Indo-1 AM

别名: 3-beta-羟基齐墩果酸丙酸酯;4-(6-羧基-2-吲哚基)-4'-甲基-2,2'-(乙烯基二氧)二苯胺-N,N,N',N'-四乙酸四(乙酰氧基甲基)酯;钙荧光探针 Indo 1-AM;钙荧光指示剂-1;钙荧光指示剂吲哚-1 AM酯;钙离子荧光探针INDO-1, AM
目录号: V33803 纯度: ≥98%
钙是人体的重要组成部分。
Indo-1 AM CAS号: 112926-02-0
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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1mg
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产品描述
钙是人体的重要组成部分,通常以钙离子的形式存在于人体内。它大量存在于人体的骨骼和牙齿中,少量存在于血液和组织中。钙对细胞高度敏感,毒性较低。通过增加AM乙酰甲酯,它可以很好地进入细胞,并被细胞内酯酶裂解。之后,它留在细胞内并与钙离子结合产生强烈的荧光。此外,Mag-indo-1/AM和Mag-Fluo-4 AM在一定浓度(通常为5 mM)下可以有效抑制细胞内镁离子的释放。
Indo-1 AM(CAS 112926-02-0),又称 Indo-1 乙酰氧基甲酯,是一种紫外光激发、细胞渗透性荧光钙指示剂。它是 Indo-1 的乙酰氧基甲酯衍生物,使其能够穿过细胞膜。进入细胞后,酯酶会水解 AM 基团,将染料捕获在细胞内,用于钙离子动态的比率测量。
生物活性&实验参考方法
靶点
Indo-1 AM targets intracellular calcium ions (Ca2+). Upon binding to Ca2+, the dye exhibits a shift in its emission spectrum, enabling ratiometric quantification. The AM ester moiety facilitates cell permeability; the dye itself is a Ca2+ chelator with a dissociation constant (Kd) of approximately 250 nM for Ca2+.
体外研究 (In Vitro)
1. Indo-1 AM 工作液的制备 1.1 储备液的制备:提取 Indo-1 AM,并与无水 DMSO 混合,配制成 10 mM 的储备液。注意:建议将 Indo-1 AM 储备液分装后储存于 -20 °C 或 -80 °F。1.2 工作液的特性 使用预先配制的 HBSS 储备液配制 1–10 μM 的 Indo-1 AM 工作液。注意:2. 请根据实际情况调整 Indo-1 AM 工作液的浓度。悬浮细胞染色 (2.1):离心细胞,加入 PBS,然后洗涤两次,每次 5 分钟。细胞密度为 1 × 10⁶/mL。2.2 加入 1 mL Indo-1 AM 工作液。2.3 以 400 g 离心 3–4 分钟,弃去上清液。 2.4 用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟。2.5 将细胞重悬于1 mL HBSS中,然后进行流式细胞术或荧光分析。3. 贴壁细胞染色:3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。3.2 取下盖玻片,用吸管吸取少量细胞。3.3 加入100 μL染料工作液。3.4 吸出染料工作液,用培养基洗涤两到三次,每次5分钟,然后用荧光显微镜观察。
在体外,Indo-1 AM 可作为一种荧光 Ca2+ 指示剂,其激发波长为 340 nm,发射波长为 405 nm(Ca2+ 结合态)和 485 nm(Ca2+ 游离态)。在用 Indo-1 AM 标记的兔心脏中,72% 的染料定位于胞质溶胶,其余部分则与线粒体、微粒体和细胞核相关。
体内研究 (In Vivo)
由于Indo-1 AM是一种用于离体或体外细胞钙测量的荧光探针,而非治疗药物,因此其体内活性数据不适用。它被用于生理学研究,以监测离体组织(包括灌注心脏)中的细胞内钙波动。
酶活实验
由于 Indo-1 AM 是一种荧光探针,而非靶向酶或受体的药理学试剂,因此无需进行体外酶/受体结合试验。该化合物的作用机制涉及钙螯合,结合后荧光发射发生变化,这种变化可通过分光光度法而非结合试验进行表征。
细胞实验
Indo-1 AM 的细胞检测方法包括:将细胞在无血清或低血清培养基中用染料(通常为 1-5 μM)孵育 30-60 分钟,温度为 37℃。洗涤去除细胞外染料后,使用紫外激发光(340-355 nm)通过流式细胞术或荧光显微镜分析细胞。分别在 405 nm(Ca2+ 结合)和 485 nm(Ca2+ 游离)处收集发射光,用于计算细胞内 Ca2+ 浓度的比值。
动物实验
Indo-1 AM不适用于体内动物实验方案。该化合物仅用作研究试剂,用于分离细胞、组织切片或灌注器官中的细胞钙成像。它不用于动物药理学评价。
药代性质 (ADME/PK)
由于Indo-1 AM是一种研究试剂而非治疗药物,因此其药代动力学性质尚未明确。AM酯在细胞内水解为活性形式的Indo-1,后者不透过细胞膜,滞留在细胞内。该化合物通常以粉末形式储存在-20℃下,并避光保存。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
Indo-1 AM 的毒理学数据尚未得到充分表征。作为一种用于细胞检测的荧光探针,其在低微摩尔浓度下通常被认为在典型的实验时间范围内对细胞无毒。请遵守标准的实验室安全预防措施。该化合物仅供研究使用。
参考文献

[1]. Real-Time Fluorescence Measurements of ROS and [Ca2+] in Ischemic / Reperfused Rat Hearts: Detectable Increases Occur only after Mitochondrial Pore Opening and Are Attenuated by Ischemic Preconditioning. PLoS One. 2016 Dec 1;11(12):e01.

[2]. Real-Time Fluorescence Measurements of ROS and [Ca2+] in Ischemic / Reperfused Rat Hearts: Detectable Increases Occur only after Mitochondrial Pore Opening and Are Attenuated by Ischemic Preconditioning. PLoS One. 2016 Dec 1;11(12):e0167300.

[3]. Intracellular diffusion, binding, and compartmentalization of the fluorescent calcium indicators indo-1 and fura-2. Biophys J. 1990 Dec;58(6):1491-9.

其他信息
Indo-1 AM 是一种广泛用于研究的工具,可用于测量各种细胞类型中的细胞内钙动力学。它以高纯度试剂的形式商业化销售,适用于流式细胞术、荧光显微镜和基于酶标仪的钙流检测。与 Fura-2 不同,Indo-1 具有双重发射特性,使其适用于使用单一激发波长进行比率测量。它仅供研究使用,不得用于人体治疗或诊断。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C47H51N3O22
分子量
1009.91474
精确质量
1009.3
CAS号
112926-02-0
PubChem CID
123918
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
密度
1.374g/cm3
沸点
1009.2ºC at 760mmHg
闪点
564.1ºC
蒸汽压
3.2E-28mmHg at 25°C
折射率
1.577
LogP
3.146
tPSA
303.73
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
24
可旋转键数目(RBC)
37
重原子数目
72
分子复杂度/Complexity
1800
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
CAWBRCOBJNWRLK-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C47H51N3O22/c1-28-7-11-39(49(19-43(56)68-23-63-29(2)51)20-44(57)69-24-64-30(3)52)41(15-28)61-13-14-62-42-18-35(37-16-34-8-9-36(17-38(34)48-37)47(60)72-27-67-33(6)55)10-12-40(42)50(21-45(58)70-25-65-31(4)53)22-46(59)71-26-66-32(5)54/h7-12,15-18,48H,13-14,19-27H2,1-6H3
化学名
acetyloxymethyl 2-[4-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-3-[2-[2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]phenyl]-1H-indole-6-carboxylate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9902 mL 4.9509 mL 9.9018 mL
5 mM 0.1980 mL 0.9902 mL 1.9804 mL
10 mM 0.0990 mL 0.4951 mL 0.9902 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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