GSK-699

PCAF/GCN5 (minimum concentration required to induce nearly complete PCAF degradation: 100 nM)
KAT2A (also known as GCN5) and its paralogue KAT2B (PCAF). [2]
The molecular targets of GSK-699 are the PCAF and GCN5 proteins. These closely related epigenetic regulators each contain an acetyltransferase domain and a bromodomain, serving as core components of the SAGA transcriptional coactivator complex. GSK-699 induces K48-linked polyubiquitination by bringing PCAF/GCN5 into proximity with the E3 ubiquitin ligase CRBN, leading to proteasomal degradation of the target proteins. Studies confirm that GSK-699 also degrades KAT2A and KAT2B (alternative names for PCAF and GCN5, respectively), modulates the histone acetyltransferase activity of the SAGA complex, and reduces histone H3K9ac levels.

GSK699诱导巨噬细胞和DC中PCAF蛋白水平的强烈下调（超过90%）（支持信息图2c和d）。LPS刺激细胞上清液中细胞因子水平的多重分析显示，用100 nM的GSK699处理后，巨噬细胞和树突状细胞中IL-6、IL-12p70、IL-10、IL-1β和IFN-γ的产生显著减少（诱导几乎完全PCAF降解所需的最小浓度；图2e、f和支持信息图2c和d）。与对照细胞相比，GSK699处理的DC中TNF和IL-8也受到了显著抑制，而这两种细胞因子在巨噬细胞中没有变化（图2e和2f）。尽管对照化合物GSK702对DC没有抑制作用，但它确实导致巨噬细胞中IL-1β的小幅但显著的减少，这可能是由于这种细胞类型中PCAF/GCN5的降解较弱，或者CRBN结合部分对观察到的抗炎表型的轻微贡献（图2e）。总之，这些结果表明，与PCAF/GCN5溴结构域抑制不同，PROTAC介导的这些蛋白质的降解显著损害了巨噬细胞和树突状细胞对LPS的反应能力，从而减少了许多炎性细胞因子的产生
鉴于PROTAC诱导的DCs中PCAF/GCN5降解的深远影响，我们开始在上述相同的实验条件下，通过使用细胞因子和趋化因子蛋白阵列评估GSK699对更广泛的炎症分子表达的影响，进一步探索GSK699在这种细胞类型中的生物学潜力。结果证实了GSK699治疗对IL-6、TNF和IL-12p70的抑制作用，并表明GSK699处理的细胞中许多其他炎症介质的产生减少，包括CXCL1/GROα、CXCL11/I-TAC、CCL7、CCL20/MIP-3α和CCL19/MIP-3β（图3a和支持信息表1）[1]。

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- 在表达 KAT2A-BFP-P2A-mCherry 稳定性报告基因的野生型 HAP1 Cas9 细胞中，使用 100 nM GSK-699 处理 6 小时，KAT2A-BFP 信号显著降低（平均荧光强度从 DMSO 对照组的 1.0 ± 0.007 降至 GSK-699 处理组的 0.28 ± 0.015，平均值 ± 标准差），而 mCherry 荧光无变化，证实了 GSK-699 特异性降解 KAT2A。[2]
- 在同样表达 KAT2A 稳定性报告基因的 MOLM-13（急性髓系白血病）和 NALM6（急性淋巴细胞白血病）细胞中，GSK-699 处理（100 nM，6 小时）也显著降低了 KAT2A-BFP 水平，且 mCherry 水平不变。[2]
- 在免疫荧光实验中，用 GSK-699（100 nM，6 小时）处理野生型 HAP1 Cas9 细胞后，细胞核内 KAT2A 荧光强度降低至与 KAT2A 基因敲除相当的水平。[2]

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在体外，GSK-699在巨噬细胞和树突状细胞中可诱导PCAF蛋白水平的强烈下调（降解率超过90%）。100 nM浓度即可基本实现PCAF的完全降解。在LPS刺激的细胞中，GSK-699处理显著减少了炎症细胞因子的产生，包括IL-6、IL-12p70、IL-10、IL-1β、IFN-γ、TNF和IL-8。细胞因子/趋化因子蛋白阵列分析进一步证实，GSK-699还能抑制CXCL1/GROα、CXCL11/I-TAC、CCL7、CCL20/MIP-3α和CCL19/MIP-3β等多种炎症介质的表达。此外，GSK-699可抑制神经母细胞瘤、急性髓系白血病和小细胞肺癌细胞的生长。在神经母细胞瘤细胞系中，100 nM GSK-699处理72小时可显著抑制细胞增殖，并降低EdU掺入率。

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- 在三种 MYCN 扩增型神经母细胞瘤细胞系（KELLY、NB1、NGP）中，使用 GSK-699-1（而非无活性对映异构体 GSK-699-2）处理后，KAT2A 和 KAT2B 表达均缺失，随后 H3K9ac 水平降低，表明 SAGA KAT 活性丧失。同时观察到 MYCN 蛋白表达下降。[3]
- GSK-699-1 具有低纳摩尔级别的有效活性（具体数值未提供，见补充图 S7A 和 S7B）。[3]
- 在 KELLY、NB1 和 NGP 细胞中，GSK-699-1 在长期处理后显著降低了神经母细胞瘤的生长。[3]
- 在三种非 MYCN 扩增型细胞系中，GSK-699-1 处理显示出异质性反应；敏感性显著降低的细胞系中 MYC 表达明显下降。[3]
- GSK-699-1 在 MYCN 扩增型模型中引起的生长抑制主要通过 G1-G0 期细胞周期阻滞实现（通过 EdU 和碘化丙啶掺入实验评估）。[3]
- 在 KELLY 细胞中，使用 100 nM GSK-699-1 处理 6、24 或 72 小时后，RNA-seq 显示基因表达发生时间依赖性的改变。[3]
- 在 KELLY 细胞中使用 100 nM GSK-699-1 处理 6 小时后，ChIP-seq 显示全基因组范围内及 TADA2B 结合位点处的 H3K9ac 沉积减少，同时全基因组范围内的 MYCN 结合也减少。[3]

在体内，GSK-699在神经母细胞瘤异种移植模型中显示出抗肿瘤活性。在KELLY细胞皮下移植的裸鼠模型中，每日腹腔注射GSK-699（50 mg/kg）可在18天内显著抑制肿瘤生长。治疗组小鼠的肿瘤体积均明显小于溶剂对照组。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，GSK-699治疗组的总生存期显著延长。药效动力学研究表明，在5天的GSK-699治疗后（5、10、50或100 mg/kg，每日腹腔注射），KELLY异种移植瘤中KAT2A、KAT2B、MYCN和H3K9ac的表达呈剂量依赖性降低。这些结果证实了GSK-699在体内能够有效降解靶蛋白并发挥抗肿瘤作用。[3]

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- KELLY 异种移植模型中的剂量探索研究： 荷瘤 NSG 小鼠接受 GSK-699-1 腹腔注射，剂量分别为 5、10、50 或 100 mg/kg，每日一次，连续 4 天。在所有剂量下，最后一次给药后 6 小时肿瘤组织中均观察到持续的 KAT2A/KAT2B 降解，同时伴有 MYCN 蛋白表达降低和 H3K9ac 水平下降（与溶剂对照组相比降低约 50%）。基于充分的降解效果、无不良事件和良好的溶解性，选择 50 mg/kg 剂量进行药效研究。[3]
- KELLY 异种移植模型中的药效研究： 荷瘤 NSG 小鼠随机分为溶剂对照组和 GSK-699-1 治疗组（50 mg/kg，每日一次腹腔注射，持续 21 天）。GSK-699-1 治疗显著延缓了肿瘤进展（第 16 天 P = 0.01，第 18 天 P = 0.07，双侧 Student’s t 检验），并提高了终点生存率（log-rank Mantel-Cox 检验，P = 0.0134）。通过小鼠体重评估，治疗耐受性良好。治疗组在肿瘤终点时仍维持 KAT2A/KAT2B 表达降低的状态。[3]

GSK-699作为PROTAC分子，其作用依赖于细胞内完整的泛素-蛋白酶体系统，因此在无细胞体系中的直接结合实验较少。若需评估化合物与CRBN或PCAF/GCN5的结合亲和力，可采用以下流程：将GSK-699溶解于DMSO制备储存液（如10 mM）。在96孔板中，用结合缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.1% BSA, 0.01% Tween-20）稀释药物至所需浓度（如0.1-1000 nM）。与重组CRBN-DDB1复合物或重组GST标记的PCAF/GCN5蛋白在室温下孵育30-60分钟。通过荧光偏振（FP）或表面等离子体共振（SPR）技术检测结合亲和力（Kd值）。注意：PROTAC的双功能特性可能导致其与两个靶标（靶蛋白和E3连接酶）的亲和力低于传统抑制剂。

将Western Blot Cell颗粒重新悬浮在含有蛋白酶抑制剂和0.1%苯并酶的Pierce RIPA缓冲液中，并在冰上孵育30分钟。试管在4°C下以16000 rcf离心15分钟，上清液转移到新试管中。总蛋白浓度通过Pierce BCA蛋白检测试剂盒测定。将30µg总蛋白装载在4-12%NuPAGE凝胶上，并转移到Odyssey硝化纤维膜上。12个膜用奥德赛阻断缓冲液阻断1小时，然后与指定的一抗孵育过夜。用适当的IRDye二抗孵育后，使用Odyssey扫描仪对条带进行可视化。使用Image Studio Lite v5.2软件对条带的强度进行量化[1]。

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- HAP1 细胞稳定性报告基因实验： 表达 KAT2A-BFP-P2A-mCherry 报告基因的野生型 HAP1 Cas9 细胞用 100 nM GSK-699 处理 6 小时。随后通过流式细胞术分析细胞，测量 BFP 和 mCherry 的平均荧光强度，计算 KAT2A-BFP/mCherry 比值以确定 KAT2A 相对丰度。DMSO 处理作为对照。与 DMSO 相比，GSK-699 处理导致 KAT2A-BFP 信号降低超过 70%。[2]
- 白血病细胞稳定性报告基因实验： 稳定表达 Cas9 和 KAT2A-BFP-P2A-mCherry 报告基因的 MOLM-13 和 NALM6 细胞用 100 nM GSK-699 处理 6 小时。通过流式细胞术测量 eGFP 阳性细胞中的 BFP 和 mCherry 荧光。GSK-699 处理显著降低了 KAT2A-BFP 水平，而未改变 mCherry 水平。[2]
- 免疫荧光实验： 野生型 HAP1 Cas9 细胞用 100 nM GSK-699 处理 6 小时，随后固定并染色 KAT2A 和 DNA。通过共聚焦显微镜定量细胞核内 KAT2A 荧光强度。GSK-699 处理将核内 KAT2A 荧光降低至与 KAT2A 基因敲除相当的水平，证明了实验的敏感性。[2]

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GSK-699的体外细胞实验流程（以PCAF/GCN5降解评估为例）：1）将细胞（如THP-1单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞）接种于6孔板（每孔5×10⁵-1×10⁶个细胞），在37°C、5% CO₂条件下培养过夜。2）用完全培养基配制GSK-699梯度浓度（如10、30、100、300、1000 nM）。3）更换含药培养基，处理细胞4-24小时（最佳时间通常为4-6小时）。4）收集细胞，裂解后提取总蛋白。5）通过Western blot检测PCAF或GCN5的蛋白水平，以GAPDH或Histone H3作为内参对照。计算降解DC50（导致50%蛋白降解所需的药物浓度）。6）或在处理后72小时通过CCK-8法检测细胞活力，或在处理后24-48小时通过流式细胞术检测凋亡率。

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- Western blot 检测蛋白表达： 神经母细胞瘤细胞系（KELLY、NB1、NGP）用溶剂、GSK-699-1 或无活性对映异构体 GSK-699-2 处理 24 小时。细胞在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液中裂解。BCA 法对裂解物进行定量，归一化后通过 SDS-PAGE 分离，转印至 PVDF 膜，使用抗 KAT2A、KAT2B、MYCN、H3K9ac、H3K27ac、GAPDH（上样对照）和组蛋白 H3（上样对照）的抗体进行孵育。使用二抗孵育后成像。GSK-699-1 处理导致 KAT2A、KAT2B 和 MYCN 表达缺失，并降低 H3K9ac 水平。[3]
- 细胞活力实验（长期处理）： 神经母细胞瘤细胞系用 DMSO、100 nM GSK-699-1 或 100 nM GSK-699-2 处理长达 8 天，计算与第 0 天相比的相对活力。GSK-699-1 在长期处理后显著降低了神经母细胞瘤的生长。[3]
- 细胞周期分析（EdU 和碘化丙啶掺入）： 神经母细胞瘤细胞接种后，用 DMSO 或 100 nM GSK-699-1 处理 72 小时。细胞与 10 µM EdU 孵育 90 分钟。收集细胞后，固定、染色，并进行 RNase A 消化和 PI 染色。通过流式细胞术分析样本。GSK-699-1 处理导致 G1-G0 期细胞周期阻滞。[3]
- RNA 测序： KELLY 细胞用 DMSO 或 100 nM GSK-699-1 处理 6、24 或 72 小时（生物学三重复）。收集总 RNA，匀浆并纯化。进行 RNA 文库制备和转录组测序。分析差异表达基因（DESeq2 校正后 P ≤ 0.10，|倍数变化| ≥ 1.5）。GSEA 显示，在所有时间点，下调基因富集了 MYC、E2F/细胞周期和 MYCN 相关基因特征。[3]
- 染色质免疫共沉淀测序： KELLY 细胞用 DMSO 或 100 nM GSK-699-1 处理 6 小时。细胞用甲醛交联、裂解，并剪切染色质。使用抗 H3K9ac、H3K27ac 或 MYCN 的抗体进行染色质免疫共沉淀，并加入 spike-in 染色质用于归一化。纯化 DNA，制备文库进行测序。GSK-699-1 处理减少了全基因组范围内的 H3K9ac 和 H3K27ac 沉积，并降低了染色质上 MYCN 的结合。[3]

将9只不同的C57BL/6野生型（WT）或PCAF-/-1小鼠的前肢和后肢收集于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并置于培养皿中。取出足部，切开膝关节。用手术刀切除骨骼末端，并用装有PBS的注射器冲洗骨髓。将细胞通过70 µm尼龙细胞筛过滤并计数。将细胞以 0.5 x 10⁶ 个细胞/mL 的密度重悬于含 10% 胎牛血清 (FBS)、100 单位/mL 青霉素、100 µg/mL 链霉素、2 mM L-谷氨酰胺、1X 非必需氨基酸、50 µM β-巯基乙醇和 1 mM 丙酮酸钠的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中，并补充 5 ng/mL 小鼠 M-CSF 和 5 ng/mL 小鼠 IL-3。将 10 mL 细胞悬液接种于培养皿中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养 24 小时。次日，将细胞悬液转移至新的培养皿中以去除污染的成纤维细胞，并继续培养 6 天。分化后，用含5 mM EDTA和2%牛血清白蛋白的PBS缓冲液消化巨噬细胞15分钟，然后以2×10⁵个细胞/200 µl/孔的密度接种于96孔板中，每只小鼠3孔。用10 ng/mL大肠杆菌LPS（0111:B4）刺激细胞6小时后，将培养板以400 rcf离心10分钟，将上清液转移至新的96孔板中，并于-80°C保存直至分析。为了检测PCAF/GCN5溴结构域抑制剂GSK4027对小鼠巨噬细胞的抑制作用，按照上述方法从6只不同的C57BL/10未免疫小鼠的腿部提取骨髓细胞，并在化合物存在下诱导分化为巨噬细胞。分化期结束后，将巨噬细胞接种于96孔板中，每个化合物浓度设置7个孔。将孔板在37℃、5% CO2条件下孵育过夜，然后用100 ng/mL大肠杆菌LPS刺激6小时。将孔板以400 rcf离心10分钟，并将上清液转移至新的孔板中进行MSD分析。[1]

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GSK-699的体内动物实验流程（以异种移植瘤模型为例）：1）选用4-5周龄雌性裸鼠，在右侧腋窝皮下接种肿瘤细胞（如KELLY神经母细胞瘤细胞，5×10⁶个细胞/只）。2）当肿瘤体积达到约150-200 mm³时，将动物随机分为治疗组和对照组（每组8-10只）。3）GSK-699配制：溶于含10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45%生理盐水的溶剂中。4）治疗组通过腹腔注射给药（常用剂量：10、50或100 mg/kg，每日一次）。5）对照组给予等体积溶剂对照。6）每周测量2-3次肿瘤体积（长×宽²/2）和动物体重，每日观察动物一般状态。7）治疗结束时（通常第18-21天）处死动物，收集肿瘤组织进行Western blot分析靶蛋白降解情况，并取主要脏器进行组织病理学检查。8）绘制肿瘤生长曲线和Kaplan-Meier生存曲线。

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- GSK-699-1 剂量探索研究： 将 KELLY 细胞（3 × 10⁶）皮下注射到 NSG 小鼠中。当肿瘤达到约 50-100 mm³ 时，将小鼠随机分组，接受 GSK-699-1（5、10、50 或 100 mg/kg）或溶剂对照治疗，通过腹腔注射每日一次给药。GSK-699-1 粉末用 10% DMSO 的无菌磷酸盐缓冲液重悬。小鼠连续治疗 4 天，末次给药后 6 小时处死，进行下游分析（Western blot）。[3]
- GSK-699-1 药效研究： 将 KELLY 细胞（3 × 10⁶）皮下注射到 NSG 小鼠中。当肿瘤达到约 50-100 mm³ 时，将小鼠随机分为溶剂对照组（n=9）和 GSK-699-1 治疗组（50 mg/kg 每日一次腹腔注射，n=9）。治疗持续 21 天。每周用数字卡尺测量三次肿瘤大小，每周测量三次小鼠体重。实验终点定义为任一方向肿瘤直径 ≥20 mm、最大肿瘤负荷约 1800 mm³，或小鼠出现不健康状态。绘制 Kaplan-Meier 生存曲线，采用 log-rank (Mantel-Cox) 检验确定显著性。[3]

作为PROTAC分子，GSK-699的分子量较大（895.84 Da），这通常会限制其口服生物利用度和细胞膜穿透性。其预测的logP值为4.7，表明具有中等脂溶性。拓扑极性表面积（tPSA）为164 Ų，高于传统小分子药物的理想范围，这可能影响其通过被动扩散的细胞穿透效率。体内研究采用腹腔注射给药途径（50 mg/kg，每日一次），这表明GSK-699可能通过注射途径获得足够的系统暴露量。PROTAC分子通常具有较长的作用持续时间，因为其降解靶蛋白后可以循环发挥作用，但具体半衰期和清除途径尚需进一步研究确定。

在体内神经母细胞瘤模型中，每日腹腔注射50 mg/kg GSK-699连续治疗18天，未报告显著的治疗相关死亡或严重的全身毒性。但需注意，由于GSK-699降解PCAF/GCN5这些广泛表达的表观遗传调节因子，长期使用可能存在潜在毒性风险。已知CRBN调节剂（如来那度胺类化合物）与血栓栓塞事件和胚胎-胎儿毒性相关，因此GSK-699可能具有类似的潜在风险。该化合物仅供科研使用，不得用于人体或兽医用途。所有涉及GSK-699的实验应在适当的生物安全柜中进行，并遵守标准化学安全操作规程。

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- 在剂量探索研究中，GSK-699-1 在高达 100 mg/kg（每日一次腹腔注射，连续 4 天）的剂量下未观察到不良事件。50 mg/kg 剂量被描述为无不良事件且溶解性良好。[3]
- 在药效研究（50 mg/kg 每日一次腹腔注射，连续 21 天）中，通过小鼠体重评估，治疗耐受性良好（未观察到显著体重下降）。[3]

[1]. Modulating PCAF/GCN5 Immune Cell Function through a PROTAC Approach. ACS Chem Biol. 2018 Oct 19;13(10):2862-2867.

[2]. Disruption of the SAGA CORE triggers collateral degradation of KAT2A. Nat Commun. 2026 Apr 20;17(1):3410.

[3]. The KAT module of the SAGA complex maintains the oncogenic gene expression program in MYCN-amplified neuroblastoma. Sci Adv. 2024 May 31;10(22):eadm9449.

P300/CBP相关因子（PCAF）和一般控制非抑制性5（GCN5）是密切相关的表观遗传蛋白，它们均包含一个乙酰转移酶结构域和一个溴结构域。与已报道的这些蛋白在免疫功能中的作用一致，我们发现PCAF缺陷型巨噬细胞在脂多糖（LPS）刺激下产生细胞因子的能力显著降低。为了研究靶向该通路进行药物治疗的可能性，我们发现化学抑制PCAF/GCN5溴结构域不足以重现PCAF缺陷型免疫细胞炎症反应的减弱。然而，通过构建首个PCAF/GCN5蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC），我们鉴定出能够降解PCAF/GCN5并有效调节LPS刺激的巨噬细胞和树突状细胞中多种炎症介质表达的小分子。我们的数据表明 PROTAC 方法在多结构域蛋白中的强大作用，揭示了一种针对 PCAF/GCN5 的新型抗炎治疗机会。[1]

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- GSK-699 被描述为“一种强效的、近期开发的 KAT2A/KAT2B 蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC）”。它作为药理学工具，用于诱导 KAT2A/B 的急性降解，并在多种细胞系（包括 HAP1、MOLM-13 和 NALM6）中作为 KAT2A 蛋白减少的阳性对照。[2]
- 该化合物能够比较化学降解与基因敲除对 KAT2A 的影响，有助于验证 KAT2A 稳定性报告系统的特异性。[2]

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- GSK-699-1 是一种可同时诱导 KAT2A 和 KAT2B 蛋白降解的 PROTAC。在手稿中被描述为“近期开发的”化合物（参考文献 39）。[3]
- 无活性的对映异构体 GSK-699-2 在所有体外实验中作为阴性对照，用于确认靶向效应。[3]
- GSK-699-1 处理可降低 MYCN 蛋白表达，MYCN 是 MYCN 扩增型神经母细胞瘤的关键致癌驱动因子。该化合物还能降低 H3K9ac 和 H3K27ac 水平。[3]
- 该研究提供的证据表明，通过降解 KAT2A 和 KAT2B 来药理学靶向 SAGA 复合物，可能是治疗 MYCN 扩增型神经母细胞瘤的一种治疗策略。[3]

C45H51BRN8O7

895.856

894.306

C, 60.33; H, 5.74; Br, 8.92; N, 12.51; O, 12.50

2260944-68-9

146680948

Solid Powder

1.43±0.1 g/cm3(Predicted)

4.7

164Ų

2

11

15

61

1710

2

CN1C[C@H](C[C@H](C1)NC2=C(C(=O)N(N=C2)C)Br)C3=CC=C(C=C3)C(=O)N(C)CCCN(C)C4=CC=C(C=C4)CCCOC5=CC=CC6=C5C(=O)N(C6=O)C7CCC(=O)NC7=O

SARLMRHJAJBYBI-CIDUPMPKSA-N

InChI=1S/C45H51BrN8O7/c1-50-26-31(24-32(27-50)48-35-25-47-53(4)45(60)40(35)46)29-13-15-30(16-14-29)42(57)52(3)22-7-21-51(2)33-17-11-28(12-18-33)8-6-23-61-37-10-5-9-34-39(37)44(59)54(43(34)58)36-19-20-38(55)49-41(36)56/h5,9-18,25,31-32,36,48H,6-8,19-24,26-27H2,1-4H3,(H,49,55,56)/t31-,32+,36?/m0/s1

4-((3R,5R)-5-((5-bromo-1-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)-1-methylpiperidin-3-yl)-N-(3-((4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)propyl)phenyl)(methyl)amino)propyl)-N-methylbenzamide

GSK-699; GSK699; GSK699; GSK-699-1; 2260944-68-9; GSK-699; GSK 699; CHEMBL4462377; BCP31920; AKOS040751967; PD128097; 4-[(3R,5R)-5-[(5-bromo-1-methyl-6-oxopyridazin-4-yl)amino]-1-methylpiperidin-3-yl]-N-[3-[4-[3-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]oxypropyl]-N-methylanilino]propyl]-N-methylbenzamide; GSK 699

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Soluble in DMSO (50mg/ml)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。