| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 1g |
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| 靶点 |
PCAF/GCN5 (minimum concentration required to induce nearly complete PCAF degradation: 100 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
GSK699诱导巨噬细胞和DC中PCAF蛋白水平的强烈下调（超过90%）（支持信息图2c和d）。LPS刺激细胞上清液中细胞因子水平的多重分析显示，用100 nM的GSK699处理后，巨噬细胞和树突状细胞中IL-6、IL-12p70、IL-10、IL-1β和IFN-γ的产生显著减少（诱导几乎完全PCAF降解所需的最小浓度；图2e、f和支持信息图2c和d）。与对照细胞相比，GSK699处理的DC中TNF和IL-8也受到了显著抑制，而这两种细胞因子在巨噬细胞中没有变化（图2e和2f）。尽管对照化合物GSK702对DC没有抑制作用，但它确实导致巨噬细胞中IL-1β的小幅但显著的减少，这可能是由于这种细胞类型中PCAF/GCN5的降解较弱，或者CRBN结合部分对观察到的抗炎表型的轻微贡献（图2e）。总之，这些结果表明，与PCAF/GCN5溴结构域抑制不同，PROTAC介导的这些蛋白质的降解显著损害了巨噬细胞和树突状细胞对LPS的反应能力，从而减少了许多炎性细胞因子的产生
鉴于PROTAC诱导的DCs中PCAF/GCN5降解的深远影响，我们开始在上述相同的实验条件下，通过使用细胞因子和趋化因子蛋白阵列评估GSK699对更广泛的炎症分子表达的影响，进一步探索GSK699在这种细胞类型中的生物学潜力。结果证实了GSK699治疗对IL-6、TNF和IL-12p70的抑制作用，并表明GSK699处理的细胞中许多其他炎症介质的产生减少，包括CXCL1/GROα、CXCL11/I-TAC、CCL7、CCL20/MIP-3α和CCL19/MIP-3β（图3a和支持信息表1）[1]。 |
| 细胞实验 |
将Western Blot Cell颗粒重新悬浮在含有蛋白酶抑制剂和0.1%苯并酶的Pierce RIPA缓冲液中，并在冰上孵育30分钟。试管在4°C下以16000 rcf离心15分钟，上清液转移到新试管中。总蛋白浓度通过Pierce BCA蛋白检测试剂盒测定。将30µg总蛋白装载在4-12%NuPAGE凝胶上，并转移到Odyssey硝化纤维膜上。12个膜用奥德赛阻断缓冲液阻断1小时，然后与指定的一抗孵育过夜。用适当的IRDye二抗孵育后，使用Odyssey扫描仪对条带进行可视化。使用Image Studio Lite v5.2软件对条带的强度进行量化[1]。
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| 动物实验 |
将9只不同的C57BL/6野生型（WT）或PCAF-/-1小鼠的前肢和后肢收集于磷酸盐缓冲液（PBS）中，并置于培养皿中。取出足部，切开膝关节。用手术刀切除骨骼末端，并用装有PBS的注射器冲洗骨髓。将细胞通过70 µm尼龙细胞筛过滤并计数。将细胞以 0.5 x 10⁶ 个细胞/mL 的密度重悬于含 10% 胎牛血清 (FBS)、100 单位/mL 青霉素、100 µg/mL 链霉素、2 mM L-谷氨酰胺、1X 非必需氨基酸、50 µM β-巯基乙醇和 1 mM 丙酮酸钠的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 中，并补充 5 ng/mL 小鼠 M-CSF 和 5 ng/mL 小鼠 IL-3。将 10 mL 细胞悬液接种于培养皿中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养 24 小时。次日，将细胞悬液转移至新的培养皿中以去除污染的成纤维细胞，并继续培养 6 天。分化后，用含5 mM EDTA和2%牛血清白蛋白的PBS缓冲液消化巨噬细胞15分钟，然后以2×10⁵个细胞/200 µl/孔的密度接种于96孔板中，每只小鼠3孔。用10 ng/mL大肠杆菌LPS（0111:B4）刺激细胞6小时后，将培养板以400 rcf离心10分钟，将上清液转移至新的96孔板中，并于-80°C保存直至分析。为了检测PCAF/GCN5溴结构域抑制剂GSK4027对小鼠巨噬细胞的抑制作用，按照上述方法从6只不同的C57BL/10未免疫小鼠的腿部提取骨髓细胞，并在化合物存在下诱导分化为巨噬细胞。分化期结束后，将巨噬细胞接种于96孔板中，每个化合物浓度设置7个孔。将孔板在37℃、5% CO2条件下孵育过夜，然后用100 ng/mL大肠杆菌LPS刺激6小时。将孔板以400 rcf离心10分钟，并将上清液转移至新的孔板中进行MSD分析。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
P300/CBP相关因子（PCAF）和一般控制非抑制性5（GCN5）是密切相关的表观遗传蛋白，它们均包含一个乙酰转移酶结构域和一个溴结构域。与已报道的这些蛋白在免疫功能中的作用一致，我们发现PCAF缺陷型巨噬细胞在脂多糖（LPS）刺激下产生细胞因子的能力显著降低。为了研究靶向该通路进行药物治疗的可能性，我们发现化学抑制PCAF/GCN5溴结构域不足以重现PCAF缺陷型免疫细胞炎症反应的减弱。然而，通过构建首个PCAF/GCN5蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC），我们鉴定出能够降解PCAF/GCN5并有效调节LPS刺激的巨噬细胞和树突状细胞中多种炎症介质表达的小分子。我们的数据表明 PROTAC 方法在多结构域蛋白中的强大作用，揭示了一种针对 PCAF/GCN5 的新型抗炎治疗机会。[1]
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| 分子式 |
C45H51BRN8O7
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|---|---|
| 分子量 |
895.856
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| 精确质量 |
894.306
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| 元素分析 |
C, 60.33; H, 5.74; Br, 8.92; N, 12.51; O, 12.50
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| CAS号 |
2260944-68-9
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| PubChem CID |
146680948
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| 外观&性状 |
Solid Powder
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| 密度 |
1.43±0.1 g/cm3(Predicted)
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| LogP |
4.7
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| tPSA |
164Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
11
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| 可旋转键数目(RBC) |
15
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| 重原子数目 |
61
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| 分子复杂度/Complexity |
1710
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| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CN1C[C@H](C[C@H](C1)NC2=C(C(=O)N(N=C2)C)Br)C3=CC=C(C=C3)C(=O)N(C)CCCN(C)C4=CC=C(C=C4)CCCOC5=CC=CC6=C5C(=O)N(C6=O)C7CCC(=O)NC7=O
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| InChi Key |
SARLMRHJAJBYBI-CIDUPMPKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C45H51BrN8O7/c1-50-26-31(24-32(27-50)48-35-25-47-53(4)45(60)40(35)46)29-13-15-30(16-14-29)42(57)52(3)22-7-21-51(2)33-17-11-28(12-18-33)8-6-23-61-37-10-5-9-34-39(37)44(59)54(43(34)58)36-19-20-38(55)49-41(36)56/h5,9-18,25,31-32,36,48H,6-8,19-24,26-27H2,1-4H3,(H,49,55,56)/t31-,32+,36?/m0/s1
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| 化学名 |
4-((3R,5R)-5-((5-bromo-1-methyl-6-oxo-1,6-dihydropyridazin-4-yl)amino)-1-methylpiperidin-3-yl)-N-(3-((4-(3-((2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)oxy)propyl)phenyl)(methyl)amino)propyl)-N-methylbenzamide
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| 别名 |
GSK-699; GSK699; GSK699; 2260944-68-9; GSK-699; GSK 699; CHEMBL4462377; BCP31920; AKOS040751967; PD128097; 4-[(3R,5R)-5-[(5-bromo-1-methyl-6-oxopyridazin-4-yl)amino]-1-methylpiperidin-3-yl]-N-[3-[4-[3-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1,3-dioxoisoindol-4-yl]oxypropyl]-N-methylanilino]propyl]-N-methylbenzamide; GSK 699
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1162 mL | 5.5812 mL | 11.1625 mL | |
| 5 mM | 0.2232 mL | 1.1162 mL | 2.2325 mL | |
| 10 mM | 0.1116 mL | 0.5581 mL | 1.1162 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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