| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fluorescent probe for labeling of synthetic/endogenous polyP
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| 体外研究 (In Vitro) |
无机多磷酸盐(polyP)是由许多正磷酸盐通过磷酸酐键连接在一起组成的聚合物。最近的研究表明,polyP除了在微生物功能中发挥重要作用外,在包括哺乳动物在内的高等真核生物的病理和生理功能中也发挥着多重重要作用。然而,与微生物相比,哺乳动物细胞中polyP的丰度显著较低,因此其研究提出了实验挑战。在这里,我们提出了新的荧光探针的鉴定,该探针允许在体外特异性标记合成的polyP以及活细胞中的内源性polyP。这些探针(JC-D7,JC-D8)对polyP的标记显示出高选择性,而polyP对许多普遍存在的有机多磷酸盐(尤其是RNA)不敏感。使用这些探针使我们能够实时检测活细胞中溶酶体释放的polyP。此外,我们已经能够检测到帕金森病相关突变细胞中polyP水平的增加[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
使用新的指标,我们已经能够在从帕金森病动物模型获得的脑切片中检测到polyP水平的增加。这一发现证明了探针(JC-D7和JC-D8)在活样本中实际使用的潜力。然而,应注意并为每一组特定的实验条件制定特定的方案[1]。
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| 酶活实验 |
Primary Screening/初始筛查
使用SpectraMax M2平板读取器在96孔板中测量荧光强度。将JC化合物溶解至最终浓度为10μM(20mM HEPES缓冲液,pH 7.4,含有1%(v/v)DMSO),并与不同系列浓度的不同分析物在20mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中孵育。将激发波长设置为390nm,并且记录从450到700nm的发射光谱。通过参考JC化合物在存在和不存在分析物的情况下的最大荧光强度来确定荧光倍数增加率 JC-D7在添加多磷酸盐之前和之后的量子产率分别为0.007和0.38。然而,在不存在和存在多磷酸盐的情况下,JC-D8的量子产率分别为0.008和0.37。由于JC-D7的量子产率比JC-D8相对较低,较早的具有略高的倍数增加[1] 选择性研究[1] 将苯并咪唑鎓化合物转移到Greiner 96孔黑色聚丙烯板(最终浓度为10μM)中,并针对100μg/mL的DNA和RNA、其他分析物:磷酸钠、ATP、AMP、GTP、GMP、CTP和CMP 1mM,肝素钠和polyP在含1%DMSO的20mM HEPES缓冲液(pH=7.4)中为20μg/mL。在SpectraMax M2荧光板读取器上记录荧光光谱,激发波长为390nm(截止波长:420nm),发射波长为450至700nm。 |
| 细胞实验 |
活细胞成像[1]
将SHY-SY5细胞、人皮肤成纤维细胞、果蝇全脑、混合原代脑培养物或急性脑切片在RT下用5μM JC-D7或JC-D8加载在HEPES缓冲盐溶液(HBSS)中30分钟,该溶液由(mM):156 NaCl、3 KCl、2 MgSO4、1.25 KH2PO4、2 CaCl2、10葡萄糖和10 HEPES组成,用NaOH将pH调节至7.35 使用配备有META检测系统和40×浸油物镜的蔡司710 CLSM显微镜获得共聚焦图像。JC-D7/D8荧光在405nm的激发和450nm以上的发射下测定。将照明强度保持在最小值(激光输出的0.1–0.2%),以避免光毒性,并将针孔设置为产生约2μm的光学切片。对于比较不同细胞中荧光水平的实验中的图像,成像设置保持在相同水平。为了更好的视觉表现,选择了不同的假颜色 DAPI-polyP荧光在405nm的激发和480-520nm之间的发射下被检测到。使用蔡司软件对图像进行分析 毒性实验[1] 对于毒性测定,在成像前,将细胞暴露于20μM碘化丙啶(PI)和4.5μM Hoechst 33342(Molecular Probes,Eugene,OR)30分钟。PI被排除在活细胞之外,并在膜完整性丧失后表现出红色荧光,而Hoechst 33342将所有细胞核标记为蓝色。这允许将死亡(红色染色)细胞的数量表达为计数的细胞核总数的一部分。每个实验使用不同的培养物重复四次或更多次。 |
| 动物实验 |
急性脑切片的制备 [1]
所有小鼠实验均符合机构伦理和动物福利标准,并遵守英国内政部相关规定。切片制备采用标准流程,如前所述。简而言之,从20至24周龄的野生型(WT)、PINK1基因敲除(KO)和LRRK2基因敲除(KO)C57BL/6小鼠中制备横向急性脑切片(100–200 μm)。小鼠采用颈椎脱臼法处死,取出脑组织,并立即使用振动切片机(Leica VT1200S)在4 °C下进行切片。切片后置于生理盐水中,在室温(24 °C)下保存约1小时,然后进行成像。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
无机多聚磷酸盐(polyP)是一种由许多正磷酸盐通过磷酸酐键连接而成的聚合物。近期研究表明,polyP除了在微生物功能中发挥重要作用外,还在包括哺乳动物在内的高等真核生物的病理和生理功能中扮演着多种重要角色。然而,由于哺乳动物细胞中polyP的含量远低于微生物,对其进行研究面临着实验上的挑战。本文介绍了一种新型荧光探针的鉴定,该探针能够特异性地标记体外合成的polyP以及活细胞中的内源性polyP。这些探针表现出对polyP标记的高选择性,且对多种普遍存在的有机多聚磷酸盐(尤其是RNA)不敏感。利用这些探针,我们实现了对活细胞溶酶体释放polyP的实时检测。此外,我们还检测到了携带帕金森病相关突变的细胞中polyP水平的升高。[1]
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| 分子式 |
C28H31BRCL2N4O
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|---|---|
| 分子量 |
590.381943941116
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| 精确质量 |
588.105
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| 元素分析 |
C, 56.96; H, 5.29; Br, 13.53; Cl, 12.01; N, 9.49; O, 2.71
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| CAS号 |
1036271-54-1
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| 相关CAS号 |
909715-05-5 (cation);1036271-54-1 (bromide);
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| PubChem CID |
154724048
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| 外观&性状 |
Solid powder
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| tPSA |
63.9Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
10
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| 重原子数目 |
36
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| 分子复杂度/Complexity |
706
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C[N+]1=C(N(C2=CC(=C(C=C21)Cl)Cl)CCCCCC(=O)NCCN)/C=C/C3=CC=CC4=CC=CC=C43.[Br-]
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| InChi Key |
DSNPFMKJUXAPGB-IERUDJENSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C28H30Cl2N4O.BrH/c1-33-25-18-23(29)24(30)19-26(25)34(17-6-2-3-12-27(35)32-16-15-31)28(33)14-13-21-10-7-9-20-8-4-5-11-22(20)21;/h4-5,7-11,13-14,18-19H,2-3,6,12,15-17,31H2,1H3;1H/b14-13+;
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| 化学名 |
1-[5-(2-Amino-ethylcarbamoyl)-pentyl]-5,6-dichloro-3-methyl-2-(2-naphthalen-1-yl-vinyl)-3H-benzoimidazol-1-ium Bromide
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| 别名 |
JC-D7; JC D7; 1-(6-((2-Aminoethyl)amino)-6-oxohexyl)-5,6-dichloro-3-methyl-2-(2-(naphthalen-1-yl)vinyl)-1H-benzo[d]imidazol-3-ium bromide; 1-[5-(2-Amino-ethylcarbamoyl)-pentyl]-5,6-dichloro-3-methyl-2-(2-naphthalen-1-yl-vinyl)-3H-benzoimidazol-1-ium Bromide; N-(2-aminoethyl)-6-[5,6-dichloro-3-methyl-2-[(E)-2-naphthalen-1-ylethenyl]benzimidazol-3-ium-1-yl]hexanamide;bromide; JCD7
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
>10 mM in DMSO
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6938 mL | 8.4691 mL | 16.9382 mL | |
| 5 mM | 0.3388 mL | 1.6938 mL | 3.3876 mL | |
| 10 mM | 0.1694 mL | 0.8469 mL | 1.6938 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。