Methylprednisolone aceponate   中文名称: 甲基泼尼松龙乙丙酸酯

Glucocorticoid receptor

HeLa细胞中的胶原酶启动子活性、人PBMC中LPS诱导的IL-12p40以及人PBMC中IFN-γ的植物血凝素水溶液均被丙酮酸甲泼尼龙抑制；这些反应的 IC50 值分别为 9.3、16.8 和 15.2 nM [3]。 MMTV 启动子和 TAT 活性由醋酸甲泼尼龙激活，EC50 值分别为 21.8 和 20.5 nM [3]。

当在 50 μL 巴豆油诱导的埃文蓝水肿模型中局部应用时，醋酸甲泼尼龙丙酯表现出可忽略不计的全身副作用和抗炎特性，IC50 为 0.0015% [1]。局部给药时，醋酸甲泼尼龙 (0.0001%–0.1%) 可减轻小鼠水肿和刺激性接触性皮炎，ED50 为 0.002% [3]。 <人力资源> 在2种炎症动物模型中，局部应用甲基泼尼松龙乙丙酸酯的抗炎效力与很强的糖皮质激素氯倍他索- 17-丙酸相当，但高于17-丁酸氢化可的松。甲基泼尼松龙乙丙酸酯在皮肤中被酶激活。这种激活在发炎组织中进行得更快。与17-丙酸氯倍他索相比，局部应用3天后，甲基泼尼松龙乙丙酸酯没有全身效应。最后，17-丙酸氯倍他索引起明显的皮肤萎缩，而在大鼠皮肤上长期应用（长达43天）后，甲基泼尼松龙乙丙酸酯仅引起轻微的萎缩变化，与17-丁酸氢化可的松的效果相当。 结论：甲基泼尼松龙乙丙酸酯具有高的局部抗炎效力，非常低的全身副作用，只有轻微的局部萎缩活性。局部抗炎作用和萎缩作用分离的原因至今尚不清楚。可以推测，局部抗炎活性非常强的原因之一可能在于炎症组织中的酶活性更快。甲基泼尼松龙乙丙酸酯是一种新的皮质类固醇，它可以改善局部糖皮质激素的抗炎活性和不良副作用之间的分离。［2］

结合和受体选择性[3]
受体结合试验[3]
用重组杆状病毒感染的Sf9细胞提取物，编码人GR、孕激素受体（PR）、雄激素受体（AR）或矿皮质激素受体（MR），进行受体结合试验（Schäcke等人，2004年）。所有受体的命名都遵循“受体和通道指南”（Alexander et al., 2008）。 对于GR， PR， AR和MR [1,2,4,6,7- 3h]地塞米松（约3.18 GBq·mmol - 1， NEN）（约20 nmol·L - 1）， [1,2,6,7- 3h (N)]孕酮（约3.7 GBq·mmol - 1， NEN）， [17a-甲基- 3h]甲基三烯醇酮（约3.18 GBq·mmol - 1， NEN）或D[1,2,6,7- 3h (N)]醛固酮（约2.81 GBq·mmol - 1， NEN）， SF9细胞质（100-500µg蛋白），测试化合物和结合缓冲液(10 mmol·L - 1 Tris/HCL pH 7.4, 1.5 mmol·L - 1 EDTA，10%甘油)，以50µL的总体积混合，室温孵育1小时。特异性结合定义为[1,2,4,6,7- 3h]地塞米松、[1,2,6,7- 3h (N)]黄体酮、[17a-甲基- 3h]甲基三烯醇酮和D[1,2,6,7- 3h (N)]醛固酮在10 μ mol·L−1未标记地塞米松、黄体酮、美曲酮或醛固酮不存在和不存在时的结合差异。孵育后，加入50µL冷木炭悬浮液5 min，将混合物转移到微滴过滤板上。将混合物过滤到Picoplates中，并与200µL Microszint-40 混合。结合放射性测定与帕卡德顶级计数平板阅读器。结合曲线的Hill分析确定了抑制50%特异性结合的化合物浓度（IC50）。

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选择性测定[3]
ZK 245186 SEGRA及其竞争对手化合物在雌激素受体α- (ERα-)、PR-、AR-和mr介导的转激活试验中表现出激动或拮抗活性的潜力被确定。增加测试化合物的浓度：(i)稳定转染了vittk荧光素酶报告基因的MCF-7细胞；（ii）稳定共转染人PR和小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）荧光素酶报告基因的SK-N-MC细胞；（iii）转染大鼠AR和mmtv -荧光素酶报告基因的CV-1细胞；（iv）转染人MR和mmtv -荧光素酶报告基因的COS-1细胞。测定了受试化合物通过各自的核受体诱导报告基因活性的剂量依赖性，并与参比物雌二醇（ERα）、孕酮（PR）、美曲酮（AR）和醛固酮（MR）的效价和疗效进行了比较。为了检测其拮抗活性，测定了zk245186及其竞争化合物对雌二醇（ERα）、孕酮（PR）、美曲酮（AR）和醛固酮（MR）刺激的报告基因活性的影响。分别与对照化合物氟维司汀（ERα）、米非司酮（PR）、醋酸环丙孕酮（AR）和MR拮抗剂zk91587进行对比。

体外抗炎/免疫调节活性（转抑制）[3]
抑制胶原酶启动子活性[3]
将稳定转染了与胶原酶启动子相关的荧光素酶报告基因的HeLa细胞在Dulbecco改良Eagle培养基中培养24 h，培养基中添加3%炭吸收胎牛血清（FCS）、50单位·mL−1青霉素和50µg·mL−1链霉素、4 mmol·L−1 L-谷氨酰胺和300µg·mL−1遗传素。然后将细胞接种到96孔培养皿中（每孔1 × 104个细胞）。24小时后，用炎症刺激[10 ng·mL−1 12-o-十四烷酰磷酸13-乙酸酯（TPA）]孵育细胞，参比或试验化合物的浓度（1 pmol·L−1至1µmol·L−1）分别升高或不升高。阴性对照细胞（未刺激细胞）用0.1%二甲基亚砜（DMSO）孵育，阳性对照细胞（刺激细胞）用10µg·mL - 1 TPA加0.1% DMSO孵育。18h后进行荧光素酶测定。

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受刺激人原代细胞[3]
对细胞因子分泌的抑制作用[3]
所有血细胞的使用均得到献血者的书面同意，符合机构道德准则。用10 ng·mL−1脂多糖（大肠杆菌血清型0127:B8）刺激健康供者外周血单核细胞（PBMCs），测定化合物对IL-12p40单核细胞分泌的影响。用10µg·mL−1的有丝分裂凝集素，植物血凝素刺激PBMC后，检测对干扰素(IFN)-γ分泌的影响。37°C， 5% CO2孵卵24 h后，使用特异性ELISA试剂盒：IFN-γ和IL-12p40 ELISA检测处理细胞上清中细胞因子的浓度。

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混合淋巴细胞反应对淋巴细胞增殖的抑制作用[3]
从健康供者获得的人外周血单核细胞在histopque -1077上用肝素化血离心分离，并在添加FCS （10% v/v）的RPMI 1640培养基中培养。对于混合白细胞反应（MLR），将来自一个供体的PBMC与50µg·mL−1丝裂霉素C在37℃下孵育30分钟，然后用PBS反复洗涤，作为刺激细胞。来自非相关供体的PBMCs作为应答细胞，与丝裂霉素c处理的刺激PBMCs （1 × 105细胞/孔）一起接种于96孔圆底微孔板上。培养一式三份，按图2所示的浓度添加化合物，在37°C下孵育。第5天，pbmc用[甲基- 3h]-胸腺嘧啶（每孔7.4 kBq）脉冲标记6小时，然后在玻璃过滤器上收获。[3H]-胸腺嘧啶的掺入用液体闪烁计数法测定，用β -平板闪烁法 定量（z gel et al., 2002）。

动物/疾病模型：小鼠和大鼠刺激性接触性皮炎[3]：0.0001%-0.1%
给药途径：局部涂抹，小鼠10 µL，大鼠20 µL
实验结果：显著抑制耳部炎症。

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体内抗炎活性[3]
将化合物分别与巴豆油或二硝基氟苯（DNFB）在含5%肉豆蔻酸异丙酯的乙醇或丙酮/橄榄油（4/1）中共同涂抹。

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小鼠和大鼠刺激性接触性皮炎[3]
分别将化合物或溶剂溶解于乙醇中，对NMRI小鼠（每组10只）和Wistar大鼠（每组10只）的双耳进行局部治疗。巴豆油溶液（小鼠10 µL，1%浓度；大鼠20 µL，6.5%浓度）。24小时后，处死动物，并按照先前描述的方法（Schäcke等，2004）测量小鼠耳重或大鼠耳部10 mm直径穿刺活检组织重量来确定水肿程度。以耳匀浆中弹性蛋白酶活性作为中性粒细胞浸润的指标。将ZK 245186的效果与醋酸甲泼尼龙（MPA）和MF进行比较。每个实验均重复两次。

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小鼠和大鼠的过敏性接触性皮炎[3]
NMRI小鼠（每组10只）于第0天和第1天在侧腹部皮肤涂抹25 µL 0.5% DNFB进行致敏。第5天，小鼠按照先前描述的方法（Zügel等人，2002）局部涂抹20 µL 0.3% DNFB进行激发。Wistar大鼠于第0天涂抹75 µL 0.5% DNFB进行致敏。第5天，大鼠局部涂抹40 µL 0.4% DNFB进行激发。将测试化合物或参考化合物（分别为 ZK 245186 和醋酸甲泼尼龙 (MPA)）以最多四种不同浓度（0.001%、0.01%、0.1% 和 1%）与半抗原共同局部涂抹。24 小时后，处死动物，测定耳重和耳匀浆中的弹性蛋白酶活性，作为水肿和中性粒细胞浸润的指标。每个实验重复两次。

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体内解离和副作用参数 [3]
通过抗炎作用与促糖尿病作用来测定小鼠体内解离活性TAT 等酶的诱导可作为衡量化合物在体内通过转录激活发挥作用潜力的合适替代指标。两组小鼠（n = 10）在同一天于相同条件下接受治疗。所有化合物均采用皮下注射给药，ZK 245186 和醋酸甲泼尼龙 (MPA) 的剂量分别为 1、3、10 和 30 mg·kg⁻¹ 体重，MF 的剂量分别为 0.1、0.3 和 1 mg·kg⁻¹ 体重。一组小鼠用于巴豆油模型（主要观察指标为水肿形成抑制率），另一组小鼠用于测定肝匀浆中的 TAT 活性，方法如前所述 (Schäcke 等，2004)。TAT 活性的诱导倍数以载体对照组为基准计算（TAT 诱导倍数）。为了确定化合物的治疗窗口或疗效与副作用之间的关系，以水肿形成抑制率（x轴）为纵坐标，TAT诱导率（y轴）为横坐标作图。

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ZK 245186局部应用于大鼠皮肤后的葡萄糖耐量试验[3]
将无毛大鼠（hr/hr，n = 10）局部涂抹赋形剂、ZK 245186（0.1%）、醋酸甲泼尼龙（MPA）（0.1%）或丙酸氯倍他索（0.1%）。口服泼尼松龙（3 mg·kg−1 体重）作为阳性对照，以证明糖皮质激素（GC）诱导的葡萄糖代谢变化。连续四天，每天一次给药。在经过一夜禁食期后的第 5 天，口服给予每公斤体重 1 克葡萄糖（10 毫升·公斤体重），并在给药前（基线 = 0 分钟）和给药后不久（30、60、120、180 分钟）使用葡萄糖试纸和血糖仪测定血糖浓度。内部对市售外用糖皮质激素的经验表明，仅能轻微提高局部用药无毛大鼠血糖浓度的化合物，在按照制造商说明局部使用后，对人类葡萄糖代谢的改变风险很低或没有风险（H. Wendt 等人，未发表数据）。

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长期局部用药后的局部和全身副作用[3]
如前所述（Schäcke 等人，2004），测量的变量包括皮肤褶皱厚度、皮肤断裂强度（局部副作用）和总体重，以及胸腺、脾脏和肾上腺的重量（局部给药后的全身副作用）。治疗方案为每日涂抹，持续 3 周。将活性化合物（ZK 245186、醋酸甲泼尼龙 (MPA) 和 MF）或赋形剂（含 5% 肉豆蔻酸异丙酯的乙醇）以等效浓度，以 75 µL 的体积，局部涂抹于幼年 hr/hr 大鼠（每组 n = 10）3 cm × 3 cm 的皮肤区域，持续 19 天。选择了两种不同的活性化合物浓度：一种是巴豆油大鼠模型中测定的 3 倍 ED50 值（ZK 245186 为 0.042%；醋酸甲泼尼龙 (MPA) 为 0.035%；MF 为 0.0027%），另一种浓度可使……在本模型中，ZK 245186 和醋酸甲泼尼龙 (MPA) 的抑制率为 0.1%，MF 的抑制率为 0.01%。分别于第 1 天（基线）、第 5 天、第 8 天、第 12 天、第 15 天和第 19 天测定皮肤褶皱厚度和动物体重。第 20 天处死动物，测定胸腺、脾脏和肾上腺的重量。啮齿动物和人类皮肤变薄效应之间的相关性已得到充分证实（Kirby 和 Munro，1976；van den Hoven 等，1991；Woodbury 和 Kligman，1992）。本文中，皮肤萎缩定义为皮肤褶皱厚度的减少。体重、脾脏和胸腺的重量以及肾上腺的重量被用作衡量局部应用糖皮质激素或类似化合物的不良全身作用的指标。

大鼠口服LD50 >2 gm/kg 胃肠道：肠蠕动亢进、腹泻；肾脏、输尿管和膀胱：尿失禁 Yakuri to Chiryo. Pharmacology and Therapeutics., 19(3015), 1991
大鼠皮下注射LD50 >3 gm/kg 内分泌：其他变化 Yakuri to Chiryo. Pharmacology and Therapeutics., 19(3015), 1991

[1]. Ruzicka T. Methylprednisolone aceponate in eczema and other inflammatory skin disorders -- a clinical update. Int J Clin Pract. 2006 Jan;60(1):85-92.

[2]. Preclinical evaluation of a new topical corticosteroid methylprednisolone aceponate. 1994. 3 (s1), S32-S38.

[3]. Characterization of ZK 245186, a novel, selective glucocorticoid receptor agonist for the topical treatment of inflammatory skin diseases. Br J Pharmacol. 2009 Oct;158(4):1088-103.

醋酸甲泼尼龙是一种皮质类固醇激素。

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醋酸甲泼尼龙 (MPA) 已被证实能快速、可靠且高效地治疗湿疹性疾病，其疗效与大多数参考外用皮质类固醇相当。它还具有良好的局部和全身耐受性。MPA 可有效治疗面部和头皮湿疹以及晒伤，并在银屑病的治疗中显示出良好的效果。其快速起效且无不良局部和/或全身副作用，使 MPA 特别适用于儿童和婴儿。MPA 有多种剂型（0.1%），包括乳膏、软膏、油性软膏、乳液和溶液，可根据患者的个体情况制定治疗方案。此外，与其他外用皮质类固醇需要每日两次给药相比，MPA 的优势在于每日只需使用一次，从而在不影响疗效的前提下，提高了患者的安全性并增强了患者的依从性。 [1]

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背景与目的：糖皮质激素在治疗炎症性疾病方面疗效显著。然而，其疗效受限于副作用。糖皮质激素受体分子机制的发现，以及对基因表达激活和抑制可分别调控的认识，为通过鉴定主要诱导抑制作用的配体来提高药物安全性提供了可能。本文报道了一种新型非甾体类、低分子量糖皮质激素受体选择性激动剂ZK 245186，用于局部治疗炎症性皮肤病。实验方法：通过体外功能性生物测定和体内啮齿动物模型，研究了ZK 245186及其参考化合物的药理学特性，包括其潜在的抗炎活性和副作用。主要结果：体外实验表明，ZK 245186具有抑制细胞因子分泌和T细胞增殖的抗炎活性。在体内，利用小鼠和大鼠的刺激性接触性皮炎和T细胞介导的接触性过敏模型，局部应用ZK 245186后显示出与经典糖皮质激素糠酸莫米松和醋酸甲泼尼龙相似的抗炎功效。然而，ZK 245186在长期局部应用后，在抑制生长和诱导皮肤萎缩、胸腺细胞凋亡、高血糖和肝脏酪氨酸氨基转移酶活性方面，表现出更好的安全性。结论和意义：与经典糖皮质激素相比，ZK 245186是一种强效抗炎化合物，副作用风险更低。它是一种很有前景的候选药物，目前正在进行临床试验。[3]

C27H36O7

472.57

472.246

C, 68.62; H, 7.68; O, 23.70

86401-95-8

63019

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

595.8±50.0 °C at 760 mmHg

193.1±23.6 °C

0.0±3.8 mmHg at 25°C

1.560

4.01

106.97

1

7

7

34

980

8

CCC(=O)O[C@@]1(CC[C@@H]2[C@@]1(C[C@@H]([C@H]3[C@H]2C[C@@H](C4=CC(=O)C=C[C@]34C)C)O)C)C(=O)COC(=O)C

DALKLAYLIPSCQL-YPYQNWSCSA-N

InChI=1S/C27H36O7/c1-6-23(32)34-27(22(31)14-33-16(3)28)10-8-19-18-11-15(2)20-12-17(29)7-9-25(20,4)24(18)21(30)13-26(19,27)5/h7,9,12,15,18-19,21,24,30H,6,8,10-11,13-14H2,1-5H3/t15-,18-,19-,21-,24+,25-,26-,27-/m0/s1

[(6S,8S,9S,10R,11S,13S,14S,17R)-17-(2-acetyloxyacetyl)-11-hydroxy-6,10,13-trimethyl-3-oxo-7,8,9,11,12,14,15,16-octahydro-6H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl] propanoate

Advantan; MPA; Methylprednisolone aceponate; 86401-95-8; Advantan; Adventan; Methylprednisolone aceponate [INN]; SH-440; Methylprednisoloni aceponas; Methylprednisoloni aceponas [Latin]; Methylprednisolone Aceponate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。