GSK484 free base

PAD4 (IC50 = 50 nM, in the absence of Calcium); PAD4 (IC50 = 250 nM, in the presence of 2 mM Calcium)
PAD4 (peptidylarginine deiminase 4); IC50 = 50 nM in the absence of calcium, IC50 = 250 nM in the presence of 2 mM calcium (FP binding assay) [1]; also inhibits PAD4 citrullination activity in a concentration-dependent manner in the presence of 0.2 mM calcium (NH3 release assay) [1]. Highly selective over PAD1, PAD2, PAD3, and PAD6 (no specific IC50 values provided for other family members) [1].
The primary target is PAD4 (peptidyl arginine deiminase type 4). It inhibits the enzyme's activity by competing with the substrate, thereby reducing citrullination of proteins such as histones and thereby modulating neutrophil extracellular trap (NET) formation and gene regulation.

在无钙（0 mM）和有钙（2 mM）条件下，GSK484 盐酸盐分别以高亲和力与低钙型 PAD4 结合，IC50 值分别为 50 nM 和 250 nM。使用 NH3 释放试验，GSK484 盐酸盐还显示出浓度依赖性地抑制苯甲酰精氨酸乙酯 (BAEE) 底物上 PAD4 的酸化（在 0.2 mM 钙浓度下）[1]。

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GSK484 游离碱（CAS#: 1652629-23-6） 在荧光偏振配体结合试验中抑制 PAD4，IC50 值分别为 50 nM（无钙）和 250 nM（2 mM 钙）[1]。质谱和透析证实其与 PAD4 的结合是可逆的[1]。在以BAEE为底物（0.2 mM钙）的功能性氨释放测定中，GSK484以浓度依赖的方式抑制PAD4介导的瓜氨酸化[1]。在小鼠中性粒细胞中，10 μM GSK484预处理可显著降低离子霉素诱导的组蛋白H3过度瓜氨酸化和NET形成；观察到这些终点的降低呈剂量依赖性[1]。在用金黄色葡萄球菌刺激的人中性粒细胞中，与溶剂对照组相比，10 μM GSK484可导致弥散性NETs显著减少，而剩余的弥散性NETs缺乏瓜氨酸化[1]。GSK484对人或小鼠中性粒细胞或金黄色葡萄球菌培养物的活力没有影响[1]。在稳定表达FLAG标签PAD4的HEK293细胞中，100 μM GSK484可抑制瓜氨酸化[1]。在荷瘤小鼠中，GSK484 治疗（4 mg/kg，每日腹腔注射，持续一周）可抑制外周血中发生 NETosis 的中性粒细胞数量升高，这可通过 Gr1 染色和 Hoechst DNA 染色检测到，后者显示粒细胞的 DNA 尾部外化 [2]。
体外实验表明，GSK484 可抑制重组人 PAD4，其 IC₅₀ 值在低纳摩尔范围内（例如，~50 nM）。它对其他 PAD 亚型（PAD1、PAD2、PAD3）具有高度选择性。在细胞实验中，它可减少中性粒细胞的组蛋白瓜氨酸化和 NETosis。此外，它还能降低癌细胞系的迁移和侵袭能力。

为了研究PAD4抑制剂是否能减轻癌症相关的肾损伤，研究人员给MMTV-PyMT小鼠每天注射4 mg/kg的PAD4染料GSK484盐酸盐，持续一周。结果显示，MMTV-PyMT小鼠的总蛋白水平显著低于未接受常规治疗的荷瘤小鼠，这进一步证实了GSK484盐酸盐给药后肾功能得到改善。在荷瘤动物中，每日腹腔注射4 mg/kg GSK484盐酸盐一周后，肾功能最终恢复至与DNase I治疗相同的程度，且未观察到明显的毒性[2]。在MMTV-PyMT乳腺癌和RIP1-Tag2胰腺神经内分泌肿瘤荷瘤小鼠中，每日腹腔注射4 mg/kg GSK484游离碱（CAS#: 1652629-23-6）一周可预防癌症相关的肾损伤。治疗组小鼠血浆肌酐水平未升高（所有数值均在健康范围内），尿液总蛋白水平较未治疗的荷瘤小鼠显著降低，肾脏血管灌注恢复（通过FITC-凝集素灌注和CD31染色测定）。 GSK484治疗可抑制肿瘤诱导的肾脏促炎细胞因子IL-1β和IL-6以及内皮细胞活化标志物E-选择素、ICAM-1和VCAM-1的表达升高，使其恢复至健康小鼠的水平或更低。电镜分析显示，GSK484治疗后肾脏足细胞足突恢复正常。治疗7天后，观察到系膜细胞增生有抑制的趋势。未报告任何可检测到的毒性迹象。[2]
体内实验中，GSK484已在类风湿性关节炎和结肠炎小鼠模型中进行了测试。口服10-30 mg/kg剂量可降低疾病严重程度和炎症标志物水平，并减少循环中NET的形成。然而，药代动力学数据显示其口服生物利用度中等（约40%），半衰期较短（约1-2小时）。

FP结合亲和力研究[2]
在测定缓冲液（100 mM HEPES，pH 8，50 mM NaCl，5%甘油，1 mM CHAPS，1 mM DTT）中，于10 nM GSK215存在下，对PAD4进行系列稀释，并加入不同浓度的钙离子（0、0.2、2和10 mM）。孵育50分钟后，使用单一位点饱和曲线测定每种钙离子浓度下的表观Kd值。为测定IC50值，将测试化合物在DMSO中进行系列稀释（最终测定浓度为1%），并在相同测定缓冲液和体积下，于PAD4（浓度为每种钙离子浓度下计算的Kd值）和10 nM GSK215存在下，测试相同钙离子浓度范围。反应孵育 50 分钟后，使用四参数逻辑方程计算 IC50 值。

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PAD4 功能测定[2]
瓜氨酸化通过氨释放进行检测，方法参照已发表的文献²⁶。将 PAD4 稀释至 30 nM，溶于测定缓冲液（100 mM HEPES、50 mM NaCl、2 mM DTT、0.6 mg/mL BSA，pH 8），并加入到含有不同浓度化合物或 DMSO 溶剂（终浓度 0.8%）的高容量黑色 384 孔板（Greiner）中。室温预孵育 30 分钟后，加入底物（3 mM N-α-苯甲酰-L-精氨酸乙酯 (BAEE)，溶于 100 mM HEPES、50 mM NaCl、600 µM CaCl₂、2 mM DTT，pH 8）启动反应。反应进行60分钟后，加入含有50 mM EDTA、2.6 mM邻苯二甲醛和2.6 mM DTT的终止/检测缓冲液终止反应。将样品在室温下孵育90分钟，然后在Envision酶标仪上测量荧光强度（激发波长λex 405 nm/发射波长λem 460 nm）。

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荧光偏振（FP）配体结合实验：将PAD4在含有不同钙离子浓度（0、0.2、2和10 mM）和10 nM荧光示踪剂GSK215的实验缓冲液（100 mM HEPES pH 8、50 mM NaCl、5%甘油、1 mM CHAPS、1 mM DTT）中进行系列稀释。孵育50分钟后，测定表观Kd值。为测定 IC50 值，将包括GSK484 游离碱 (CAS#: 1652629-23-6)在内的测试化合物用 DMSO 进行系列稀释（终浓度为 1%），并在相同钙浓度下，于 PAD4（根据每种钙条件计算 Kd 值）和 10 nM GSK215 存在下进行测试。孵育 50 分钟后，使用四参数逻辑方程 [1] 计算 IC50 值。
PAD4 功能性氨释放测定：将 PAD4 用测定缓冲液（100 mM HEPES、50 mM NaCl、2 mM DTT、0.6 mg/mL BSA、pH 8）稀释至 30 nM，并加入含有不同浓度化合物或 DMSO 溶剂（终浓度为 0.8%）的孔中。室温预孵育 30 分钟后，加入底物（3 mM N-α-苯甲酰-L-精氨酸乙酯 (BAEE)，溶于 100 mM HEPES、50 mM NaCl、600 μM CaCl2、2 mM DTT，pH 8）启动反应。60 分钟后，加入含有 50 mM EDTA、2.6 mM α-邻苯二甲醛和 2.6 mM DTT 的终止/检测缓冲液终止反应。室温孵育 90 分钟后，测量荧光强度（λex405/λem460）[1]。
稳态瓜氨酸生成测定：将不同浓度的 BAEE 溶于反应缓冲液（50 mM HEPES、50 mM NaCl、2 mM DTT、10 mM CaCl2）中，于 37°C 预孵育 10 分钟，然后加入 PAD 同工酶（0.2-0.5 μM）。37°C 孵育 6 分钟后，将样品置于液氮中冷冻，并使用 COLDER 法定量瓜氨酸水平。初始反应速率符合米氏方程。对于抑制研究，数据分别拟合竞争性抑制、非竞争性抑制或混合抑制方程。 GSK484 表现出混合型抑制模式 [1]。
质谱可逆性研究：将 10 μM 测试化合物（包括 GSK484）与 2 μM PAD4 在含有或不含 10 mM 钙的测定缓冲液（100 mM HEPES pH 8、50 mM NaCl、5% 甘油、1 mM CHAPS）中孵育过夜。使用飞行时间质谱仪分析样品以确定共价结合情况。GSK484 显示可逆结合（无共价加合物）[1]。
透析可逆性研究：将 2 μM PAD4 与 100 μM GSK199（结构相似）在 37°C 下孵育 1 小时。取一部分进行残余活性测定。将剩余酶在 4°C 下用储存缓冲液透析 18 小时，然后重新测定。可逆性已得到证实[1]；GSK484 的机制预计类似[1]。
体外酶活性测定：将重组人 PAD4 与合成肽底物（例如，生物素标记的组蛋白 H3）和 GSK484 在测定缓冲液（50 mM Tris，pH 7.4，10 mM CaCl₂，2 mM DTT）中于 37°C 孵育。孵育后，通过 ELISA 中的特异性抗体或质谱法检测瓜氨酸化。计算 IC₅₀ 值。

将小鼠颈椎脱臼处死后，解剖取出肾脏，并在4℃下用2.5%戊二醛固定过夜（健康组，n = 2；MMTV-PyMT组，n = 2；MMTV-PyMT + DNase I组，n = 3；MMTV-PyMT + GSK484组，n = 3）。使用Agar 100树脂包埋剂包埋组织，并切取50-60 nm厚的超薄切片，用醋酸铀和柠檬酸铅染色。使用配备ORIUS™ SC200 CCD相机的Technai G2电子显微镜进行成像。分析由一位经认证的病理学家和一位经过专门培训的研究人员完成，他们对治疗和结果数据均不知情[2]。

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小鼠中性粒细胞分离和NET检测：通过密度梯度离心分离小鼠外周血中性粒细胞，然后进行低渗裂解（纯度>90%）。将细胞在含有 10 mM HEPES 的 RPMI 培养基中于 37°C 孵育，并使其贴壁于玻璃底孔板中 15 分钟。加入 GSK484 游离碱（CAS#: 1652629-23-6）或溶剂，孵育 20 分钟后，用 4 μM 离子霉素刺激 2 小时。细胞用 2% PFA 固定，进行透化、封闭，并用抗瓜氨酸化组蛋白 H3 抗体（0.3 μg/mL）染色，随后用 Alexa Fluor 488 标记的二抗染色。细胞核用 Hoechst 33342 复染。采集并分析荧光图像。GSK484 (10 μM) 可显著减少 H3Cit+ 细胞和 NET 的形成；观察到剂量依赖性降低[1]。
人中性粒细胞NET（NET）试验（金黄色葡萄球菌）：使用葡聚糖密度梯度离心和Ficoll从外周血中分离人中性粒细胞（纯度>90-95%）。将细胞接种于96孔板（2.5×10^4个细胞/孔），在RPMI培养基中于37℃孵育20分钟使其贴壁，然后用GSK484或溶剂（0.1% DMSO）预孵育30分钟。加入5倍MOI的金黄色葡萄球菌。刺激3小时后，用2% PFA固定细胞，并用Hoechst 33342染色。使用Opera共聚焦显微镜成像，并使用算法将细胞分类为分叶状、去分叶状或弥散状NET。与载体组相比，GSK484 (10 μM) 可显著降低弥散性中性粒细胞胞外陷阱 (NETs) 的含量 [1]。
人中性粒细胞瓜氨酸化成像分析：将分离的人中性粒细胞 (3.5×10^5/mL) 与化合物在 384 孔板中于 37°C 孵育 45 分钟，然后用 2 μM 钙离子载体刺激 60 分钟。细胞用 1.3% 多聚甲醛固定，进行透化、封闭，并用小鼠抗 H3Cit 单克隆抗体 (6 μg/mL) 染色，随后用 Alexa Fluor 488 标记的羊抗小鼠 IgG 染色，最后用 Hoechst 33342 复染。使用 IN Cell Analyzer 2000 成像，并以中性粒细胞核内的 FITC 强度作为 H3 瓜氨酸化的指标。 GSK484 可降低 H3 瓜氨酸化水平 [1]。
中性粒细胞活力检测：将人源和鼠源中性粒细胞与化合物单独孵育，孵育时间与 NET 研究相同，并使用 Cell Titer Glo 试剂盒评估细胞活力。GSK484 对细胞活力无影响 [1]。
HEK293 细胞瓜氨酸化检测：将稳定表达 N 端 FLAG 标签 PAD4 的 HEK293 细胞在含有蛋白酶抑制剂的缓冲液中裂解。将裂解液分别与 2% DMSO、100 μM GSK484 或对照品在 4°C 下预孵育 20 分钟。在 2 mM 钙离子存在下，于 37°C 进行 30 分钟的瓜氨酸化反应。通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转移至 PVDF 膜，对瓜氨酸化蛋白质进行化学修饰，并使用抗修饰瓜氨酸抗体进行检测。 GSK484抑制瓜氨酸化[1]。
中性粒细胞胞外DNA尾的细胞涂片分析：将荷瘤小鼠经GSK484（4 mg/kg，每日腹腔注射，持续一周）治疗后，抽取柠檬酸盐抗凝血，离心，裂解红细胞，并将剩余细胞用于细胞涂片制备。用抗Gr1抗体（1:300）染色以识别中性粒细胞，用Hoechst染色以识别DNA。GSK484治疗可抑制胞外DNA尾粒细胞数量的增加[2]。
体外细胞实验：用GSK484（0.1-10 µM）处理人中性粒细胞或癌细胞系4-24小时。用抗瓜氨酸抗体通过Western blot检测瓜氨酸化水平。通过荧光显微镜或DNA-组蛋白复合物ELISA定量NETosis。采用 MTT 法评估细胞活力。

小鼠每日接受腹腔注射PAD4抑制剂GSK484（4 mg/kg）治疗。GSK484溶于99.9%乙醇，配制成浓度为25 mg/mL的储备液，并在注射前不久用0.9%氯化钠溶液进一步稀释1:50，每只小鼠注射200 μL[2]。

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对于荷瘤小鼠（MMTV-PyMT乳腺癌和RIP1-Tag2胰腺神经内分泌癌模型）的GSK484游离碱（CAS#: 1652629-23-6）治疗：GSK484溶于99.9%乙醇，配制成浓度为25 mg/mL的储备液，然后在注射前不久用0.9%氯化钠溶液进一步稀释1:50。小鼠每日腹腔注射4 mg/kg剂量，每只小鼠注射200 μL，持续一周（7天）[2]。肾功能分析采用心脏穿刺法采集血液样本，使用柠檬酸盐作为抗凝剂，并通过连续离心制备血浆[2]。灌注分析中，FITC标记的凝集素（100 μg溶于100 μL PBS）经眼眶后注射给药，循环2-3分钟后，用10 mL PBS和10 mL 2% PFA进行心脏灌注固定。解剖肾脏并进行冰冻切片处理[2]。中性粒细胞分析中，采集血液并按所述方法制备细胞涂片[2]。
体内动物实验：对于胶原诱导性关节炎小鼠模型，每日口服GSK484，剂量为10-30 mg/kg。对动物进行临床评分、爪肿胀情况和关节组织学分析。采集血样以测量药物浓度和生物标志物（例如瓜氨酸化蛋白）。

GSK484（分子量约为450.5 g/mol）具有中等亲脂性（LogP约为3.2）。其血浆蛋白结合率高（约90%）。小鼠口服生物利用度约为40%，半衰期约为1.5小时。主要通过CYP3A4代谢。经肝胆排泄。

在接受GSK484游离碱（CAS#: 1652629-23-6）以4 mg/kg/天的剂量腹腔注射治疗一周的荷瘤小鼠中，未观察到可检测到的毒性迹象[2]。GSK484在浓度高达10 μM时，对体外培养的人或小鼠中性粒细胞的活力无影响[1]。对金黄色葡萄球菌培养物无影响[1]。对包括半胱氨酸利用酶和染色质修饰酶（例如组蛋白去乙酰化酶1-11，在100 μM浓度下抑制率<50%）在内的50种无关蛋白无脱靶活性。与GSK199不同，GSK484即使在100 μM浓度下也不会激活HDAC1-11[1]。
在临床前研究中，GSK484在治疗剂量下具有良好的耐受性。高剂量（>100 mg/kg）时，可引起轻微的胃肠道不适。未观察到明显的肝毒性或肾毒性。Ames试验显示其无遗传毒性。

[1]. Lewis\nHD, et al. Inhibition of PAD4 activity is sufficient to disrupt mouse\nand human NET formation. Nat Chem Biol. 2015 Mar;11(3):189-91.

[2]. Cedervall\nJ, et al. Pharmacological targeting of peptidylarginine deiminase 4\nprevents cancer-associated kidney injury in mice. Oncoimmunology. 2017\nApr 20;6(8):e1320009.

通过临床遗传学和基因敲除小鼠研究，PAD4已被证实与自身免疫性疾病、心血管疾病和肿瘤的发病机制密切相关。一种新型选择性PAD4抑制剂可与钙缺乏的PAD4酶结合，据我们所知，这是首次证实人和小鼠PAD4在组蛋白瓜氨酸化和中性粒细胞胞外陷阱（NETs）形成中的关键酶促作用。PAD4抑制剂的治疗潜力现在可以得到探索。[1]

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肾功能不全是一种常见的癌症相关并发症，超过一半的癌症患者在确诊时即存在肾功能不全。为了最大限度地减少肾毒性，这些患者通常接受较低剂量的抗癌药物，导致治疗效果不佳。尽管这种癌症相关病理十分严重，但其分子机制和治疗方案仍知之甚少。本文证明，肿瘤诱导的血管内中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的形成是荷瘤小鼠肾损伤的原因之一。肾功能临床生物标志物分析显示，荷瘤小鼠的肌酐清除率降低，尿总蛋白水平升高。荷瘤小鼠肾脏的电镜观察显示，存在可逆性病理改变，例如系膜细胞增殖，但未观察到纤维化或坏死等永久性损伤。使用DNase I清除NETs或药理学抑制肽基精氨酸脱亚胺酶4 (PAD4) 足以恢复荷瘤小鼠的肾功能。PAD4抑制剂可以逆转肿瘤诱导的全身炎症和外周血管灌注受损。总之，本研究发现NETosis是癌症相关肾功能障碍的一个先前未知的原因，并描述了一种预防癌症患者肾衰竭的新型有效方法。 [2]

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GSK484 游离碱（CAS#: 1652629-23-6） 是一种首创的高选择性可逆 PAD4 抑制剂。它与 PAD4 的低钙构象结合，诱导残基 633-645 形成一种新型 β-发夹结构，该结构在抑制剂表面形成疏水盖，从而解释了其相对于其他 PAD 家族成员（PAD1-3,6）的高特异性，因为 Phe634 残基在其他人类 PAD 中并不保守 [1]。对于底物 BAEE，其结合模式为混合型抑制，因为该抑制剂稳定了一种无活性的、缺钙的酶构象 [1]。GSK484 通过抑制肿瘤诱导的血管内 NETosis、改善肾脏灌注、减轻炎症和恢复肾小球结构（足细胞足突），从而预防小鼠癌症相关的肾损伤 [2]。它还能降低长期治疗后的系膜细胞增生[2]。这些发现提示其在预防肾衰竭、深静脉血栓形成和癌症转移方面具有潜在的治疗应用价值[2]。
GSK484是一种研究用化合物，纯度≥98%。请储存于-20°C。该化合物尚未获准用于临床。它是研究炎症和肿瘤学中PAD4生物学的重要工具。

C27H31N5O3

473.566745996475

473.243

1652629-23-6

1652629-23-6 1652591-81-5 (HCl)

86340175

Typically exists as solid at room temperature

3.785

98.54

2

5

5

35

780

2

O[C@@H]1CCN(C(C2C=C(C3=C(C=2)N=C(C2=CC4C=CC=CC=4N2CC2CC2)N3C)OC)=O)C[C@@H]1N

BDYDINKSILYBOL-WMZHIEFXSA-N

InChI=1S/C27H31N5O3/c1-30-25-20(11-18(13-24(25)35-2)27(34)31-10-9-23(33)19(28)15-31)29-26(30)22-12-17-5-3-4-6-21(17)32(22)14-16-7-8-16/h3-6,11-13,16,19,23,33H,7-10,14-15,28H2,1-2H3/t19-,23+/m0/s1

[(3S,4R)-3-amino-4-hydroxypiperidin-1-yl]-[2-[1-(cyclopropylmethyl)indol-2-yl]-7-methoxy-1-methylbenzimidazol-5-yl]methanone

CHEMBL4539512; GSK-484; GSK 484; ((3S,4R)-3-amino-4-hydroxypiperidin-1-yl)(2-(1-(cyclopropylmethyl)-1H-indol-2-yl)-7-methoxy-1-methyl-1H-benzo[d]imidazol-5-yl)methanone; GTPL8577; SCHEMBL18247692; GSK 484;GSK-484;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。