激动作用，尽管5-HT受体的亚型尚未确定（Kanatani等，1985）。Pengsuparp等（2001）也通过体外结合实验证实GM是5-HT1A受体激动剂。然而，这些体外实验结果尚未在体内得到验证，也无人证实GM在精神疾病模型中的相对重要性。因此，在本研究中，我们进一步评估了GM对攻击性和社交行为的影响。
如图9所示，我们新发现，连续14天给予GM（150和300 μg/kg）可剂量依赖性地改善攻击性和社交性，这与YKS和UH的效果相似（图3，图5）。液相色谱分析表明，YKS提取物中GM的浓度为0.014%，即1.0 g YKS中约含140 μg GM（表1）。因此，150 μg/kg的GM剂量与YKS中的含量几乎相同。这些结果表明，YKS的改善作用主要归因于其UH来源的成分GM。此外，GM给药14天的改善作用可被单次联合使用5-HT1A受体拮抗剂WAY-100635以及YKS和UH所抵消。这些结果也表明，GM对攻击性和社交行为的改善作用至少是通过5-HT1A受体介导的。虽然重复给药可观察到GM以及YKS和UH的改善作用，但单次给药却未观察到这些作用。这些结果提示可能存在神经适应，例如对重复给药的超敏反应或上调。在本研究中，我们使用活性化合物GM（代表YKS、UH和GM）来检验5-HT1A受体在重复给药改善作用中的作用。如图 10 所示，连续 15 天给予 GM 可改善攻击性和社交行为，但与 WAY-100635 联合给药 14 天后，这种改善作用被抵消。该结果表明，重复给予 GM 引起的针对 5-HT1A 受体的神经适应性参与了攻击性和社交行为的改善。此外，如图 11 所示，即使在停止给予 GM 的第二天，仍能观察到连续 14 天给予 GM 的改善作用。因此，这种持续作用（可能归因于神经适应性）是 GM 改善攻击性的主要因素。
已有研究表明，GM 对自发运动（Sakakibara 等，1999）、惊厥（Mimaki 等，1997）和头部抽搐行为（Pengsuparp 等，2001）具有多种抑制作用。然而，这些体内反应是由比YKS中所含剂量高100倍甚至1000倍（几十毫克至几百毫克）的剂量诱导的。本文揭示了YKS中所含的实际剂量GM能够改善社会隔离小鼠的攻击性和社交行为。这是首次发现YKS中的GM能够改善攻击性和社交性。此外，我们最近还证明，口服YKS后，大鼠的血浆和脑组织中均可检测到GM，并且在体外血脑屏障（BBB）实验中也证实GM能够穿过BBB（Imamura等，2011）。这些结果表明，口服YKS中的GM被吸收入血后，通过血脑屏障到达大脑，并且GM对YKS的攻击性和社交行为的影响是中枢作用。
虽然我们需要进一步的研究来证实YKS改善机制的细节，但我们的结果表明YKS可能具有两种不同的作用：对社交性的急性作用和对攻击性和社交性的慢性作用。单次使用测试物质YKS、UH和GM即可改善社交接触缺陷（图2、图4、图8），而改善攻击性则需要长期治疗（图3、图5、图9）。因此，YKS、UH和GM对社交行为的改善作用被认为主要归因于其对5-HT1A受体的直接部分激动作用。两只大鼠之间的嗅闻、跟随和接触等社交行为常被评估为焦虑或抗焦虑作用的指标，因为苯二氮卓类和5-羟色胺（5-HT）相关的抗焦虑药物会增加社交行为，而致焦虑药物则会减少这些行为（File和Seth，2003）。Kuribara和Maruyama（1996）以及Kamei等人（2009）证实了YKS的抗焦虑作用，Jung等人（2006）证实了UH水提取物的抗焦虑作用。因此，我们目前关于社交行为的数据可能表明YKS、UH和GM具有抗焦虑作用。相反，如前所述，对攻击性的长期影响可能被认为是由于针对5-HT1A受体的神经适应所致。此外，未来的研究还需阐明5-HT1A受体与其他受体（例如5-HT2A受体）相互作用诱导神经适应的详细机制。例如，Egashira等人（2008）报道了5-HT2A受体参与YKS的作用：连续14天给予YKS可降低5-HT2A受体激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯丙胺（DOI）诱发的头部抽搐反应，而单次给药则无此效果。因此，重复给予YKS可能导致5-HT2A受体蛋白下调，这可能与YKS对攻击性行为的改善作用密切相关。
尽管YKS改善攻击性行为的分子和神经机制尚待进一步研究，但本研究表明，GM可能是YKS中具有精神活性作用（如改善攻击性和社交性）的候选成分。
结论
YKS及其成分UH显著改善了隔离引起的社交行为减少和攻击性行为增加。对UH中七种生物碱与5-HT1A受体结合的筛选结果显示，GM能够与5-HT1A受体结合并作为部分激动剂发挥作用。此外，GM能够改善YKS和UH的异常行为。另外，与WAY-100635联合给药会减弱GM的作用。这些结果表明，GM可能是YKS改善作用的活性成分，并且主要与5-HT1A受体有关。[1]

C22H26N2O3

366.4534

366.194

60314-89-8

6443046

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

Uncaria sinensis and Uncaria rhynchophylla

3.674

54.56

1

4

4

27

629

2

O(C([H])([H])[H])C(/C(=C(/[H])\OC([H])([H])[H])/[C@]1([H])/C(=C(/[H])\C([H])([H])[H])/C([H])([H])N2C([H])([H])C([H])([H])C3C4=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C4N([H])C=3[C@]2([H])C1([H])[H])=O

VAMJZLUOKJRHOW-XEASWFAXSA-N

InChI=1S/C22H26N2O3/c1-4-14-12-24-10-9-16-15-7-5-6-8-19(15)23-21(16)20(24)11-17(14)18(13-26-2)22(25)27-3/h4-8,13,17,20,23H,9-12H2,1-3H3/b14-4-,18-13-/t17-,20-/m0/s1

methyl (Z)-2-[(2S,3E,12bS)-3-ethylidene-2,4,6,7,12,12b-hexahydro-1H-indolo[2,3-a]quinolizin-2-yl]-3-methoxyprop-2-enoate

Geissoschizine methyl ether; Geissoschizine methyl ether; 60314-89-8; methyl (Z)-2-[(2S,3E,12bS)-3-ethylidene-2,4,6,7,12,12b-hexahydro-1H-indolo[2,3-a]quinolizin-2-yl]-3-methoxyprop-2-enoate; TNN2THT2NX; (Z)-Methyl 2-((2S,12bS,E)-3-ethylidene-1,2,3,4,6,7,12,12b-octahydroindolo[2,3-a]quinolizin-2-yl)-3-methoxyacrylate; methyl (Z)-2-((2S,3E,12bS)-3-ethylidene-2,4,6,7,12,12b-hexahydro-1H-indolo(2,3-a)quinolizin-2-yl)-3-methoxyprop-2-enoate; UNII-TNN2THT2NX; SCHEMBL22615910;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~272.9 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。