| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 500μg |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CME/clathrin-mediated endocytosis
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| 体外研究 (In Vitro) |
Ikarugamycin 在 H1299 细胞中的半衰期为 2.7 μM [1]。
Ikarugamycin（IKA）是一种先前发现的抗生素，已被证明可以抑制巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白的摄取。此外，一些研究小组以前曾使用IKA抑制植物细胞系中网格蛋白介导的内吞作用（CME）。然而，IKA的详细特征尚未进行。因此，我们进行了生物化学和显微镜实验，以进一步表征IKA对CME的影响。我们发现IKA在H1299细胞中的IC50为2.7μm，在一组细胞系中急性抑制CME，但不抑制其他内吞途径。尽管与IKA长期孵育具有细胞毒性作用，但对CME的短期抑制作用是可逆的。因此，IKA可以成为探测内吞运输途径的有用工具[1]。 |
| 酶活实验 |
TIRF显微镜[1]
使用稳定表达eGFP CLCa的ARPE-19细胞进行全内反射荧光（TIRF）显微镜观察，并使用安装在配备完美聚焦系统的Ti-Eclipse倒置显微镜上的100×1.49 NA Apo TIRF物镜进行成像。在成像过程中，细胞被维持在缺乏酚红的培养基中，该培养基含有或不含有4µmIkarugamycin（IKA）（对照）。使用像素尺寸为6.5µm的pco edge 5.5 sCMOS相机，以1帧/秒的帧率和150毫秒的曝光时间采集来自不同细胞的延时图像序列。细胞在成像前或未成像前用4µm的伊卡鲁霉素（IKA）处理3小时（对照组），然后立即成像。 使用定制的软件在Matlab（MathWorks）中对CCP动力学进行了图像和数据分析。最新版本的软件将在http://lccb.hms.harvard.edu/software.html. 电子显微镜[1] 撕下[1] 细胞被施加到涂有胶原蛋白的EM网格（碳膜200目金-电子显微镜科学）上，并在正常培养条件下粘附过夜Ikarugamycin（IKA）以所需浓度加入细胞中并孵育3小时，之后洗涤粘附细胞的网格并处理“撕下”图像。用冷PBS（20 mm磷酸钠pH 7.4，150 mm氯化钠）洗涤后，用0.5%（v/v）多聚甲醛（PFA）在PBS中轻轻固定带有粘附细胞的网格2′。然后用PBS和低渗缓冲液（25mm HEPES，pH7.2，含25mm氯化钾和2.5mm乙酸镁）洗涤网格。将低渗缓冲液的最后一次洗涤留在细胞上，使其轻微膨胀10′-15′。然后将网格快速放置在之前涂有聚赖氨酸的盖玻片上，细胞面朝下。当网格被快速地横向拉离盖玻片时，用一小块滤纸吸走水分。然后将网格固定在PBS中的2%（v/v）PFA中10′；在H2O中洗涤3×5′；10′在2%（v/v）戊二醛水溶液中固定；在H2O中洗涤2×5′；1′溶于1%单宁酸（w/v）的H2O溶液中；在H2O中洗涤3×5′；1′溶于1%（w/v）醋酸铀酰中；在H2O中洗涤2×5′。用滤纸片将液滴从网格上吸出，最后将网格放在滤纸上风干，直到成像。 薄切片[1] 将细胞施加到胶原涂层玻璃底皿上，并在正常培养条件下粘附过夜Ikarugamycin（IKA）以所需浓度加入细胞中并孵育3小时。然后用冷PBS洗涤细胞，并在0.1 m二甲胂酸钠缓冲液中的2.5%（v/v）戊二醛中固定。包埋和切片的处理过程如下：在0.1m二甲胂酸钠缓冲液中冲洗三次后，将它们在0.1m的锇缓冲液中后固定1小时。细胞在0.1mm的二甲胂酸酯缓冲液中进行冲洗，并在0.05m的二甲基胂酸钠缓冲液中用0.5%的单宁酸进行30分钟的整体染色。在0.1m缓冲液的1%硫酸钠中冲洗两次后，样品在0.1m和水中分别冲洗三次和五次。然后通过一系列浓度递增的乙醇对样品进行脱水，并渗透和嵌入Embed-812树脂中。在MatTek培养皿中加入足够的树脂，刚好填满孔，并在60°C下聚合。将聚合样品滴入液氮中，使树脂盘从MatTek培养皿的中心弹出。将含有相同样品的两个树脂盘与新鲜的Embed-812夹在一起，单层彼此面对。树脂盘在60°C下聚合过夜，并在Leica Ultracut UCT 6超微切片机上用金刚石刀沿两层细胞的纵轴切片。切片用2%（w/v）醋酸铀酰水溶液和柠檬酸铅进行后染色。 |
| 细胞实验 |
伊卡鲁霉素（IKA）抑制作用[1]
为了抑制Ikarugamycin（IKA）的作用，除了PBS4+含有IKA外，细胞在37°C下在没有（对照）或存在规定浓度的Ikarugamaycin（IK）的情况下预孵育不同的时间点，然后进行如上所述的内化试验。根据制造商的说明，IKA在-20°C下储存在100%二甲基亚砜（DMSO）的1000倍储备溶液中长达2个月。所有实验均在每种条件下以相等的DMSO浓度和DMSO对照进行。 免疫荧光[1] 表达增强型绿色荧光蛋白的ARPE-19细胞，融合了网格蛋白轻链a（eGFP-CLCa）的N端，在玻璃盖玻片上生长过夜，在37°C下在没有（对照）或存在4µm<强>Ikarugamycin（IKA）的情况下预孵育3小时，用PBS洗涤，在室温下在PBS中的4%PFA中固定10分钟，用0.1%Triton X-100渗透2分钟，并进一步用Q-PBS（0.01%皂苷、2%BSA、0.1%赖氨酸，pH7.4）封闭1小时。用PBS洗涤三次后，细胞与Q-PBS中的指定一抗一起孵育。使用推荐的稀释液稀释1小时。用PBS洗涤细胞三次，并进一步用合适的AlexaFluor®标记的二抗孵育1小时。用PBS再洗涤三次后，将样品安装在载玻片上的Fluoromount G上，并使用安装在Ti-Eclipse倒置显微镜上的60×或100×1.49 NA物镜（尼康）进行检查。 细胞活力和胱天蛋白酶3/8/9激活[1] 使用CCK-8计数试剂盒测量细胞存活率/细胞毒性，该试剂盒测量活细胞中的脱氢酶活性。简而言之，在37°C下，用4或32µm的<强>伊卡鲁霉素（IKA）在96孔板中处理1×105个细胞/孔细胞，并按照制造商的说明进行分析。为了与摄取试验并行测量存活率，在与摄取条件相同的条件下以相同的密度接种细胞。 使用蛋白质印迹法评估Caspase-3、-8和-9的激活。简而言之，ARPE-19细胞用4µmIkarugamycin（IKA）处理2、4或8小时，或不处理（对照），用PBS洗涤三次，收获/重新悬浮在200µL还原性Laemmli样品缓冲液中。将细胞裂解物煮沸10分钟，并装载到SDS凝胶上。转移到硝化纤维膜后，用针对以下蛋白质的抗体探测膜：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、-8和-9。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
伊卡鲁加霉素是一种含有四氢吡咯烷-2,4-二酮（吡咯烷-2,4-二酮）环系的聚酮大环内酰胺。它从链霉菌中分离得到，是一种具有抗原生动物和细胞毒活性的抗生素。它可用作抗菌剂、抗原生动物药物、抗肿瘤剂、细胞凋亡诱导剂和细菌代谢产物。它是一种内酰胺、氮杂大环化合物、烯酮、聚酮化合物和有机杂五环化合物。
据报道，伊卡鲁加霉素存在于链霉菌、哈尔滨链霉菌以及其他有相关数据的生物体中。 |
| 分子式 |
C29H38N2O4
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|---|---|
| 分子量 |
478.62302
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| 精确质量 |
478.283
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| 元素分析 |
C, 72.77; H, 8.00; N, 5.85; O, 13.37
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| CAS号 |
36531-78-9
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| PubChem CID |
54680304
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
741.9±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
402.5±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±5.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.604
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| LogP |
5.05
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| tPSA |
95.5
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
1
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
1010
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| 定义原子立体中心数目 |
9
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| SMILES |
CC[C@@H]1[C@@H](C[C@H]2[C@H]1C=C[C@H]3[C@@H]2C[C@@H]/4[C@@H]3C/C=C\C(=O)NCCC[C@H]5C(=O)/C(=C(\C=C4)/O)/C(=O)N5)C
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| InChi Key |
GHXZHWYUSAWISC-KZRBWAKNSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H38N2O4/c1-3-18-16(2)14-22-20(18)10-11-21-19-6-4-8-26(33)30-13-5-7-24-28(34)27(29(35)31-24)25(32)12-9-17(19)15-23(21)22/h4,8-12,16-24,32H,3,5-7,13-15H2,1-2H3,(H,30,33)(H,31,35)/b8-4-,12-9+,27-25-/t16-,17-,18-,19+,20+,21-,22+,23+,24+/m1/s1
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| 化学名 |
(1Z,3E,5S,7R,8R,10R,11R,12S,15R,16S,18Z,25S)-11-ethyl-2-hydroxy-10-methyl-21,26-diazapentacyclo[23.2.1.05,16.07,15.08,12]octacosa-1,3,13,18-tetraene-20,27,28-trione
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| 别名 |
Ikarugamycin; 36531-78-9; (1Z,3E,5S,7R,8R,10R,11R,12S,15R,16S,18Z,25S)-11-ethyl-2-hydroxy-10-methyl-21,26-diazapentacyclo[23.2.1.05,16.07,15.08,12]octacosa-1(2),3,13,18-tetraene-20,27,28-trione; EIA; CHEMBL4283254; CHEBI:75276; MFCD01722005; NSC789948;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0893 mL | 10.4467 mL | 20.8934 mL | |
| 5 mM | 0.4179 mL | 2.0893 mL | 4.1787 mL | |
| 10 mM | 0.2089 mL | 1.0447 mL | 2.0893 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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