(Leu31,Pro34)-Neuropeptide Y (porcine)   中文名称: [亮氨酸31,脯氨酸34]-神经肽Y,人,猪

Y1 receptor (IC50 = 3.8 nM for displacing [125I-Tyr36]NPY in SK-N-MC cells; Kd = 5.5 nM in saturation binding) [1]
NPY Y1 receptor (agonist) [2]

在表达Y1受体的SK-N-MC细胞中，猪源[Leu31,Pro34]神经肽Y能够置换[125I-Tyr36]单碘-NPY，IC50值为3.8 nM，与NPY的效力几乎相当。在表达Y2受体的SMS-KAN细胞中，其效力则降低了约1000倍（IC50 > 100 nM）。使用[125I-Tyr36]单碘-[Leu31,Pro34]神经肽Y（猪源）进行饱和结合实验，在SK-N-MC细胞上测得其Kd值为5.5 nM，Bmax值为2.3×10^5个结合位点/细胞。 [1]在用Fura-2加载的SK-N-MC细胞中，[Leu31,Pro34]神经肽Y（猪源）（100 nM）引起细胞质游离钙浓度([Ca2+]i)的瞬时升高，与NPY类似，而C端片段NPY-(16-36)则没有这种作用。[1]

[Leu31,Pro34]-神经肽Y（猪）可替代放射性标记的NPY，用于多种人类神经母细胞瘤细胞系和表达Y1受体的PC-12大鼠细胞[1]。在麻醉大鼠中，静脉注射[Leu31,Pro34]神经肽Y（猪）（0.25、2.5、25 nmol/kg）可引起动脉血压剂量依赖性升高。其引起血管收缩的效力约为NPY的5倍（0.25和2.5 nmol/kg时P < 0.05）。同时观察到心率下降。在最高剂量（25 nmol/kg）下，血压短暂升高后出现持续性低血压。 [1] 在大鼠中，单侧杏仁核内注射猪源性神经肽Y（[Leu31,Pro34]Neuropeptide Y (porcine)）（5 和 10 nM）显著增加了高架十字迷宫（EPM）测试中进入开放臂的时间百分比和次数，表明其具有抗焦虑样作用。预先注射α-MSH（250 ng）可逆转这些作用，并且与亚有效剂量的MC4-R拮抗剂HS014（1 nM）具有协同作用。未观察到对进入封闭臂次数的显著影响，排除了运动功能改变的可能性。[2]

使用人神经母细胞瘤细胞系（Y1 用 SK-N-MC 细胞，Y2 用 SMS-KAN 细胞）和大鼠 PC-12 细胞进行受体结合实验。将细胞在聚赖氨酸-丙氨酸 (poly(Lys-Ala)) 包被的 6 孔板中预培养 2 天。竞争性结合实验中，每孔加入 1.2×10⁶ 个细胞，并加入 50,000 cpm 的放射性配体（[¹²⁵I-Tyr³⁶]单碘-NPY 或 [¹²⁵I-Tyr³⁶]单碘-[Leu³¹,Pro³⁴]神经肽 Y（猪源），比活度约为 1900 Ci/mmol）和不同浓度的未标记肽，在 1 ml 终体积中于 37°C 孵育 60 分钟。非特异性结合在 1 μM NPY 存在下测定。孵育后，用冷缓冲液洗涤细胞三次，用 0.5 M NaOH 裂解细胞，并进行计数。IC50 值由置换曲线计算得出。饱和结合实验采用低比活度（18 Ci/fmol）的放射性配体。解离常数 (Kd) 计算为 5.5 nM。[1]

使用荧光探针Fura-2测定细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)。收集SK-N-MC细胞，洗涤后重悬于3×10^6个细胞/ml的浓度下。将Fura-2乙酰甲酯（由1 mM二甲基亚砜储备液配制而成）加入到终浓度为2.5 μM的溶液中，并在室温下避光孵育30分钟。离心后，将细胞重悬于含150 mg/L牛血清白蛋白的Hepes缓冲液（145 mM NaCl、5 mM KCl、1 mM MgSO4、10 mM葡萄糖、10 mM Hepes，pH 7.4）中，细胞浓度为2.5×10^6个细胞/ml。在37℃下，通过轻柔搅拌保持细胞悬浮，使用荧光分光光度计测定Fura-2荧光强度，激发波长为340 nm，发射波长为500 nm。 [Ca2+]i 是根据 Grykiewicz 等人 [1] 的方法计算的。

[1] 动物实验方案：选用非禁食的雌性Sprague-Dawley大鼠（190-210 g），用戊巴比妥钠麻醉。在右侧颈静脉置入导管，用于静脉注射测试化合物。在颈动脉置入另一根导管，连接血压传感器。对气管进行插管以辅助呼吸。持续记录血压和心率。心血管稳定后，每只大鼠以10分钟的间隔依次接受0.25、2.5和25 nmol/kg的肽。当测试猪源性神经肽Y（[Leu31,Pro34]NPY）时，在实验结束时额外给予NPY（2.5 nmol/kg）。肽溶于1 mM乙酸，并在注射前立即用0.05 M磷酸钠缓冲液稀释，以获得1 ml/kg的剂量体积。 [1][2] 动物实验方案：雄性Sprague-Dawley大鼠（220-250 g）用硫喷妥钠（40 mg/kg，腹腔注射）麻醉后，固定于立体定位仪上。使用以下坐标：后方2.3 mm，中线外侧4.5 mm，前囟下方8.0 mm，将一根永久性22号不锈钢导管单侧植入右侧杏仁核。导管用牙科水泥和固定螺钉固定。术后恢复7天后，大鼠开始适应操作。将[Leu31,Pro34]猪源神经肽Y溶解于人工脑脊液（aCSF，pH 7.4，含0.1%牛血清白蛋白）中，通过33号微量注射套管以1 μl的体积在1分钟内注射，该套管向下延伸0.5 mm。注射套管在原位停留1分钟以利于药物扩散。末次注射后15分钟，对大鼠进行高架十字迷宫（EPM）测试，持续5分钟，并记录大鼠进入开放臂和封闭臂的次数和停留时间。[2]

[1]. [Leu31, Pro34]neuropeptide Y: a specific Y1 receptor agonist. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jan;87(1):182-6.

[2]. Interaction between neuropeptide Y and alpha-melanocyte stimulating hormone in amygdala regulates anxiety in rats. Brain Res. 2005 May 10;1043(1-2):107-14.

[Leu31,Pro34]猪源神经肽Y是一种基于PP折叠结构的合成NPY类似物。在34位引入脯氨酸（来自胰多肽）被认为是其差异性受体结合的关键结构变化。与NPY-(13-36)不同，它不与Y2受体结合。该类似物可用于NPY受体亚型的放射自显影定位，并用于确定Y1和Y2受体在NPY生物效应中的相对重要性。[1]在杏仁核中，[Leu31,Pro34]猪源神经肽Y作为Y1受体激动剂，产生类似抗焦虑的作用，这种作用可被α-MSH通过黑皮质素-4受体（MC4-R）拮抗。抗焦虑作用可能是由于抑制内源性POMC衍生物的释放所致。该类似物的亚有效剂量与 MC4-R 拮抗剂 HS014 联合给药可产生协同抗焦虑作用，这可能是通过协同抑制腺苷酸环化酶活性实现的。[2]

C190H286N54O56

4222.63208246231

4222.125

125580-28-1

90479761

White to off-white solid powder

-14

1780

61

63

131

300

10500

37

O=C([C@H](CCCCN)NC([C@H](CO)NC([C@@H]1CCCN1C([C@H](CC1C=CC(=CC=1)O)N)=O)=O)=O)N1CCC[C@H]1C(N[C@@H](CC(=O)O)C(N[C@@H](CC(N)=O)C(N1CCC[C@H]1C(NCC(N[C@H](C(N[C@@H](CC(=O)O)C(N[C@@H](C)C(N1CCC[C@H]1C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(N[C@@H](C)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(N[C@@H](CC1C=CC(=CC=1)O)C(N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(N[C@@H](CC(N)=O)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(N1CCC[C@H]1C(N[C@H](C(N[C@H](C(N)=O)CC1C=CC(=CC=1)O)=O)CCCNC(=N)N)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)CC1C=CC(=CC=1)O)=O)CC1C=CC(=CC=1)O)=O)CCCNC(=N)N)=O)C)=O)CC(C)C)=O)CC(=O)O)=O)CCC(=O)O)=O)C)=O)=O)=O)=O)CCC(=O)O)=O)=O)=O)=O)=O

ZNBZLZXDILRJJT-CCPZSHQESA-N

InChI=1S/C190H286N54O56/c1-16-96(10)150(180(294)234-130(82-142(193)253)168(282)225-124(74-94(6)7)164(278)226-125(75-95(8)9)171(285)239-151(101(15)247)181(295)221-120(32-22-66-208-190(202)203)185(299)243-70-26-36-140(243)177(291)219-116(31-21-65-207-189(200)201)156(270)222-121(152(195)266)77-103-40-50-109(249)51-41-103)238-172(286)128(80-106-46-56-112(252)57-47-106)229-167(281)129(81-107-87-204-91-210-107)230-158(272)115(30-20-64-206-188(198)199)218-163(277)123(73-93(4)5)223-155(269)98(12)212-173(287)135(89-245)236-166(280)127(79-105-44-54-111(251)55-45-105)228-165(279)126(78-104-42-52-110(250)53-43-104)227-157(271)114(29-19-63-205-187(196)197)216-153(267)97(11)211-161(275)122(72-92(2)3)224-169(283)132(85-148(262)263)232-160(274)118(59-61-146(258)259)217-154(268)99(13)213-176(290)138-34-24-67-240(138)182(296)100(14)214-162(276)131(84-147(260)261)231-159(273)117(58-60-145(256)257)215-144(255)88-209-175(289)137-33-23-69-242(137)186(300)134(83-143(194)254)235-170(284)133(86-149(264)265)233-178(292)141-37-27-71-244(141)184(298)119(28-17-18-62-191)220-174(288)136(90-246)237-179(293)139-35-25-68-241(139)183(297)113(192)76-102-38-48-108(248)49-39-102/h38-57,87,91-101,113-141,150-151,245-252H,16-37,58-86,88-90,191-192H2,1-15H3,(H2,193,253)(H2,194,254)(H2,195,266)(H,204,210)(H,209,289)(H,211,275)(H,212,287)(H,213,290)(H,214,276)(H,215,255)(H,216,267)(H,217,268)(H,218,277)(H,219,291)(H,220,288)(H,221,295)(H,222,270)(H,223,269)(H,224,283)(H,225,282)(H,226,278)(H,227,271)(H,228,279)(H,229,281)(H,230,272)(H,231,273)(H,232,274)(H,233,292)(H,234,294)(H,235,284)(H,236,280)(H,237,293)(H,238,286)(H,239,285)(H,256,257)(H,258,259)(H,260,261)(H,262,263)(H,264,265)(H4,196,197,205)(H4,198,199,206)(H4,200,201,207)(H4,202,203,208)/t96-,97-,98-,99-,100-,101+,113-,114-,115-,116-,117-,118-,119-,120-,121-,122-,123-,124-,125-,126-,127-,128-,129-,130-,131-,132-,133-,134-,135-,136-,137-,138-,139-,140-,141-,150-,151-/m0/s1

(4S)-4-[[2-[[(2S)-1-[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-carboxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ≥ 100 mg/mL (~23.68 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。