| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
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| 250mg |
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| 靶点 |
GARFT (Ki = 6.5 ± 1.1 nM) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
LY309887 对人叶酸受体 (FR)α 和 FRβ 具有高亲和力（Ki 值分别为 1.78 nM 和 18.2 nM），并且是甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶 (GARFT) 的强效抑制剂，对人 GARFT 的 Ki 值为 6.5 nM。LY309887 对人白血病细胞系 CCRF-CEM 表现出显著的细胞毒性，IC50 值为 9.9 nM[1]。
LY309887 对 CCRF-CEM 人白血病细胞表现出强效的细胞毒性，IC50 值为 2.89 nM，其效力约为洛美曲索 (IC50 = 9.93 nM) 的三倍。 [1] 在培养基中加入次黄嘌呤 (100 μM) 可完全抑制LY309887的细胞毒活性，表明其选择性抑制嘌呤从头合成。单独使用胸苷 (5 μM) 不会改变其细胞毒活性，而次黄嘌呤与胸苷联合使用与单独使用次黄嘌呤的效果相同。[1] 在较高浓度的LY309887中加入AICA (300 μM) 后，细胞毒活性并未完全抑制，提示LY309887除了抑制GARFT外，还抑制AICA-核糖核苷酸甲酰转移酶。[1] LY309887对重组单功能人GARFT的抑制常数Ki为6.5 nM（强结合抑制）。 [1] LY309887是叶酸多聚谷氨酸合成酶（FPGS）的底物，其一级反应速率常数（k' = 43）低于洛美曲索（k' = 60）。体外多聚谷氨酸化：将LY309887与FPGS和14C-谷氨酸孵育24小时，得到90 pmol的LY309887多聚谷氨酸，其中三聚谷氨酸（58%）、四聚谷氨酸（35%）和五聚谷氨酸（7%）存在。 [1] LY309887 对叶酸受体亚型的亲和力：FRα Ki = 1.78 ± 0.18 nM，FRβ Ki = 18.2 ± 4.4 nM，β/α 选择性比为 10.5，是洛美曲索 (β/α = 5.0) 的两倍。[1] LY309887 的三谷氨酰化形式（以 6R,S-非对映异构体混合物 LY254155 的形式）对 GARFT 的抑制作用 Ki 为 0.25 ± 0.2 nM，比其单谷氨酰化母体 (Ki = 2.1 nM) 强 10 倍。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带C3H乳腺癌细胞的小鼠中，腹腔注射LY309887（3 mg/kg–100 mg/kg）可完全抑制肿瘤的形成[1]。
针对C3H乳腺小鼠肿瘤：从肿瘤植入后第二天开始，每隔三天腹腔注射一次LY309887，共注射四次（q3d×4），在3 mg/kg至100 mg/kg的剂量范围内，肿瘤生长抑制率达100%，且在所有研究剂量下死亡率均低于20%。相比之下，洛美曲索需要100 mg/kg的剂量才能达到60%以上的抑制率。 [1] 针对PANC-1人胰腺异种移植瘤：LY309887（腹腔注射，每3天一次，共4次）在1 mg/kg剂量下抑制率为65%，在30 mg/kg剂量下抑制率为92%。最高耐受剂量为30 mg/kg；9只小鼠中有7只在100 mg/kg剂量下死亡。[1] 针对BxPC3胰腺异种移植瘤：LY309887（6R-非对映异构体）在40 mg/kg剂量下（每3天一次，共4次）可抑制87%的肿瘤生长，而洛美曲索在50 mg/kg剂量下（每2天一次，共5次）可抑制59%的肿瘤生长。 [1] 针对结肠异种移植瘤：LY309887 (6R) 以 40 mg/kg (q3d×4) 的剂量可抑制 CX-1 64%；以 30 mg/kg (q3d×4) 的剂量可抑制 GC3 95%、HC1 97% 和 VRC5 86%。[1] 针对 LX-1 肺异种移植瘤：LY309887 (6R) 以 10 mg/kg (q3d×4) 的剂量可抑制 98%。[1] 针对 MX-1 乳腺异种移植瘤：LY309887 (6R) 以 10 mg/kg (q3d×4) 的剂量可抑制 52%。 [1] LY309887在一系列人类异种移植肿瘤中表现出广谱抗肿瘤活性，并且在所有测试模型中都比洛美曲索更有效。[1] |
| 酶活实验 |
重组单功能人GARFT用于酶抑制测定。化合物溶于DMSO，并用适当的缓冲液稀释。采用Habeck等人[16]详述的Morrison方程评估紧密结合抑制。计算Ki值。[1]
FPGS激活测定：测定猪肝叶酸多聚谷氨酸合成酶（FPGS）活性。反应混合物包含100 mM Tris、10 mM MgCl2、5 mM ATP、20 mM KCl、100 μg/ml牛血清白蛋白、100 mM β-巯基乙醇、1 mM [14C]-L-谷氨酸、1 μM底物（LY309887或洛美曲索）和2 μg半纯化猪肝FPGS，pH 8.9，最终体积为0.25 ml。孵育温度为 37°C，孵育时间为 24 小时。反应通过煮沸 3 分钟终止，然后离心。聚谷氨酸通过反相高效液相色谱法 (HPLC) 分离。计算了 Km、Vmax 和一级反应速率常数 (k' = Vmax/Km)。对于 LY309887，Km = 6.5 ± 1.1 μM，Vmax = 86 ± 11 μmol/hr/mg，k' = 43。[1] 叶酸受体结合试验：按照 Habeck 等人 [16] 描述的方法评估化合物对 FRα（来自人 KB 细胞膜）和 FRβ（来自人肝细胞膜）的亲和力。测定了化合物置换放射性标记叶酸的能力，并确定了 Ki 值。对于LY309887，FRα Ki = 1.78 ± 0.18 nM，FRβ Ki = 18.2 ± 4.4 nM。[1] |
| 细胞实验 |
CCRF-CEM 人白血病细胞在添加了 10% 透析胎牛血清和 25 mM HEPES 缓冲液的 RPMI-1640 培养基中以悬浮培养形式培养。在细胞毒性试验中，绘制剂量反应曲线以确定抑制细胞生长 50% 所需的浓度 (IC50)。将细胞暴露于不同浓度的 LY309887 中，并计算 IC50 值。[1]
逆转研究：在 AICA (300 μM)、胸苷 (5 μM)、次黄嘌呤 (100 μM) 或胸苷联合次黄嘌呤存在的情况下测定 LY309887 的 IC50 值。结果表明，次黄嘌呤可完全逆转细胞毒性，单独使用胸苷无效，而 AICA 在较高药物浓度下仅能部分逆转细胞毒性。 [1] |
| 动物实验 |
本研究使用雌性C3H小鼠（用于同源乳腺肿瘤模型）和CD1 nu/nu小鼠（用于人源异种移植瘤模型），研究开始时体重约为20-25 g。肿瘤通过将1-3 mm的肿瘤组织块经皮下植入腋窝套管针进行连续传代培养而建立。C3H乳腺肿瘤模型在肿瘤植入后1天开始给药；异种移植瘤模型在肿瘤植入后7天开始给药（HC1结肠肿瘤模型为14天）。LY309887溶于水或0.9%氯化钠溶液中，必要时添加碳酸氢钠以提高溶解度。采用间歇给药方案：每3天腹腔注射一次，共4次（q3d×4）。作为对照，洛美曲索的给药方案为q2d×5或q3d×4。使用电子游标卡尺测量肿瘤尺寸，肿瘤重量（mg）计算公式为（肿瘤宽度，mm）² ×（肿瘤长度，mm）× 0.5。肿瘤生长抑制率计算公式为（1 -（治疗组重量 / 对照组重量））× 100。对于 C3H 乳腺肿瘤研究，在最后一次治疗后的第二天测量肿瘤；对于异种移植瘤，在最后一次治疗后的 5-6 天进行测量。每项研究每组使用 7-10 只小鼠。[1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
LY309887是叶酸多聚谷氨酸合成酶 (FPGS) 的底物，其 Km = 6.5 μM，Vmax = 86 μmol/hr/mg，一级反应速率常数 k' = 43，低于洛美曲索 (k' = 60)，表明在低底物浓度下，其多聚谷氨酸化效率较低。[1]
体外多聚谷氨酸化：与 FPGS 和 14C-谷氨酸孵育 24 小时后，LY309887生成了三聚谷氨酸 (58%)、四聚谷氨酸 (35%) 和五聚谷氨酸 (7%)，总计 90 pmol 多聚谷氨酸，而洛美曲索则生成了更多种类的多聚谷氨酸（三聚谷氨酸、四聚谷氨酸和五聚谷氨酸分别为 40%、39% 和 21%）。 [1] 小鼠肝脏体内蓄积：静脉注射等摩尔放射性标记的LY309887的小鼠，在7天内肝脏中总化合物蓄积量比洛美曲索低1.8至6倍，具体数值取决于膳食叶酸水平。LY309887主要以五谷氨酸盐和六谷氨酸盐的形式存在，而洛美曲索在低叶酸饮食下则形成七谷氨酸盐和八谷氨酸盐。[1] LY309887的三谷氨酸盐对GARFT的活性（Ki = 0.25 nM）比单谷氨酸盐（Ki = 2.1 nM）高10倍。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在C3H乳腺肿瘤疗效研究中，LY309887剂量为3至100 mg/kg（腹腔注射，每3天一次，共4次）时，所有研究剂量下的致死率均低于20%。[1]
在PANC-1异种移植瘤研究中，LY309887的最高耐受剂量为30 mg/kg（腹腔注射，每3天一次，共4次）；在100 mg/kg剂量下，9只小鼠中有7只死亡。[1] 基于其较低的多聚谷氨酸化水平和对叶酸受体较低的亲和力，LY309887的预期毒性低于洛美曲索。洛美曲索在I期临床试验中引起了延迟性累积毒性，促使人们开发出LY309887作为具有更佳毒理学特性的第二代抑制剂。 [1] 在低叶酸饮食的小鼠中，与LY309887（五聚谷氨酸和六聚谷氨酸）相比，洛美曲索的积累更为广泛，并形成更长链的多聚谷氨酸（七聚谷氨酸和八聚谷氨酸），这表明LY309887的组织滞留和毒性潜力较低。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
LY309887（6R-2',5'-噻吩基-5,10-二氮杂四氢叶酸）是一种第二代抗叶酸药物，其靶点为甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰转移酶（GARFT）。该药物的研发源于对第一代GARFT抑制剂洛美曲索（lometrexol）的临床观察，发现其具有延迟累积毒性。[1] 作用机制：LY309887通过抑制GARFT，阻断嘌呤从头合成途径，使细胞缺乏DNA和RNA合成所需的AMP和GMP，尤其对快速增殖的肿瘤细胞具有显著影响。[1] LY309887抑制GARFT的效力是洛美曲索的9倍，并且在体内对包括结肠癌、肺癌、乳腺癌和胰腺癌在内的多种人类异种移植瘤均表现出优异的抗肿瘤活性。 [1]
与洛美曲索相比，该化合物的噻吩环结构发生了改变，这改变了其生化特性，包括降低FPGS底物效率和叶酸受体亲和力。[1] LY309887对叶酸受体α亚基的选择性高于β亚基（β/α选择性比为10.5），这可能对肿瘤靶向治疗具有重要意义，因为某些肿瘤会过度表达FRα。[1] LY309887的临床开发是基于其广谱体内抗肿瘤活性以及良好的生化和药理学特性。[1] |
| 分子式 |
C19H23N5O6S
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|---|---|
| 分子量 |
449.48082
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| 精确质量 |
449.137
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| CAS号 |
127228-54-0
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| 相关CAS号 |
127228-54-0 (free acid);
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| PubChem CID |
135430850
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
1.549
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| tPSA |
216.73
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
829
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| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
C1[C@H](CNC2=C1C(=O)NC(=N2)N)CCC3=CC=C(S3)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O
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| InChi Key |
GQCXGHHHNACOGE-SKDRFNHKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H23N5O6S/c20-19-23-15-11(16(27)24-19)7-9(8-21-15)1-2-10-3-5-13(31-10)17(28)22-12(18(29)30)4-6-14(25)26/h3,5,9,12H,1-2,4,6-8H2,(H,22,28)(H,25,26)(H,29,30)(H4,20,21,23,24,27)/t9-,12+/m1/s1
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| 化学名 |
L-Glutamic acid, N-((5-(2-((6R)-2-amino-3,4,5,6,7,8-hexahydro-4-oxopyrido(2,3-d)pyrimidin-6-yl)ethyl)-2-thienyl)carbonyl)-
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| 别名 |
LY-309887; LY-309887; LY-309887
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~222.48 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2248 mL | 11.1240 mL | 22.2479 mL | |
| 5 mM | 0.4450 mL | 2.2248 mL | 4.4496 mL | |
| 10 mM | 0.2225 mL | 1.1124 mL | 2.2248 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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