GSK-699

PCAF/GCN5 (minimum concentration required to induce nearly complete PCAF degradation: 100 nM)
KAT2A (also known as GCN5) and its paralogue KAT2B (PCAF). [2]
The molecular targets of GSK-699 are the PCAF and GCN5 proteins. These closely related epigenetic regulators each contain an acetyltransferase domain and a bromodomain, serving as core components of the SAGA transcriptional coactivator complex. GSK-699 induces K48-linked polyubiquitination by bringing PCAF/GCN5 into proximity with the E3 ubiquitin ligase CRBN, leading to proteasomal degradation of the target proteins. Studies confirm that GSK-699 also degrades KAT2A and KAT2B (alternative names for PCAF and GCN5, respectively), modulates the histone acetyltransferase activity of the SAGA complex, and reduces histone H3K9ac levels.
GSK-699 targets PCAF (p300/CBP-associated factor) and GCN5, two closely related histone acetyltransferases (HATs) that acetylate histone and non-histone proteins. As a PROTAC, GSK-699 recruits PCAF/GCN5 to an E3 ubiquitin ligase (cereblon, via the pomalidomide moiety), leading to their ubiquitination and subsequent proteasomal degradation. This degradation mechanism results in the inhibition of PCAF/GCN5 function and downstream anti-inflammatory effects.

GSK699 可显著下调巨噬细胞和树突状细胞 (DC) 中 PCAF 蛋白的水平（超过 90%）（见补充信息图 2c 和 2d）。对 LPS 刺激细胞上清液中细胞因子水平进行多重分析显示，在 100 nM GSK699 处理后（该浓度是诱导 PCAF 几乎完全降解所需的最低浓度；图 2e、2f 和补充信息图 2c 和 2d），巨噬细胞和 DC 中 IL-6、IL-12p70、IL-10、IL-1β 和 IFN-γ 的产生均显著降低。与对照组相比，GSK699 处理的 DC 中 TNF 和 IL-8 的水平也显著降低，而巨噬细胞中这两种细胞因子的水平没有变化（图 2e 和 2f）。尽管对照化合物 GSK702 对树突状细胞 (DC) 没有抑制作用，但它确实导致巨噬细胞中 IL-1β 水平出现轻微但显著的降低，这可能是由于该细胞类型中 PCAF/GCN5 的轻微降解，或是 CRBN 结合部分对观察到的抗炎表型有轻微贡献（图 2e）。总之，这些结果表明，与 PCAF/GCN5 溴结构域抑制不同，PROTAC 介导的这些蛋白降解显著损害了巨噬细胞和 DC 对 LPS 的反应能力，从而导致多种炎症细胞因子的产生减少。鉴于 PROTAC 诱导的 PCAF/GCN5 降解对 DC 的显著影响，我们着手进一步探索 GSK699 在该细胞类型中的生物学潜力，方法是在上述相同的实验条件下，使用细胞因子和趋化因子蛋白芯片评估其对更广泛的炎症分子表达的影响。结果证实了 GSK699 处理对 IL-6、TNF 和 IL-12p70 的抑制作用，并表明 GSK699 处理的细胞中多种其他炎症介质的产生减少，包括 CXCL1/GROα、CXCL11/I-TAC、CCL7、CCL20/MIP-3α 和 CCL19/MIP-3β（图 3a 和补充信息表 1）[1]。在表达 KAT2A-BFP-P2A-mCherry 稳定性报告基因的野生型 HAP1 Cas9 细胞中，用 100 nM GSK-699 处理 6 小时后，KAT2A-BFP 信号显著降低（平均荧光强度从 1.0 ± 0.007 (DMSO) 降低至 0.28 ± 0.015 (GSK-699)，平均值 ± 标准差），而 mCherry 荧光强度没有变化，证实了特异性降解。 KAT2A 的表达。[2]
- 在表达相同 KAT2A 稳定性报告基因的 MOLM-13（急性髓系白血病）和 NALM6（急性淋巴细胞白血病）细胞中，GSK-699 处理（100 nM，6 小时）显著降低了 KAT2A-BFP 的丰度，而 mCherry 水平没有变化。[2]
- 在免疫荧光实验中，用 GSK-699（100 nM，6 小时）处理野生型 HAP1 Cas9 细胞，可使核内 KAT2A 荧光强度降低至与 KAT2A 基因敲除相当的水平。[2]

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体外实验表明，GSK-699 可显著下调巨噬细胞和树突状细胞中 PCAF 蛋白的水平（降解超过 90%）。100 nM 的浓度足以诱导 PCAF 几乎完全降解。在LPS刺激的细胞中，GSK-699处理显著降低了多种炎症细胞因子的产生，包括IL-6、IL-12p70、IL-10、IL-1β、IFN-γ、TNF和IL-8。细胞因子/趋化因子蛋白芯片分析进一步证实，GSK-699还能抑制多种其他炎症介质，包括CXCL1/GROα、CXCL11/I-TAC、CCL7、CCL20/MIP-3α和CCL19/MIP-3β。此外，GSK-699还能抑制神经母细胞瘤、急性髓系白血病和小细胞肺癌细胞的生长。在神经母细胞瘤细胞系中，用 100 nM GSK-699 处理 72 小时可显著抑制细胞增殖并降低 EdU 掺入率。

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- 在三种 MYCN 扩增的神经母细胞瘤细胞系（KELLY、NB1 和 NGP）中，用 GSK-699-1（而非无活性对映体 GSK-699-2）处理导致 KAT2A 和 KAT2B 表达均丧失，并随后导致 H3K9ac 水平降低，这与 SAGA KAT 活性丧失一致。此外，还观察到 MYCN 蛋白表达降低。[3]
- GSK-699-1 具有低纳摩尔级的效力（具体数值未指定，参见补充图 S7A 和 S7B）。[3]
- 在 KELLY、NB1 和 NGP 细胞中，长期使用 GSK-699-1 可显著抑制神经母细胞瘤的生长。 [3] 在三种非MYCN扩增的细胞系中，GSK-699-1处理表现出异质性反应；敏感性与MYC表达显著降低相关。[3] 在MYCN扩增模型中，GSK-699-1抑制细胞生长主要通过G1/G0期细胞周期阻滞（通过EdU和碘化丙啶掺入实验评估）实现。[3] 在KELLY细胞中，用100 nM GSK-699-1处理6、24或72小时后，RNA-seq检测显示基因表达随时间发生改变。[3] 在用100 nM GSK-699-1处理6小时的KELLY细胞中，ChIP-seq显示全基因组和TADA2B结合位点的H3K9ac沉积减少，以及全基因组MYCN结合减少。 [3]
GSK-699 是一种高效且可透过细胞膜的 PCAF/GCN5 PROTAC 降解剂。它能以浓度依赖的方式促进 THP1 细胞中 PCAF/GCN5 的泛素化和降解。GSK-699 可抑制 IL-6 和 CXCL1/GROα 等细胞因子和趋化因子的产生。该化合物具有抗炎活性。其降解作用的详细 IC50 值尚未公开。

在体内，GSK-699 在神经母细胞瘤异种移植模型中表现出抗肿瘤活性。在皮下 KELLY 细胞异种移植裸鼠模型中，每日腹腔注射 GSK-699（50 mg/kg）可显著抑制肿瘤生长，持续 18 天。治疗组的肿瘤体积明显小于载体对照组。Kaplan-Meier 生存曲线分析显示，GSK-699 治疗组的总生存期显著延长。药效学研究表明，经 GSK-699 治疗 5 天（每日腹腔注射 5、10、50 或 100 mg/kg）后，KELLY 异种移植瘤中 KAT2A、KAT2B、MYCN 和 H3K9ac 的表达呈剂量依赖性降低。这些结果证实 GSK-699 能有效降解靶蛋白，并在体内发挥抗肿瘤作用。 [3]

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- KELLY异种移植瘤模型剂量探索研究：将携带皮下KELLY肿瘤的NSG小鼠分别以5、10、50或100 mg/kg的剂量腹腔注射GSK-699-1，每日一次，连续4天。在所有剂量下，末次给药后6小时，肿瘤组织中均观察到KAT2A/KAT2B的持续降解，并伴有MYCN蛋白表达降低和H3K9ac水平降低（与溶剂对照组相比降低约50%）。由于50 mg/kg剂量具有足够的降解性、无不良反应且溶解性良好，因此选择该剂量进行疗效研究。 [3]
- KELLY异种移植瘤模型疗效研究：将已建立KELLY异种移植瘤（肿瘤体积约50-100 mm³）的NSG小鼠随机分为两组，分别接受载体或GSK-699-1（50 mg/kg，每日一次腹腔注射，持续21天）治疗。GSK-699-1治疗显著延缓了肿瘤进展（第16天P = 0.01，第18天P = 0.07，双侧Student's t检验），并延长了终点生存期（log-rank Mantel-Cox检验，P = 0.0134）。小鼠体重显示治疗耐受性良好，未出现明显的体重下降。治疗组在肿瘤终点时仍维持KAT2A/KAT2B表达降低。 [3]体内实验表明，GSK-699有望通过降解PCAF/GCN5并减少细胞因子/趋化因子的产生而发挥抗炎活性。作为一种PROTAC降解剂，由于其催化作用机制，它可能比传统抑制剂更具优势。然而，由于该化合物主要是一种研究工具，因此详细的体内疗效数据有限。需要利用炎症动物模型进行进一步研究，以表征其体内活性。

作为一种PROTAC分子，GSK-699的作用机制需要完整的细胞内泛素-蛋白酶体系统，因此无细胞直接结合实验并不常用。为了评估其与CRBN或PCAF/GCN5的结合亲和力，可采用以下步骤：将GSK-699溶解于DMSO中配制成储备液（例如，10 mM）。在96孔板中，用结合缓冲液（50 mM HEPES pH 7.5、150 mM NaCl、0.1% BSA、0.01% Tween-20）将化合物稀释至所需浓度（例如，0.1-1000 nM）。在室温下，将化合物与重组CRBN-DDB1复合物或重组GST标签的PCAF/GCN5蛋白孵育30-60分钟。使用荧光偏振（FP）或表面等离子共振（SPR）技术测定结合亲和力（Kd值）。注：PROTAC 的双功能特性可能导致其对每个靶点（靶蛋白和 E3 连接酶）的亲和力低于传统抑制剂。
GSK-699 的 PROTAC 活性测定采用基于细胞的降解实验。将细胞（例如 THP1 细胞）用不同浓度的 GSK-699 处理 4-24 小时。通过蛋白质印迹法检测 PCAF 和 GCN5 蛋白水平以量化降解情况。通过免疫沉淀结合蛋白质印迹法检测 PCAF/GCN5 的泛素化水平。细胞因子和趋化因子（IL-6、CXCL1/GROα）的产生通过 ELISA 法测定。

Western Blot实验中，将细胞沉淀重悬于含蛋白酶抑制剂和0.1%苯甲酸酶的Pierce RIPA缓冲液中，冰上孵育30分钟。离心管在4℃下以16,000 rcf离心15分钟，并将上清液转移至新的离心管中。使用Pierce BCA蛋白测定试剂盒测定总蛋白浓度。取30 µg总蛋白上样至4-12% NuPAGE凝胶，然后转移至Odyssey硝酸纤维素膜上。膜用Odyssey封闭缓冲液封闭1小时，之后与指定的一抗在4℃孵育过夜。与相应的IRDye二抗孵育后，使用Odyssey扫描仪显影。使用 Image Studio Lite v5.2 软件[1]对条带强度进行定量分析。

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- HAP1 细胞稳定性报告基因检测：表达 KAT2A-BFP-P2A-mCherry 报告基因的野生型 HAP1 Cas9 细胞用 100 nM GSK-699 处理 6 小时。然后用流式细胞仪分析细胞。测量 BFP 和 mCherry 的平均荧光强度。计算 KAT2A-BFP/mCherry 比值以确定 KAT2A 的相对丰度。DMSO 处理的细胞作为对照。与 DMSO 处理相比，GSK-699 处理导致 KAT2A-BFP 信号降低 70% 以上。 [2]
- 白血病细胞稳定性报告基因检测：稳定表达Cas9和KAT2A-BFP-P2A-mCherry报告基因的MOLM-13和NALM6细胞用100 nM GSK-699处理6小时。采用流式细胞术检测eGFP阳性（转导）细胞中BFP和mCherry的荧光强度。GSK-699处理显著降低了KAT2A-BFP的表达水平，而mCherry的表达水平未发生改变。[2]
- 免疫荧光检测：野生型HAP1 Cas9细胞用100 nM GSK-699处理6小时后，进行固定和KAT2A及DNA染色。采用共聚焦显微镜定量分析核内KAT2A的荧光强度。GSK-699处理将核内KAT2A的荧光强度降低至与KAT2A敲除细胞相当的水平，表明该检测方法具有较高的灵敏度。 [2]

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GSK-699体外细胞实验方案（以PCAF/GCN5降解评估为例）：1）将细胞（例如THP-1单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞）接种于6孔板中（每孔5×10⁵-1×10⁶个细胞），并在37℃、5% CO₂条件下培养过夜。2）用完全培养基配制GSK-699的系列稀释液（例如10、30、100、300、1000 nM）。3）更换培养基，加入含化合物的培养基，处理细胞4-24小时（最佳时间通常为4-6小时）。4）收集细胞，裂解并提取总蛋白。5）通过Western blot检测PCAF或GCN5蛋白水平，以GAPDH或组蛋白H3作为内参。计算 DC50（50% 蛋白质降解所需的浓度）。6) 或者，在处理 72 小时后通过 CCK-8 法评估细胞活力，或在处理 24-48 小时后通过流式细胞术测量细胞凋亡率。

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- 蛋白质表达的蛋白质印迹分析：将神经母细胞瘤细胞系（KELLY、NB1、NGP）用载体、GSK-699-1 或非活性对映体 GSK-699-2 处理 24 小时。用添加了蛋白酶和磷酸酶抑制剂的细胞裂解缓冲液裂解细胞。用 BCA 法定量裂解液，进行标准化，并通过 SDS-PAGE 电泳分离。将蛋白质转移到 PVDF 膜上，并用针对 KAT2A、KAT2B、MYCN、H3K9ac、H3K27ac、GAPDH（上样对照）和总组蛋白 H3（上样对照）的抗体进行检测。将膜与二抗孵育后进行成像。GSK-699-1 处理导致 KAT2A、KAT2B 和 MYCN 表达缺失，并降低 H3K9ac 水平。[3]
- 细胞活力检测（延长处理）：将神经母细胞瘤细胞系用 DMSO、100 nM GSK-699-1 或 100 nM GSK-699-2 处理长达 8 天。与第 0 天相比评估相对活力。GSK-699-1 在延长处理后显著抑制了神经母细胞瘤的生长。[3]
- 细胞周期分析（EdU 和碘化丙啶掺入）：将神经母细胞瘤细胞系接种并用 DMSO 或 100 nM GSK-699-1 处理 72 小时。将细胞与 10 µM EdU 孵育 90 分钟。细胞收集后，进行固定、染色，并进行RNase A消化和PI染色。采用流式细胞术分析样品。GSK-699-1处理导致G1/G0期细胞周期阻滞。[3] RNA测序：KELLY细胞用DMSO或100 nM GSK-699-1处理6、24或72小时（生物学重复三次）。收集总RNA，匀浆并纯化。进行RNA文库构建和转录组测序。分析差异基因表达数据（DESeq2校正后的P≤0.10，|倍数变化|≥1.5）。GSEA分析显示，在所有时间点，下调基因均富集于MYC、E2F/细胞周期和MYCN相关基因特征。 [3]
- ChIP测序：KELLY细胞用DMSO或100 nM GSK-699-1处理6小时。细胞经甲醛交联、裂解和染色质剪切。使用针对H3K9ac、H3K27ac或MYCN的抗体进行染色质免疫沉淀，并以外源染色质作为内参进行标准化。纯化DNA并构建测序文库。GSK-699-1处理降低了全基因组范围内的H3K9ac和H3K27ac沉积，并减少了MYCN在染色质上的结合。[3]
基于细胞的GSK-699检测采用THP1细胞或其他相关细胞类型。将细胞接种于多孔板中，并用不同浓度的GSK-699处理4-24小时。通过Western blot检测PCAF和GCN5蛋白水平以确认降解情况。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞因子和趋化因子（IL-6、CXCL1/GROα）的产生。细胞活力采用标准检测方法进行评估。通过测定对炎症细胞因子产生的抑制作用来表征该化合物的抗炎活性。

将9只不同的C57BL/6野生型（WT）或PCAF-/-1小鼠的前肢和后肢收集于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并置于培养皿中。取出足部，切开膝关节。用手术刀切除骨骼末端，并用装有PBS的注射器冲洗骨髓。将细胞通过70 µm尼龙细胞筛过滤并计数。将细胞以 0.5 x 10⁶ 个细胞/mL 的密度重悬于含 10% 胎牛血清 (FBS)、100 单位/mL 青霉素、100 µg/mL 链霉素、2 mM L-谷氨酰胺、1X 非必需氨基酸、50 µM β-巯基乙醇和 1 mM 丙酮酸钠的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中，并补充 5 ng/mL 小鼠 M-CSF 和 5 ng/mL 小鼠 IL-3。将 10 mL 细胞悬液接种于培养皿中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养 24 小时。次日，将细胞悬液转移至新的培养皿中以去除污染的成纤维细胞，并继续培养 6 天。分化后，用含5 mM EDTA和2%牛血清白蛋白的PBS缓冲液消化巨噬细胞15分钟，然后以2×10⁵个细胞/200 µl/孔的密度接种于96孔板中，每只小鼠3孔。用10 ng/mL大肠杆菌LPS（0111:B4）刺激细胞6小时后，将培养板以400 rcf离心10分钟，将上清液转移至新的96孔板中，并于-80°C保存直至分析。为了检测PCAF/GCN5溴结构域抑制剂GSK4027对小鼠巨噬细胞的抑制作用，按照上述方法从6只不同的C57BL/10未免疫小鼠的腿部提取骨髓细胞，并在化合物存在下诱导分化为巨噬细胞。分化期结束后，将巨噬细胞接种于96孔板中，每个化合物浓度设置7个孔。将孔板在37°C、5% CO2条件下孵育过夜，然后用100 ng/mL大肠杆菌LPS刺激6小时。将孔板以400 rcf离心10分钟，并将上清液转移至新的孔板中进行MSD分析。[1]

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GSK-699体内动物试验方案（以异种移植瘤模型为例）：1）使用4-5周龄雌性裸鼠，将肿瘤细胞（例如，KELLY神经母细胞瘤细胞，5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下接种于右侧腋窝。2）当肿瘤体积达到约150-200 mm³时，将动物随机分为治疗组和对照组（每组8-10只小鼠）。 3) 将 GSK-699 配制成含有 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% 生理盐水的载体。4) 通过腹腔注射给药（常用剂量：10、50 或 100 mg/kg，每日一次）。5) 对照组给予载体对照。6) 每周测量肿瘤体积（长 × 宽²/2）和体重 2-3 次；每日观察动物一般状况。7) 在治疗结束时（通常为第 18-21 天）处死动物，收集肿瘤组织进行靶蛋白降解的 Western blot 分析，并收集主要器官进行组织病理学检查。8) 绘制肿瘤生长曲线和 Kaplan-Meier 生存曲线。

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- GSK-699-1 剂量探索研究：将 KELLY 细胞 (3 × 10⁶) 皮下注射到 NSG 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 50-100 mm³ 时，将小鼠随机分为两组，分别接受 5、10、50 或 100 mg/kg 剂量的 GSK-699-1 或载体对照，每日一次腹腔注射给药。GSK-699-1 粉末用 10% DMSO 的无菌磷酸盐缓冲液重悬。小鼠接受治疗 4 天，并在末次给药后 6 小时处死，用于后续分析（蛋白质印迹法）。[3]
- GSK-699-1 疗效研究：将 KELLY 细胞 (3 × 10⁶) 皮下注射到 NSG 小鼠体内。当肿瘤体积达到约 50-100 mm³ 时，将小鼠随机分为载体组 (n=9) 和 GSK-699-1 组（50 mg/kg，每日一次腹腔注射，n=9）。治疗持续 21 天。每周三次使用数字游标卡尺测量肿瘤大小，并每周三次测定小鼠体重。实验终点定义为肿瘤直径在任何方向上≥20 mm、最大肿瘤负荷约为1800 mm³，或小鼠出现不健康状态。绘制Kaplan-Meier生存曲线，并使用log-rank（Mantel-Cox）检验确定显著性。[3]
GSK-699的体内研究通常在炎症小鼠模型中进行。该化合物将以不同剂量通过腹腔注射或口服途径给药。将检测血清或组织中的炎症细胞因子水平。通过Western blot验证靶组织中PCAF/GCN5的降解。然而，由于GSK-699主要是一种研究工具，因此已发表的详细体内实验方案有限。

作为一种PROTAC分子，GSK-699具有相对较高的分子量（895.84 Da），这通常会限制其口服生物利用度和细胞膜渗透性。其预测的logP值为4.7，表明其具有中等亲脂性。拓扑极性表面积（tPSA）为164 Ų，高于传统小分子药物的理想范围，这可能会影响其通过被动扩散的细胞穿透效率。体内研究采用腹腔注射给药（50 mg/kg，每日一次），结果表明GSK-699可通过注射途径达到足够的全身暴露量。PROTAC分子通常具有较长的作用持续时间，因为它们在降解靶蛋白后可以发挥催化作用；然而，其具体的半衰期和清除途径仍需进一步研究。GSK-699的分子式为C45H51BrN8O7，分子量为895.84，CAS号为2260944-68-9。该化合物是一种PROTAC降解剂，含有与cereblon结合的泊马度胺部分。粉末状的该化合物应在-20°C下保存长达3年，溶剂状的该化合物应在-80°C下保存长达1年。该化合物可溶于DMSO。

在体内神经母细胞瘤模型中，每日腹腔注射 50 mg/kg GSK-699，持续 18 天，未观察到显著的治疗相关死亡率或严重的全身毒性。然而，由于 GSK-699 会降解广泛表达的表观遗传调控因子 PCAF/GCN5，长期使用可能存在潜在的毒性风险。已知 CRBN 调节剂（例如来那度胺类化合物）与血栓栓塞事件和胚胎-胎儿毒性相关，因此 GSK-699 可能具有类似的潜在风险。该化合物仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。所有涉及 GSK-699 的实验均应在符合标准化学安全操作规程的生物安全柜中进行。

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- 在剂量探索研究中，GSK-699-1 剂量高达 100 mg/kg（每日腹腔注射，持续 4 天）时未显示不良反应。 50 mg/kg 剂量被描述为无不良反应且溶解性良好。[3]
- 在疗效研究（50 mg/kg，每日一次腹腔注射，持续 21 天）中，根据小鼠体重评估，该治疗耐受性良好（未观察到明显的体重减轻）。[3]
由于 GSK-699 是一种研究性化合物，其毒理学数据有限。作为一种靶向 PCAF/GCN5 的 PROTAC 降解剂，其潜在毒性可能与这些组蛋白乙酰转移酶在正常组织中的生物学功能有关。该化合物应在实验室中采取适当的安全预防措施进行操作。任何治疗性药物的开发都需要进行标准的临床前安全性评估。

[1]. Modulating PCAF/GCN5 Immune Cell Function through a PROTAC Approach. ACS Chem Biol. 2018 Oct 19;13(10):2862-2867.

[2]. Disruption of the SAGA CORE triggers collateral degradation of KAT2A. Nat Commun. 2026 Apr 20;17(1):3410.

[3]. The KAT module of the SAGA complex maintains the oncogenic gene expression program in MYCN-amplified neuroblastoma. Sci Adv. 2024 May 31;10(22):eadm9449.

P300/CBP相关因子（PCAF）和一般控制非抑制蛋白5（GCN5）是密切相关的表观遗传蛋白，二者均包含乙酰转移酶结构域和溴结构域。与已报道的这些蛋白在免疫功能中的作用一致，我们发现PCAF缺陷型巨噬细胞在脂多糖（LPS）刺激下产生细胞因子的能力显著降低。为了探究靶向该通路进行药物治疗的可能性，我们发现化学抑制PCAF/GCN5溴结构域不足以重现PCAF缺陷型免疫细胞中炎症反应的减弱。然而，通过构建首个PCAF/GCN5蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC），我们鉴定出一种能够降解PCAF/GCN5并有效调节LPS刺激的巨噬细胞和树突状细胞中多种炎症介质表达的小分子。我们的数据表明，PROTAC 方法在多结构域蛋白中发挥着强大的作用，揭示了一种靶向 PCAF/GCN5 的新型抗炎治疗机会。[1]

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- GSK-699 被描述为一种“强效的、新近开发的 KAT2A/KAT2B 蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC)”。它被用作一种药理学工具，可诱导 KAT2A/B 的急性降解，并作为包括 HAP1、MOLM-13 和 NALM6 在内的多种细胞系中 KAT2A 蛋白减少的阳性对照。[2]
- 该化合物可以比较 KAT2A 的化学降解和基因敲除，有助于验证 KAT2A 稳定性报告系统的特异性。[2]

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- GSK-699-1 是一种 PROTAC，可诱导 KAT2A 和 KAT2B 的蛋白水解。它被描述为一种“新近开发”的化合物（参见文稿中的参考文献 39）。 [3]
- 在所有体外实验中，均使用无活性对映体 GSK-699-2 作为阴性对照，以验证靶向效应。[3]
- GSK-699-1 处理降低了 MYCN 蛋白的表达，MYCN 蛋白是 MYCN 扩增型神经母细胞瘤的关键致癌驱动因子。该化合物还降低了 H3K9ac 和 H3K27ac 的水平。[3]
- 该研究提供的证据表明，通过降解 KAT2A 和 KAT2B 来靶向 SAGA 复合物的药理学策略可能是 MYCN 扩增型神经母细胞瘤的一种治疗策略。[3]
GSK-699 是一种强效的、细胞渗透性 PCAF/GCN5 PROTAC 降解剂。它促进 PCAF/GCN5 的泛素化和降解，并抑制 IL-6 和 CXCL1/GROα 等细胞因子/趋化因子的产生。 PCAF 和 GCN5 是参与转录调控和炎症的组蛋白乙酰转移酶。GSK-699 是一种仅供研究使用的化合物，用于研究 PCAF/GCN5 在炎症和癌症中的作用。

C45H51BRN8O7

895.856

894.306

C, 60.33; H, 5.74; Br, 8.92; N, 12.51; O, 12.50

2260944-68-9

146680948

Solid Powder

1.43±0.1 g/cm3(Predicted)

4.7

164Ų

2

11

15

61

1710

2

CN1C[C@H](C[C@H](C1)NC2=C(C(=O)N(N=C2)C)Br)C3=CC=C(C=C3)C(=O)N(C)CCCN(C)C4=CC=C(C=C4)CCCOC5=CC=CC6=C5C(=O)N(C6=O)C7CCC(=O)NC7=O

SARLMRHJAJBYBI-CIDUPMPKSA-N

InChI=1S/C45H51BrN8O7/c1-50-26-31(24-32(27-50)48-35-25-47-53(4)45(60)40(35)46)29-13-15-30(16-14-29)42(57)52(3)22-7-21-51(2)33-17-11-28(12-18-33)8-6-23-61-37-10-5-9-34-39(37)44(59)54(43(34)58)36-19-20-38(55)49-41(36)56/h5,9-18,25,31-32,36,48H,6-8,19-24,26-27H2,1-4H3,(H,49,55,56)/t31-,32+,36?/m0/s1

4-((3R,5R)-5-((5-bromo-1-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)-1-methylpiperidin-3-yl)-N-(3-((4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)propyl)phenyl)(methyl)amino)propyl)-N-methylbenzamide

GSK-699; GSK699; GSK699; GSK-699-1; 2260944-68-9; GSK-699; GSK 699; CHEMBL4462377; BCP31920; AKOS040751967; PD128097; 4-[(3R,5R)-5-[(5-bromo-1-methyl-6-oxopyridazin-4-yl)amino]-1-methylpiperidin-3-yl]-N-[3-[4-[3-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]oxypropyl]-N-methylanilino]propyl]-N-methylbenzamide; GSK 699

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Soluble in DMSO (50mg/ml)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。