| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
LRRK1/Leucine rich repeat kinase 1
IN04 targets leucine-rich repeat kinase 1 (LRRK1), a serine/threonine protein kinase that belongs to the ROCO family. LRRK1 is involved in the regulation of various cellular processes, including vesicle trafficking, cytoskeletal dynamics, and autophagy. By inhibiting LRRK1, IN04 may modulate these cellular processes, making it a potential tool for studying LRRK1-mediated signaling pathways. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
选择IN04进行体外生物学效应评估，以研究其对破骨细胞（OCs）的影响。体外下拉实验表明，16 nM的IN04完全阻断了ATP与hLRRK1 KD的结合。在分化和骨吸收陷窝实验中，虽然IN04处理组和DMSO处理组在骨切片上的破骨细胞数量相当，但IN04处理显著抑制了破骨细胞的骨吸收能力。与DMSO组相比，5 μM和10 μM的IN04分别使骨切片上的骨吸收陷窝面积减少了43%和83%。单个骨吸收陷窝的体积更小、深度更浅。F-肌动蛋白染色显示，DMSO处理组的破骨细胞显示出清晰的肌动蛋白环，并且F-肌动蛋白形成外周封闭区。相比之下，IN04处理组的破骨细胞胞质内F-肌动蛋白排列紊乱，且F-肌动蛋白无法在骨切片上形成封闭区。 IN04 处理对破骨细胞衍生的偶联因子生成和成骨细胞结节形成均无影响。这些数据表明 IN04 是 LRRK1 的强效抑制剂，可抑制破骨细胞功能，但不影响破骨细胞形成 [1]。
使用纯化的 LRRK1 酶进行激酶活性测定，评估 IN04 的体外活性。将该酶与肽底物和 ATP 在不同浓度的化合物存在下孵育。测定磷酸化抑制率，并确定 IC50 值。同时评估该化合物对 LRRK1 相对于其他激酶的选择性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
IN04的体内活性尚未得到广泛报道。作为一种研究化合物，它可用于评估LRRK1相关疾病（例如某些癌症或神经退行性疾病）的动物模型。然而，目前尚无公开的体内数据。
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| 酶活实验 |
体外ATP结合抑制实验[1]
IN04对ATP与hLRRK1 KD结合的抑制作用通过ATP-琼脂糖下拉实验进行评估，操作步骤按照制造商说明（ATP Affpur试剂盒III）。简而言之，首先将50 ng重组hLRRK1 KD与不同浓度的IN04抑制剂（3.2 nM、16 nM、80 nM、0.4 μM和5.0 μM）或等体积的DMSO在500 μl 1×结合缓冲液中于冰上孵育15分钟。孵育后，向反应体系中加入50 μl平衡的ATP-琼脂糖，并在4°C下通过翻转混匀孵育1小时，之后用1×洗涤缓冲液洗涤磁珠4次。蛋白质用 2× LDS 上样缓冲液洗脱，90°C 加热 5 分钟，然后用 10% NuPage Bis-tris 凝胶进行 Western blot 分析，使用抗 6xHis 抗体，方法如前所述。 IN04 的体外检测通常包括使用纯化的重组 LRRK1 进行激酶活性测定。将该酶与肽底物和放射性标记或荧光标记的 ATP 一起孵育。测量磷酸盐掺入底物的量，并根据剂量反应曲线确定 IC50 值。 |
| 细胞实验 |
体外破骨细胞形成[1]
根据制造商的说明，使用磁性CD11b微珠对5周龄C57BL/6J小鼠脾脏中的原代CD11b+单核细胞进行阳性分离。简而言之，将10⁸个脾细胞悬浮于1 ml MACS缓冲液中，用红细胞裂解缓冲液去除红细胞后，加入150 μl CD11b微珠，于4°C孵育15分钟。然后用含0.5% BSA和2 mM EDTA的15 ml PBS洗涤缓冲液洗涤细胞，离心沉淀，并重悬于500 μl洗涤缓冲液中。将细胞悬液上样至置于MACS分离器磁场中的MACS®柱。经3次洗涤并从分离器中取出后，用柱塞洗脱并冲洗磁性标记的CD11b+单核细胞。分离的CD11b+单核细胞在添加了10%胎牛血清（FBS）、青霉素（100单位/ml）、链霉素（100 μg/ml）和M-CSF（20 ng/ml）的α-MEM培养基中，于37°C、5% CO2条件下培养3天，以刺激单核细胞增殖。随后，将细胞置于含有LRRK1抑制剂IN04的培养基中诱导分化。每2天更换一次培养基。通过计数TRAP染色阳性、至少含有三个细胞核的多核细胞来评估破骨细胞生成。使用配备Lieca STP6000显微镜和Image J软件的Lieca Application Suite X软件测量成熟破骨细胞的大小。 IN04的体外细胞实验包括用该化合物处理细胞，并测量其对LRRK1活性和下游信号通路的影响。采用磷酸化特异性抗体，通过蛋白质印迹法检测LRRK1底物的磷酸化水平。细胞增殖和活力则采用MTT或CellTiter-Glo等标准检测方法进行测定。 |
| 动物实验 |
骨吸收陷窝和肌动蛋白环形成实验[1]
将牛皮质骨切片置于48孔板中，并按照先前描述的方法在骨切片上进行细胞分化。将骨切片上的细胞在37°C下用胰蛋白酶消化过夜。用1M氨水超声处理5分钟以进一步去除多核细胞。将风干的骨切片用苏木精染色。检查每个骨切片的整个表面，并使用ImageJ软件量化每个骨切片的总吸收面积。还使用0.66 μm体素尺寸的纳米CT对吸收陷窝进行可视化。分别使用ImageJ软件和TXM Reconstructor软件量化骨切片上的陷窝面积和陷窝深度。骨切片上的细胞还用Alexa Fluor 488标记的鬼笔环肽染色以显示F-肌动蛋白，并用DAPI染色以显示细胞核。使用奥林巴斯 Fluoview 3000 共聚焦显微镜观察肌动蛋白环的形成、密封区和 3D OC 图像。 结节测定[1] 从小鼠股骨和胫骨分离的骨髓基质细胞培养至 80% 汇合度。然后用含有 10 mM β-甘油磷酸钠、50 μg/ml 抗坏血酸和 10% FBS 的矿化培养基处理细胞 24 天。洗涤、固定细胞，并用 40 mM 茜素红（pH 4.2）染色。矿化面积的测量方法如前所述[1]。 IN04 的体内动物实验通常涉及将该化合物施用于 LRRK1 相关的疾病小鼠模型。评估其对疾病进展或相关生物标志物的影响。然而，目前尚无具体的体内数据。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
IN04 的药代动力学数据尚未公开。作为一种研究化合物，需要对其吸收、分布、代谢和排泄 (ADME) 特性进行表征。需要测定口服生物利用度、半衰期和血浆蛋白结合率等参数，以指导后续研发。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
IN04 是一种研究用化合物，不适用于人体。其毒理学特性尚未得到充分研究。在实验室环境中处理该化合物时，应遵循标准安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
由于Lrrk1的三维结构尚未解析，我们以TAK1为模板构建了hLRRK1 KD的三维结构，用于药物筛选。因此，IN04可能抑制TAK1或其他MAPKKK家族成员的酶活性。尽管我们通过排除与其他已知激酶（例如p38 MAP激酶、PKC、GSK、c-Src和B-RAF激酶）相互作用的化合物，并专注于通过破坏细胞骨架重排而非影响破骨细胞分化来抑制破骨细胞活性的化合物，从而最大限度地减少了脱靶效应，但仍需利用KINOMEscan™激酶结合分析和KiNativ™活性酶活性分析等高通量实验方法，进一步表征IN04的激酶选择性。还需要在卵巢切除的骨质疏松小鼠或具有高骨转换率的炎症性骨病小鼠模型中进行体内研究，以证实IN04在不影响骨形成的情况下抑制骨吸收，并确定IN04在治疗骨质疏松症方面是否比双膦酸盐具有更好的药理疗效。我们未来的研究方向是将IN04抑制剂与穿透性寡肽(DSS)6偶联，以靶向骨表面的活性破骨细胞。最后，我们需要解析LRRK1的晶体结构，以优化潜在的LRRK1抑制剂，并进行高通量筛选以获得更具特异性和选择性的抑制剂。[1]
IN04是一种研究化合物，可抑制富含亮氨酸重复激酶1 (LRRK1)。它用于细胞信号传导和潜在的神经退行性疾病的研究。该化合物仅供研究用途，可从多家化学品供应商处获得。 |
| 分子式 |
C20H19N3O6S
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|---|---|
| 分子量 |
429.4464
|
| 精确质量 |
429.099
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| CAS号 |
838816-57-2
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| PubChem CID |
1259183
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| 密度 |
1.39±0.1 g/cm3(Predicted)
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| 折射率 |
1.628
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| LogP |
4.59
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| tPSA |
138
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
|
| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
571
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC=CC=1C(C1C=CC=CC=1)N1CCN(CCOCC(=O)O)CC1
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| InChi Key |
MCQJCSNFOKHYLJ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H19N3O6S/c1-26-15-8-13(9-16(10-15)27-2)18-22-23-20(29-18)30-11-17(24)21-14-6-4-5-12(7-14)19(25)28-3/h4-10H,11H2,1-3H3,(H,21,24)
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| 化学名 |
methyl 3-[[2-[[5-(3,5-dimethoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl]sulfanyl]acetyl]amino]benzoate
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| 别名 |
IN04; IN 04; 838816-57-2; Methyl 3-(2-((5-(3,5-dimethoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)thio)acetamido)benzoate; Methyl3-(2-((5-(3,5-dimethoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)thio)acetamido)benzoate; CBKinase1_012394; CBKinase1_024794; IN-04
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3286 mL | 11.6428 mL | 23.2856 mL | |
| 5 mM | 0.4657 mL | 2.3286 mL | 4.6571 mL | |
| 10 mM | 0.2329 mL | 1.1643 mL | 2.3286 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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