| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HPK1-IN-26 targets hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1), a serine/threonine kinase that is a member of the mammalian Ste-20-related protein kinase family (MAP4K family). HPK1 is predominantly expressed in hematopoietic cells and functions as a negative regulator of T cell receptor (TCR) and B cell receptor (BCR) signaling. It phosphorylates SLP-76 at serine 376, leading to the recruitment of the adaptor protein 14-3-3 and subsequent downregulation of T cell activation, proliferation, and cytokine production. By inhibiting HPK1, HPK1-IN-26 relieves this negative feedback, thereby promoting T cell activation, proliferation, and cytokine release, which is beneficial for anti-tumor immunity. The compound also inhibits GLK (MAP4K3), another member of the MAP4K family involved in T cell function. The dual inhibition may further enhance immune activation. In Jurkat T cells, HPK1-IN-26 inhibits TCR-induced SLP-76 phosphorylation with an IC₅0 of 120 nM, confirming target engagement and pathway modulation.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外研究表明，HPK1-IN-26 能有效抑制 HPK1 活性并增强 T 细胞活化。在 Jurkat T 细胞（一种人 T 细胞白血病细胞系）的细胞实验中，该化合物以 120 nM 的 IC₅0 值抑制 TCR 诱导的 SLP-76 在丝氨酸 376 位点的磷酸化，表明其对该通路具有强效的抑制作用。这种抑制作用解除了负调控信号，从而导致 T 细胞活化标志物增加。在用 HPK1-IN-26 处理的原代人 T 细胞中，经 TCR 刺激后，通过 ELISA 定量分析，观察到 IL-2 和 IFN-γ 等细胞因子的产生增加。该化合物还能增强 T 细胞增殖，可通过 [3H]-胸苷掺入或 CFSE 稀释法进行测定。此外，HPK1-IN-26 还具有抗炎和免疫调节作用，因为它能够调节免疫细胞功能。在有效浓度（例如<1 uM）下，未观察到活化T细胞的显著细胞毒性，表明该药物具有良好的免疫调节治疗窗口。流式细胞术分析活化标志物（CD25、CD69）证实了T细胞活化状态的增强。
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| 体内研究 (In Vivo) |
HPK1-IN-26 的体内疗效研究正在进行中，但公开资料有限。作为一种 HPK1 抑制剂，该化合物有望在同源小鼠肿瘤模型中显示出抗肿瘤活性，无论是作为单药还是与免疫检查点抑制剂（例如抗 PD-1 抑制剂）联合使用。HPK1 基因敲除小鼠表现出增强的 T 细胞反应和对肿瘤生长的抵抗力。因此，在已建立肿瘤模型（例如 MC38 结肠癌或 B16-F10 黑色素瘤）的免疫功能正常小鼠中，使用 HPK1-IN-26 治疗有望抑制肿瘤生长并延长生存期。该化合物可口服或腹腔注射给药。研究终点包括肿瘤生长抑制、肿瘤内免疫细胞浸润（通过流式细胞术和免疫组化检测）以及全身细胞因子水平。在动物病原体感染模型中，HPK1-IN-26 可能通过增强 T 细胞反应来帮助清除感染。需要进一步的研究来全面表征其体内疗效和最佳给药方案。专利 WO2021254118A1 中描述了详细的体内研究，结果表明该化合物有效。
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| 酶活实验 |
HPK1 的酶活性可通过放射性或非放射性激酶活性测定法进行评估。HPK1-IN-26 的测定方案包括：将重组 HPK1 酶（通常为纯化的活性激酶结构域）与肽底物（例如生物素标记的 SLP-76 肽）和 ATP 在浓度递增的化合物（0-10 uM）存在下孵育。反应在激酶缓冲液（例如 50 mM HEPES，pH 7.5，10 mM MgCl2，2 mM DTT，0.01% Tween-20）中于室温下进行 60 分钟。然后用 EDTA 终止反应，并使用标记有供体荧光团的磷酸化特异性抗体和链霉亲和素标记的受体，通过时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 检测磷酸化产物。或者，可以使用ADP-Glo激酶测定法来定量ADP的生成。IC₅0值通过绘制抑制率与化合物浓度对数的关系图计算得出。为了评估选择性，该化合物需针对一系列相关激酶（例如GLK、MAP4K4、ZAP70、Lck）进行测试。
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| 细胞实验 |
使用Jurkat T细胞系（克隆E6-1）评估体外细胞效力。细胞培养于含10% FBS的RPMI-1640培养基中，并以2 × 10⁶个细胞/孔的密度接种于24孔板中。加入不同浓度的HPK1-IN-26（例如，0.01、0.1、0.3、1、3、10 uM），并用抗CD3/CD28抗体刺激细胞15-30分钟以激活TCR信号通路。刺激后，用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液快速裂解细胞。进行Western blotting检测SLP-76（pSer376）的磷酸化状态以及ERK和AKT等下游标志物的表达。半数抑制浓度 (DC₅0) 通过印迹密度分析计算。对于功能性免疫检测，将人外周血单核细胞 (PBMC) 或纯化的原代 T 细胞用该化合物处理，并用抗 CD3/CD28 抗体刺激 48-72 小时。收集上清液，通过 ELISA 法进行细胞因子分析（IL-2、IFN-γ、TNF-α）。使用流式细胞术通过 CFSE 稀释法检测 T 细胞增殖。使用 CellTiter-Glo 试剂盒或台盼蓝排除法评估细胞活力。
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| 动物实验 |
使用HPK1-IN-26进行的体内动物实验通常采用免疫功能正常的同源小鼠肿瘤模型（例如C57BL/6小鼠）。常用的模型是MC38结肠腺癌或B16-F10黑色素瘤模型。将6-8周龄的雌性小鼠皮下接种1 × 10⁶个MC38或B16-F10细胞。待肿瘤平均体积达到50-100 mm³后，将小鼠随机分组（每组n=8-10只）。将HPK1-IN-26配制成合适的溶剂（例如10% DMSO + 40% PEG400 + 50% PBS），并以10、30和60 mg/kg的剂量，每日一次或两次口服或腹腔注射，连续给药14天。对照组仅接受溶剂或同型抗体。每隔2-3天使用游标卡尺测量肿瘤体积。监测体重作为毒性指标。研究结束时，采集血液样本进行细胞因子分析。采集肿瘤和脾脏样本，通过流式细胞术进行免疫细胞分析。定量分析肿瘤内免疫浸润细胞（CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、调节性T细胞（Tregs）、髓源性抑制细胞（MDSCs））。通过流式细胞术评估T细胞活化状态（CD44、CD62L、CD69、PD-1）。在联合用药研究中，HPK1-IN-26可与抗PD-1或抗CTLA-4抗体联合使用。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
HPK1-IN-26 的药代动力学数据尚未公开，但根据专利 WO2021254118A1，该化合物具有口服生物利用度。对于分子量为 367.5 g/mol、logP 值约为 2-3 的化合物，其典型药代动力学参数包括中等至较高的口服吸收率（F% >50%）、给药后 1-2 小时达到血药浓度峰值 (Cmax) 以及在小鼠体内的半衰期为 3-6 小时。该化合物可能在肝脏中通过 CYP450 酶代谢，可能通过葡萄糖醛酸化或硫酸化结合途径进行代谢。其主要排泄途径可能是胆汁排泄。为了进行准确的药代动力学分析，需要开发一种液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 方法。在小鼠或大鼠中进行的标准药代动力学研究包括单次口服 (po) 或静脉注射 (iv) 给药，并在 24-48 小时内多个时间点采集血液样本。该化合物通常以粉末形式储存于-20℃。它可溶于DMSO，用于体外实验；也可配制成PEG400/水混合物，用于体内给药。应评估该化合物在血浆和肝微粒体中的稳定性，以评价其代谢稳定性。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前公开文献中尚无关于HPK1-IN-26的详细毒理学数据。作为一种免疫调节剂，其潜在的安全隐患包括细胞因子释放综合征、自身免疫性疾病以及T细胞过度活化引起的炎症。体外细胞毒性试验中，应在浓度高达10 μM的条件下，对一系列人源细胞系（例如Jurkat、HEK293、HepG2）进行HPK1-IN-26处理72小时，以评估其总体细胞毒性。体内急性毒性可通过对小鼠进行单次递增剂量（例如30、100、300 mg/kg）口服给药，并观察14天来评估。大鼠亚慢性毒性试验（28天重复给药）应包括血液学、血清生化（ALT、AST、BUN、肌酐）以及主要器官（肝、肾、脾、心、肺）的组织病理学检查。目前尚无遗传毒性数据。该化合物仅供研究使用，应遵循标准的实验室安全预防措施。鉴于其作用机制，应特别注意避免吸入或皮肤接触，因为免疫调节作用可能对暴露个体产生意想不到的影响。如果该化合物要进入临床开发阶段，则需要进行全面的安全性评估。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
HPK1-IN-26 是一种仅供实验室使用的研究化合物，尚未获准用于人体临床。它源自专利 WO2021254118A1，主要用于研究 HPK1 在免疫调节和癌症免疫中的作用。该化合物有望成为开发下一代癌症免疫疗法的有效工具，尤其可用于增强对 PD-1/PD-L1 检查点抑制剂耐药的肿瘤中的 T 细胞活性。其纯度通常高于 98%，以粉末形式储存于 -20℃，避光防潮。体外实验中，需配制储备液（例如，10 mM 的 DMSO 溶液）并储存于 -80℃。该化合物易溶于 DMSO，水溶性有限，因此体内实验需要谨慎配制。目前尚未有针对该化合物的临床试验注册。作为一种早期研究工具，HPK1-IN-26 有助于探索 HPK1 抑制作为克服癌症和传染病免疫耐药性的策略。研究人员可查阅原始专利 WO2021254118A1 以获取详细的合成和表征数据。
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| 分子式 |
C19H21N5OS
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|---|---|
| 分子量 |
367.467941999435
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| 精确质量 |
367.146
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| CAS号 |
2229042-24-2
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| PubChem CID |
122197569
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.7
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| tPSA |
114
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
26
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| 分子复杂度/Complexity |
430
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1(N)=NC=C(C2SC(C3CCNCC3)=NC=2)C=C1OCC1C=CN=CC=1
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| InChi Key |
HSEGDFMLRPWOHH-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H21N5OS/c20-18-16(25-12-13-1-5-21-6-2-13)9-15(10-23-18)17-11-24-19(26-17)14-3-7-22-8-4-14/h1-2,5-6,9-11,14,22H,3-4,7-8,12H2,(H2,20,23)
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| 化学名 |
5-(2-piperidin-4-yl-1,3-thiazol-5-yl)-3-(pyridin-4-ylmethoxy)pyridin-2-amine
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7213 mL | 13.6066 mL | 27.2131 mL | |
| 5 mM | 0.5443 mL | 2.7213 mL | 5.4426 mL | |
| 10 mM | 0.2721 mL | 1.3607 mL | 2.7213 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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