| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Ribosome rescue pathway [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性:KL-10 是一种小分子核糖体救援抑制剂,具有广谱抗菌活性。 KKL-10 在体外和离体感染过程中对土拉弗拉菌减毒株和全毒株表现出卓越的抗菌活性。在被土拉弗朗西斯感染后的任何时间向巨噬细胞或肝细胞中添加 KKL-10 可以防止细菌进一步增殖。当巨噬细胞在被土拉杆菌感染之前用促炎细胞因子 γ 干扰素刺激时,添加 KKL-10 可使细胞内细菌减少 > 99%,这表明细胞因子诱导的应激和非功能性核糖体救援途径的结合对于土拉杆菌来说是致命的。 .土拉拉人。 KKL-10 对培养的真核细胞没有细胞毒性。因此,KKL-10是抗生素开发的良好先导化合物。激酶测定:对于 MIC 测定,在阳离子调节的 Mueller-Hinton 肉汤 (CAMHB) 中对每种化合物进行三次 2 倍系列稀释,并添加到 96 孔微量滴定板中。每种化合物的储备液均在 100% 二甲基亚砜 (DMSO) 中制备。将 LVS 或 Schu S4 的过夜培养物在 CAMHB 中稀释至 OD600 为 0.05,最终体积为 0.1 ml,然后直接添加到稀释的化合物中。将微量滴定板在 37°C、5% CO2 的加湿培养箱中孵育过夜(约 18 小时)。通过测量 600 nm 处的光密度来监测细菌生长。通过观察化合物阻止光密度显着增加的最低浓度来确定 MIC。为了对暴露于不同浓度的 KKL-10 或 KKL-40 后的土拉弗朗西斯菌进行计数,取出 MIC 测定微量滴定板的内容物并以适当的稀释度涂在巧克力琼脂上。在 37°C 和 5% CO2 下孵育 48 小时后,对菌落进行计数以计算每毫升的 CFU。细胞测定:按照制造商的说明,使用RAW 264.7细胞和乳酸脱氢酶(LDH)释放测定试剂盒(Pierce Biochemicals,美国)进行细胞毒性测定。
体外对土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)的减毒菌株(LVS)和强毒菌株(Schu S4)均表现出极强的抗菌活性。将KKL-10作用于上述菌株24小时后,细菌增殖相较于初始接种量(菌落形成单位/毫升)受到显著抑制,实验包含3个生物学重复,结果以平均值±标准差表示[1] - 当土拉弗朗西斯菌感染巨噬细胞(RAW 264.7细胞、BMDMs)或肝细胞(HepG2细胞)后,在感染周期的任意时间点加入KKL-10,均可阻止细菌进一步增殖。具体而言,在感染LVS的BMDMs和HepG2细胞中,感染后3小时加入KKL-10能有效抑制细胞内细菌生长,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)结合Tukey事后检验进行统计分析[1] - 若巨噬细胞先经促炎细胞因子γ干扰素(IFN-γ)预处理12小时,再感染土拉弗朗西斯菌,感染后3小时加入2.5 μg/ml的KKL-10,可使细胞内细菌减少超过99%,表明细胞因子诱导的应激与核糖体拯救途径受抑制的联合作用对土拉弗朗西斯菌具有致死性[1] - 体外对土拉弗朗西斯菌的减毒菌株(LVS)和强毒菌株(Schu S4)均具有强效抗菌活性。经KKL-10处理24小时后,细菌增殖相较于初始接种量(菌落形成单位/毫升)显著受抑,实验设置3个生物学重复,记录平均值及标准差[2] - KKL-10可在体外抑制土拉弗朗西斯菌感染周期多个阶段的生长。在土拉弗朗西斯菌感染的巨噬细胞(RAW 264.7细胞、BMDMs)或肝细胞(HepG2细胞)中,任意时间点给药均能阻止细菌进一步增殖;在感染LVS的BMDMs和HepG2细胞中,感染后3小时给予KKL-10展现出显著的细胞内抗菌活性,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)结合Tukey事后检验进行统计[2] - 巨噬细胞经IFN-γ预处理12小时后感染土拉弗朗西斯菌LVS,感染后3小时加入2.5 μg/ml的KKL-10,细胞内细菌数量减少超过99%,体现了细胞因子诱导的应激与核糖体拯救途径抑制的协同毒性作用[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
将安乐死的C57小鼠的后腿在髋关节处剥皮并去除,并去除足部和多余的肌肉组织。通过去除每个关节近端的股骨并使用无菌研杵将其在 70 μm 尼龙网过滤器中的 5 ml 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 中压碎,从而释放骨髓。将骨髓添加到锥形管中并在室温下以 400 × g 离心 10 分钟。弃去上清液,并将沉淀重悬于 Dulbeccos 改良 Eagle 培养基 (DMEM)(ThermoFisher,美国)中。将细胞以 4 × 105 个细胞/ml 的密度置于 10 ml 完全巨噬细胞分化培养基(DMEM 加含有巨噬细胞集落刺激因子 [M-CSF] 的 20% L929 细胞上清液)中的 100 mm 培养皿中。在第 1 天和第 3 天向细胞额外补充 5 ml 培养基,并在第 7 天收获骨髓源性巨噬细胞 (BMDM)。
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| 酶活实验 |
对于 MIC 测定,在阳离子调节的 Mueller-Hinton 肉汤 (CAMHB) 中对每种化合物进行三次 2 倍连续稀释,并将其添加到 96 孔微量滴定板中。每种化合物的储备液均在 100% 二甲基亚砜 (DMSO) 中制备。将 LVS 或 Schu S4 的过夜培养物在 CAMHB 中稀释至 OD600 为 0.05,最终体积为 0.1 ml,然后直接添加到稀释的化合物中。将微量滴定板在 37°C、5% CO2 的加湿培养箱中孵育过夜(约 18 小时)。通过测量 600 nm 处的光密度来监测细菌生长。通过观察化合物阻止光密度显着增加的最低浓度来确定 MIC。为了对暴露于不同浓度的 KKL-10 或 KKL-40 后的土拉弗朗西斯菌进行计数,取出 MIC 测定微量滴定板的内容物并以适当的稀释度涂在巧克力琼脂上。在 37°C 和 5% CO2 下孵育 48 小时后,对菌落进行计数以计算每毫升的 CFU。
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| 细胞实验 |
按照制造商的说明,使用 RAW 264.7 细胞和乳酸脱氢酶 (LDH) 释放测定试剂盒(Pierce Biochemicals,美国)进行细胞毒性测定。
土拉弗朗西斯菌培养物抗菌活性实验:将土拉弗朗西斯菌菌株(LVS和Schu S4)与KKL-10共孵育24小时,孵育结束后对细菌进行计数,以评估KKL-10对细菌生长的抑制作用。以初始细菌接种量(菌落形成单位/毫升)作为参照,每个实验设置3个生物学重复,计算平均值和标准差,结果以误差棒表示[1] - 不同细胞类型内感染抑制实验:巨噬细胞(RAW 264.7细胞、BMDMs)和肝细胞(HepG2细胞)感染土拉弗朗西斯菌LVS后,在感染后的不同时间点(特定细胞类型实验中为感染后3小时)加入KKL-10。在指定时间点处理细胞并定量细胞内细菌数量,以评估KKL-10对宿主细胞内细菌增殖的抑制效果。每天进行3次独立感染实验,实验至少在3个不同日期重复,以确保结果可重复性,展示某一天的代表性数据,误差棒表示标准差[1] - IFN-γ预处理联合感染实验:巨噬细胞(RAW 264.7细胞、BMDMs)经IFN-γ预处理12小时后,感染土拉弗朗西斯菌LVS,感染后3小时加入浓度为2.5 μg/ml的KKL-10。通过平板计数法对细胞内细菌进行定量,采用单因素方差分析(ANOVA)结合Tukey事后检验分析差异显著性。每个数据点为同一天3次独立感染实验的平均值,误差棒表示标准差,实验至少在3个不同日期重复[1] - 巨噬细胞细胞毒性实验:RAW 264.7细胞接受两种KKL-10处理方案:预处理45分钟,或持续暴露于2.5 μg/ml的KKL-10中24小时。采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评估细胞毒性,以1×裂解缓冲液作为阳性对照。此外,RAW 264.7细胞经KKL-10预处理指定时间后,洗去药物并感染土拉弗朗西斯菌LVS,通过平板计数法分析KKL-10预处理对细菌感染的影响。每个实验当天设置3个独立重复,报告平均值及标准差,实验至少在3个不同日期重复以确认结果一致性[1] - 土拉弗朗西斯菌培养物抗菌活性实验:将土拉弗朗西斯菌菌株(LVS和Schu S4)用KKL-10处理24小时,通过细菌计数评估KKL-10的生长抑制作用,以初始细菌接种量(菌落形成单位/毫升)为基线。实验设置3个生物学重复,结果以平均值±标准差表示[2] - 多感染阶段细胞内感染抑制实验:巨噬细胞感染土拉弗朗西斯菌LVS后,在不同时间点给予KKL-10,监测抑制剂加入后细胞内细菌的生长曲线,以确认KKL-10特异性抑制巨噬细胞内细菌增殖,且不干扰细胞正常生理过程。每个数据点为同一天3次独立感染实验的平均值,误差棒表示标准差,实验至少在3个不同日期重复,展示代表性数据[2] - 特定细胞类型内生长抑制实验:BMDMs和HepG2细胞感染土拉弗朗西斯菌LVS后,感染后3小时加入KKL-10,在合适时间点定量细胞内细菌数量,评估KKL-10的抑制效果。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)结合Tukey事后检验确定差异显著性,每个实验当天进行3次,报告标准差,实验至少在3个不同日期重复[2] - IFN-γ预处理联合感染实验:BMDMs经IFN-γ预处理12小时后感染土拉弗朗西斯菌LVS,感染后3小时加入2.5 μg/ml的KKL-10,通过平板计数法定量细胞内细菌。采用单因素方差分析(one-way ANOVA)结合Tukey事后检验进行统计分析,每个数据点为同一天3次独立感染实验的平均值,误差棒表示标准差,实验至少在3个不同日期重复[2] - 巨噬细胞毒性评估实验:RAW 264.7细胞要么经KKL-10预处理45分钟,要么持续暴露于2.5 μg/ml的KKL-10中24小时,采用LDH释放实验检测细胞毒性,以1×裂解缓冲液作为阳性对照。此外,RAW 264.7细胞经KKL-10预处理指定时间后,洗去药物并感染土拉弗朗西斯菌LVS,通过平板计数法分析细菌感染水平。每个实验当天设置3个独立重复,报告平均值及标准差,实验至少在3个不同日期重复以确保可靠性[2] |
| 动物实验 |
C57小鼠
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
KKL-10 对培养的真核细胞无细胞毒性。通过对 RAW 264.7 细胞进行 LDH 释放试验验证了这一点。RAW 264.7 细胞预先用 KKL-10 处理 45 分钟,或暴露于 2.5 μg/ml 的 KKL-10 中 24 小时,均未观察到明显的细胞毒性 [1]。KKL-10 对巨噬细胞(RAW 264.7 细胞)也无细胞毒性作用。LDH 释放试验证实,KKL-10 预处理 45 分钟或暴露于 2.5 μg/ml 的 KKL-10 中 24 小时均未诱导细胞毒性 [2]。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
KKL-10 是一种具有恶二唑化学结构的核糖体拯救小分子抑制剂[1]
- 核糖体拯救是土拉弗朗西斯菌在其感染周期所有阶段生长所必需的途径,KKL-10 通过靶向该途径发挥其抗菌作用。细胞因子(IFN-γ)诱导的应激和KKL-10介导的核糖体拯救途径抑制相结合,对土拉弗朗西斯菌(F. tularensis)是致命的[1] - 由于KKL-10对土拉弗朗西斯菌(包括减毒株和毒株)具有强大的抗菌活性,能够在所有感染阶段抑制细菌生长,并且对真核细胞无细胞毒性,因此被认为是一种有前景的抗生素先导化合物[1] - KKL-10属于小分子核糖体拯救抑制剂,具有恶二唑化学结构[2] - 土拉弗朗西斯菌的核糖体拯救途径对其整个感染周期的生长至关重要,KKL-10通过抑制该途径发挥其抗菌活性。 IFN-γ诱导的宿主细胞应激与KKL-10治疗之间的协同作用可显著降低细胞内弗朗西斯菌的数量[2]。KKL-10是一种潜在的新型抗生素先导化合物,因为它对减毒和强毒弗朗西斯菌菌株均具有强大的抗菌活性,能够在感染的各个阶段抑制细菌生长,并且对真核细胞无细胞毒性[2]。 |
| 分子式 |
C14H10BRN3O2S
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|---|---|---|
| 分子量 |
364.22
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| 精确质量 |
362.97
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| 元素分析 |
C, 46.17; H, 2.77; Br, 21.94; N, 11.54; O, 8.79; S, 8.80
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| CAS号 |
952849-76-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
16854524
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| 外观&性状 |
2934.99.9001
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| LogP |
4
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| tPSA |
96.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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|
| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
379
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
QKSDWSBGDVYRKQ-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H10BrN3O2S/c1-8-2-4-9(5-3-8)13-17-18-14(20-13)16-12(19)10-6-7-11(15)21-10/h2-7H,1H3,(H,16,18,19)
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| 化学名 |
5-bromo-N-(5-(p-tolyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)thiophene-2-carboxamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 2.78~3 mg/mL ( 7.63 ~8.23 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7456 mL | 13.7280 mL | 27.4559 mL | |
| 5 mM | 0.5491 mL | 2.7456 mL | 5.4912 mL | |
| 10 mM | 0.2746 mL | 1.3728 mL | 2.7456 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
KKL-40 and KKL-10 inhibit growth ofF. tularensisin culture.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. th> |
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KKL-40 and KKL-10 inhibitF. tularensisgrowth at multiple stages of the infection cycle.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. td> |
KKL-10 and KKL-40 inhibit intracellular growth of LVS in different cell types.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. td> |
KKL-10 and KKL-40 do not show cytotoxic effects on macrophages.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. th> |
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Effects of KKL-10 and KKL-40 on LVS in macrophages prestimulated for 12 h with IFN-γ.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. td> |
Chemical structures of small-molecule ribosome rescue inhibitors. KKL-10, KKL-22, KKL-35, and KKL-40 are oxadiazoles, and KKL-55 has a related tetrazole structure.Antimicrob Agents Chemother.2016 May 23;60(6):3276-82. td> |