| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mitogen-activated protein kinase kinase 3 (MKK3) [1]
Mitogen-activated protein kinase kinase 6 (MKK6) [1] It directly binds to MKK3 and MKK6, inhibiting their kinase activity. Arginine-61 (Arg61) in MKK6 is critical for binding with gossypetin. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
棉苷（20–60 μM；48 小时；KYSE30、KYSE450 和 KYSE510 细胞）治疗可显著且剂量依赖性地抑制食管癌细胞的锚定依赖性生长。棉苷可显著抑制食管癌细胞的非锚定依赖性生长[1]。用 60 μM 棉苷处理 KYSE30 和 KYSE410 细胞 3 小时后，p38 活性显著降低，且呈剂量依赖性，证实棉苷可直接抑制 MKK3 或 MKK6 的活性[1]。棉苷（20–40 μM；48 小时；KYSE450 和 KYSE510 细胞）处理可缩短 S 期，并导致剂量依赖性的 G2 期细胞周期阻滞[1]。用棉酚（20–40 μM；72 小时）处理食管癌细胞可诱导这些细胞发生内在凋亡[1]。
棉酚在处理 48 小时后，以剂量依赖的方式抑制食管鳞状细胞癌 (ESCC) 细胞系 KYSE30、KYSE410、KYSE450 和 KYSE510 的锚定依赖性生长，MTT 法检测证实了这一点。[1] 棉酚在处理 2 周后，显著抑制 KYSE30 和 KYSE510 细胞在软琼脂中的锚定非依赖性生长。 [1]在KYSE30细胞中，用60 μM棉苷处理3小时可显著抑制p38 MAPK的磷酸化，但对AKT、GSK3β、ERK、JNK、HER2、EGFR或JAK1的磷酸化几乎没有影响。[1]在体外激酶活性测定中，棉苷以剂量依赖的方式（0、10、20、40、60 μM）直接抑制MKK3和MKK6的活性，这是通过检测其底物——非活性p38α的磷酸化水平来衡量的。 [1] 使用棉蛋白偶联的Sepharose 4B珠进行的下拉实验证实，棉蛋白可直接与KYSE30细胞裂解液中的MKK3和MKK6以及重组MKK3和MKK6蛋白结合，但不与AKT1、ERK2、p38或EGFR结合。[1] 定点诱变和下拉实验表明，MKK6的R61K突变体与棉蛋白的结合亲和力降低最为显著，表明Arg61是关键的结合残基。 [1] 棉苷处理48小时后，以剂量依赖的方式（0、20、40、60 μM）诱导KYSE30和KYSE510细胞发生G2期细胞周期阻滞，流式细胞术检测结果证实了这一点。[1] 棉苷处理（60 μM，48小时）显著增加KYSE30和KYSE510细胞中CDKN1B (p27)蛋白的表达。[1] 棉苷处理72小时后，以剂量依赖的方式（0、20、40、60 μM）诱导KYSE30和KYSE510细胞凋亡，悬浮细胞数量增加和Annexin V/PI染色增强证实了这一点。 [1] 棉苷处理（60 μM，72 小时）可增加 KYSE30 和 KYSE510 细胞中裂解型 caspase 3、裂解型 caspase 7、BAX 和细胞色素 c 的蛋白水平，同时降低 BCL2 的蛋白水平。[1] 棉苷对细胞生长的抑制作用依赖于 MKK3 和 MKK6 的表达。表达 siMKK3/6 的细胞对棉苷具有抗性，而过表达 MKK3/6 的细胞则更为敏感。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
用棉酚（100 mg/kg；口服；每周 5 次；持续 21 天；重症联合免疫缺陷 (SCID) 雌性小鼠）治疗可显著缩小食管肿瘤体积，且未引起明显的体重下降。棉酚显著降低了 Ki67 的表达。治疗组和未治疗组小鼠组织在形态学上无明显差异。在棉酚治疗组中，MKK3/6 的直接下游蛋白 p38 的磷酸化受到强烈抑制 [1]。在患者来源的食管肿瘤异种移植 (PDX) 小鼠模型中，口服棉酚（100 mg/kg 体重，每周 5 次，持续 21 天）可使食管肿瘤体积较对照组显著减少 60% 以上。 [1]免疫组化结果显示，在PDX模型中，棉苷治疗显著降低了肿瘤组织中Ki67增殖标志物的表达。[1]蛋白质印迹分析表明，棉苷治疗在体内抑制了MKK3/6及其下游靶点p38的磷酸化。[1]
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| 酶活实验 |
MKK3 和 MKK6 的体外激酶活性测定：将活性重组 MKK3 (200 ng) 或 MKK6 (200 ng) 蛋白与不同浓度的棉苷 (0、10、20、40、60 μM) 在缓冲液中混合，室温孵育 15 分钟。然后加入失活的 p38α 重组蛋白、ATP 和缓冲液，30°C 孵育 30 分钟。反应用蛋白上样缓冲液终止，并通过 SDS-PAGE 电泳分离。采用特异性识别磷酸化 p38（T180/Y182 位点）的抗体，通过 Western 印迹法检测 MKK3 或 MKK6 的活性。[1]
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| 细胞实验 |
细胞增殖实验[1]
细胞类型： KYSE30、KYSE450、KYSE510 细胞 测试浓度： 20 μM、40 μM、60 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 贴壁依赖性食管癌细胞的生长受到显著抑制。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： KYSE30 和 KYSE410 细胞 测试浓度： 60 μM 孵育时间： 3 小时 实验结果： p38 活性呈剂量依赖性地受到显著抑制。 细胞周期分析[1] 细胞类型： KYSE450 和 KYSE510 细胞 测试浓度： 20 μM、40 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： S 期缩短，G2 期细胞周期阻滞呈剂量依赖性。 细胞凋亡分析[1] 细胞类型：食管癌细胞 测试浓度：20 μM，40 μM 孵育时间：72 小时 实验结果：诱导食管癌细胞凋亡。 细胞增殖（MTT 法）：将细胞（每孔 1.2-2.5 × 10³ 个）接种于 96 孔板中，孵育 24 小时，然后用不同浓度的棉苷处理细胞（溶于完全培养基中）。48 小时后，加入 MTT 溶液，孵育 2 小时，然后用 DMSO 溶解生成的甲臜晶体。在 570 nm 处测定吸光度。 [1] 锚定非依赖性生长（软琼脂克隆形成实验）：将细胞（每孔 8 × 10³ 个）悬浮于含 0.3% 琼脂和不同浓度棉苷的完全培养基中，铺于含或不含棉苷的 0.6% 琼脂底层上。培养物在 37°C 下维持 2 周。使用 Image-Pro Plus 软件在显微镜下计数菌落。[1] 下拉实验：将棉苷偶联的 Sepharose 4B 珠（或仅 Sepharose 4B 作为对照）与总细胞裂解物（1 mg）或重组蛋白（300 ng）在反应缓冲液中于 4°C 下轻柔摇晃孵育过夜。洗涤珠子，并通过蛋白质印迹法检测结合情况。 [1] 细胞周期分析：将细胞接种于培养板中，经血清饥饿处理24小时使其同步化，然后在含10%血清的培养基中加入棉苷处理48小时。收集细胞，用70%冰乙醇固定，用RNase消化，并用碘化丙啶染色。染色后的细胞通过流式细胞术进行分析。[1] 细胞凋亡检测（Annexin V/PI）：将细胞在含10%血清的培养基中加入棉苷处理72小时。收集细胞，用Annexin V和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。[1] 蛋白质印迹：将总细胞或组织裂解液进行SDS-PAGE电泳分离，然后转移至膜上。用特异性一抗（例如，针对磷酸化蛋白、总信号蛋白和凋亡标志物的抗体）对膜进行探针检测，随后用HRP标记的二抗进行检测。对蛋白条带进行显色和定量分析。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 重症联合免疫缺陷 (SCID) 雌性小鼠（6-9 周龄）食管癌组织注射 [1]
剂量： 100 mg/kg 给药途径： 口服（po，即灌胃）每周 5 次；持续 21 天 实验结果： 在体内小鼠模型中抑制了患者来源的食管异种移植瘤的生长。 患者来源的异种移植 (PDX) 模型：** 使用雌性 SCID 小鼠（6-9 周龄）。将人食管肿瘤标本切成小块，皮下注射到每只小鼠的颈背部。小鼠被分为两组（每组 n=10）：载体组（5% DMSO 和 10% Tween 80）和棉酚治疗组（100 mg/kg 体重）。化合物每周口服给药 5 次。肿瘤体积采用以下公式测量和计算：（长 × 宽 × 高 × 0.52）。监测小鼠直至肿瘤体积达到 1.5 cm³，然后处死小鼠。收集肿瘤、肝脏、肾脏和脾脏进行进一步分析。[1] 患者来源异种移植 (PDX) 模型：使用 6-9 周龄的雌性 SCID 小鼠。将人食管肿瘤标本切成小块，皮下注射到每只小鼠的颈背部。小鼠被分为两组（每组 n=10）：溶剂组（5% DMSO 和 10% Tween 80）和棉苷治疗组（100 mg/kg 体重）。化合物每周口服给药 5 次。肿瘤体积采用以下公式测量和计算：（长 × 宽 × 高 × 0.52）。监测小鼠直至肿瘤体积达到 1.5 cm³，然后处死。收集肿瘤、肝脏、肾脏和脾脏进行进一步分析。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在体内PDX研究中，接受棉苷（100 mg/kg，口服）治疗的小鼠耐受性良好，与载体对照组相比，体重未出现显著下降。[1]
对治疗组小鼠的肝脏、肾脏和脾脏组织进行苏木精-伊红（H&E）染色，结果显示与未治疗组小鼠的组织相比，未观察到明显的形态学差异，表明在测试剂量下未观察到明显的毒性。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
棉酚是一种六羟基黄酮，其羟基位于3、3'、4'、5、7和8位。它是一种植物代谢产物，既是7-羟基黄酮醇，也是六羟基黄酮。它是棉酚-3-醇和棉酚(1-)的共轭酸。据报道，棉酚存在于景天属植物（Sinocrassula indica）、杜鹃花（Rhododendron latoucheae）以及其他具有相关数据的生物体中。另见：报春花（Primula veris）花（局部）；三齿拉瑞阿（Larrea tridentata）全株（局部）。
棉酚是一种天然存在的六羟基黄酮，存在于多种花卉和洛神花（Hibiscus sabdariffa）中。[1] 它具有多种药理活性，包括抗氧化、抗菌和抗癌活性。这是首个报道其在食管癌中具有化学预防作用的研究。[1] 该研究发现棉苷是一种新型的MKK3和MKK6直接抑制剂，能够抑制MKK3/6-p38信号通路。[1] 棉苷通过诱导G2期细胞周期阻滞和内源性凋亡（通过caspase 3/7激活和BAX/细胞色素c上调）来抑制食管癌细胞的生长。[1] 其抗癌功效已在具有临床意义的食管癌患者来源异种移植（PDX）模型中得到验证。[1] |
| 分子式 |
C15H10O8
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|---|---|
| 分子量 |
318.23
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| 精确质量 |
318.038
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| CAS号 |
489-35-0
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| PubChem CID |
5280647
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| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
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| 密度 |
1.912 g/cm3
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| 沸点 |
679.3ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
302-304ºC
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| 闪点 |
260.6ºC
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| 蒸汽压 |
4.49E-19mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.863
|
| LogP |
1.693
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| tPSA |
151.59
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
518
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
YRRAGUMVDQQZIY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H10O8/c16-6-2-1-5(3-7(6)17)14-13(22)12(21)10-8(18)4-9(19)11(20)15(10)23-14/h1-4,16-20,22H
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| 化学名 |
2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7,8-tetrahydroxychromen-4-one
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| 别名 |
Gossypetin C.I. 75750 8 hydroxy Quercetin 8-hydroxy QuercetinArticulatidin Equisporol
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1424 mL | 15.7119 mL | 31.4238 mL | |
| 5 mM | 0.6285 mL | 3.1424 mL | 6.2848 mL | |
| 10 mM | 0.3142 mL | 1.5712 mL | 3.1424 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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