| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The primary molecular targets of HPK1-IN-2 are HPK1 (hematopoietic progenitor kinase-1), Lck (lymphocyte-specific protein tyrosine kinase), and Flt3 (FMS-like tyrosine kinase 3). HPK1 is a serine/threonine kinase that belongs to the Ste20 family of kinases. HPK1 is expressed primarily in hematopoietic cells and plays a critical role as a negative regulator of T cell receptor (TCR) signaling. HPK1 phosphorylates the adaptor protein SLP-76, leading to the recruitment of the ubiquitin ligase Cbl-b and the degradation of SLP-76, thereby attenuating TCR signaling and T cell activation. By inhibiting HPK1, HPK1-IN-2 enhances TCR signaling, promotes T cell proliferation and cytokine production, and enhances antitumor immunity. The compound also inhibits Lck, a tyrosine kinase that is essential for TCR signaling, and Flt3, a receptor tyrosine kinase involved in hematopoiesis. The inhibition of Lck and Flt3 may contribute to the compound's antitumor activity and may also affect its selectivity and toxicity profile.
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| 体外研究 (In Vitro) |
HPK1-IN-2 的体外活性特征在于其对 HPK1 激酶活性的强效抑制。在生化激酶活性测定中，HPK1-IN-2 对 HPK1、Lck 和 Flt3 的抑制 IC50 值均小于 0.05 μM。在细胞实验中，HPK1-IN-2 可增强 T 细胞活化，表现为 IL-2 生成增加、CD69 表达上调以及 T 细胞在 TCR 刺激下的增殖增强。该化合物还能抑制 Flt3 依赖性白血病细胞系的增殖。在免疫细胞实验中，HPK1-IN-2 可促进 CD8+ T 细胞的活化和效应功能，增强其杀伤肿瘤细胞的能力。该化合物对 T 细胞信号通路（包括 SLP-76、ERK 和 AKT 的磷酸化）的影响通过蛋白质印迹法进行评估。该化合物对各种细胞系的细胞毒性 IC50 通常高于 HPK1 抑制 IC50，表明其具有良好的选择性指数。
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| 体内研究 (In Vivo) |
HPK1-IN-2 的体内活性已在动物癌症模型中得到证实。在同源小鼠肿瘤模型（例如，MC38 结肠癌、B16 黑色素瘤或 CT26 结肠癌）中，每日口服 10-50 mg/kg 剂量的 HPK1-IN-2 可抑制肿瘤生长，并增强免疫检查点抑制剂（例如抗 PD-1 和抗 CTLA-4）的抗肿瘤疗效。该化合物的抗肿瘤活性与肿瘤内 T 细胞浸润增加、T 细胞活化增强以及肿瘤微环境中免疫抑制的降低有关。药效学研究表明，HPK1-IN-2 可抑制肿瘤浸润淋巴细胞中的 HPK1 活性，表现为 SLP-76 磷酸化水平降低。该化合物的体内疗效呈剂量依赖性，并可与其他免疫疗法联合使用时增强疗效。该化合物良好的口服生物利用度和药代动力学特征支持其在临床前研究中的应用。
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| 酶活实验 |
使用 HPK1-IN-2 进行体外 HPK1 激酶抑制实验时，采用以下方案：重组 HPK1 激酶在昆虫细胞中表达或从市售产品中购买。激酶活性采用放射性或荧光法测定。实验在 30°C 下进行，反应体系包含 50 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、0.01% Brij-35 和 2 mM DTT。将待测化合物溶解于 DMSO 中，并用实验缓冲液进行系列稀释，最终浓度范围为 0.001 至 1000 nM。将酶（1-10 nM）与化合物预孵育 10-30 分钟。加入ATP（10-100 μM，浓度为HPK1的Km值）和肽底物（例如髓鞘碱性蛋白或特定肽）以启动反应，反应持续30-60分钟。加入EDTA或磷酸终止反应。使用闪烁邻近分析法（SPA）、时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）分析法或放射性磷酸盐掺入法检测磷酸化底物。IC50值通过非线性回归从剂量反应曲线计算得出。为了进行选择性分析，使用其他激酶（Lck、Flt3以及50-100种激酶）进行类似的分析。
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| 细胞实验 |
对于使用 HPK1-IN-2 进行的体外细胞实验，通常采用以下方案：通过密度梯度离心法从健康供体中分离人外周血单核细胞 (PBMC)。使用磁珠阴性选择法纯化 T 细胞。将 T 细胞在含 10% FBS 和抗生素的 RPMI-1640 培养基中，于 37°C、5% CO₂ 条件下培养。将细胞以每孔 1-2 × 10⁵ 个细胞的密度接种于 96 孔板中，并在有或无浓度为 0.001-10 μM 的 HPK1-IN-2 的情况下，用抗 CD3 (1-5 μg/mL) 和抗 CD28 (1-5 μg/mL) 抗体刺激。24-72 小时后，通过 ELISA 检测 IL-2 的产生。使用流式细胞术，通过 [³H]-胸苷掺入或 CFSE 稀释法评估 T 细胞增殖。 CD69 和 CD25 的表达通过流式细胞术进行检测。为了评估 T 细胞杀伤作用，将 CD8+ T 细胞与靶细胞（例如肿瘤细胞）以不同的效应细胞与靶细胞比例进行共培养，并通过 LDH 释放或流式细胞术检测靶细胞裂解情况。为了评估信号通路，裂解细胞后，通过蛋白质印迹法或磷酸化流式细胞术检测 SLP-76 (pSLP-76)、ERK、AKT 和其他信号蛋白的磷酸化水平。
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| 动物实验 |
HPK1-IN-2 的体内动物研究采用以下通用方案：将同源肿瘤细胞（例如，MC38 结肠癌细胞，5 × 10⁵ 个细胞）皮下注射到雌性 C57BL/6 小鼠（6-8 周龄，18-22 g）的侧腹部。当肿瘤体积达到约 50-100 mm³ 时，将小鼠随机分组（每组 n=8-10）。将 HPK1-IN-2 配制成合适的载体（例如，0.5% 甲基纤维素或 10% DMSO、40% PEG400、50% 生理盐水），并以 3、10、30 和 100 mg/kg 的剂量，每日一次或两次口服给药，持续 14-21 天。在联合用药研究中，单独或与 HPK1-IN-2 联合使用抗 PD-1 抗体（10 mg/kg，腹腔注射，每周两次）。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤体积。监测体重以评估毒性。研究结束时，切除肿瘤，称重，并进行流式细胞术（免疫细胞浸润）、免疫组织化学（CD8、CD4、FoxP3）和细胞因子分析。采集血样用于药代动力学分析和免疫参数测定。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
HPK1-IN-2 的药代动力学特性已在临床前研究中得到表征。该化合物具有口服生物利用度，在啮齿动物中的口服生物利用度约为 40-80%。口服给药后 1-3 小时内即可达到血浆峰浓度 (Tmax)。该化合物的分布容积中等（约 1-3 L/kg），表明其可分布于组织中。血浆蛋白结合率为中等至高（70-90%）。在啮齿动物中，其消除半衰期约为 2-6 小时，因此需要每日两次给药才能持续抑制靶点。HPK1-IN-2 主要在肝脏中通过细胞色素 P450 酶 (CYP3A4) 进行代谢，主要途径为氧化代谢，包括羟基化和 N-去烷基化。代谢产物主要经粪便（约 60-70%）和尿液（约 20-30%）排泄。该化合物的药代动力学呈剂量依赖性，高剂量时观察到非线性特征。预计在人体内也具有类似的药代动力学参数，但实际数据将取决于临床试验的结果。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
HPK1-IN-2 的毒性特征已在临床前研究中进行了评估。在啮齿动物毒理学研究中，该化合物在治疗剂量下显示出可接受的耐受性。高剂量下常见的不良反应包括胃肠道紊乱（腹泻、体重减轻）、肝毒性（肝酶升高）和血液学效应（贫血、白细胞减少）。该化合物对 HPK1、Lck 和 Flt3 的作用可能导致靶向毒性，包括对免疫功能和造血功能的影响。小鼠的最大耐受剂量通常为 30-100 mg/kg/天。在临床试验中，HPK1 抑制剂正在癌症患者中评估其安全性和有效性。最常见的不良事件包括疲劳、胃肠道反应和免疫相关不良事件。该化合物的安全性特征与其他免疫调节剂一致。需要进行全面的毒理学研究才能完整地表征该化合物的安全性特征。
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| 其他信息 |
HPK1-IN-2（CAS号：2056122-11-1）是一种强效且口服有效的HPK1抑制剂，IC50值小于0.05 μM。其分子式为C19H20N6OS，分子量为380.46 g/mol。该化合物还能抑制Lck和Flt3，并具有抗肿瘤活性。未来的研究方向可集中于优化其选择性和药代动力学特性，评估其与其他免疫疗法联合应用的疗效，以及将其开发为治疗癌症和炎症性疾病的潜在药物。
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| 分子式 |
C19H20N6OS
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|---|---|
| 分子量 |
380.4667
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| 精确质量 |
380.141
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| CAS号 |
2056122-11-1
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| PubChem CID |
137297852
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| LogP |
1.6
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| tPSA |
119
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
27
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| 分子复杂度/Complexity |
634
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CN1CCN(CC1)C2=CC3=C(C=C2)N=C(N3)C4=C(C5=C(NC4=O)SC=C5)N
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| InChi Key |
WKFZMTSRRQSGEY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H20N6OS/c1-24-5-7-25(8-6-24)11-2-3-13-14(10-11)22-17(21-13)15-16(20)12-4-9-27-19(12)23-18(15)26/h2-4,9-10H,5-8H2,1H3,(H,21,22)(H3,20,23,26)
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| 化学名 |
4-amino-5-[6-(4-methylpiperazin-1-yl)-1H-benzimidazol-2-yl]-7H-thieno[2,3-b]pyridin-6-one
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6283 mL | 13.1416 mL | 26.2833 mL | |
| 5 mM | 0.5257 mL | 2.6283 mL | 5.2567 mL | |
| 10 mM | 0.2628 mL | 1.3142 mL | 2.6283 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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