| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MDCK cells treated with ML303 (20 μM) for 6 hours exhibit increased levels of IFN-β mRNA [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
用 ML303 (20 μM) 处理 6 小时的 MDCK 细胞表现出 IFN-β mRNA 水平升高 [1]。
ML303(化合物32)在TCID50实验中,对MDCK细胞中的甲型流感病毒A/PR/8/34 (H1N1)的抑制IC90为155 nM。在10 µM浓度下,能使病毒滴度降低128倍。 在针对季节性流感病毒A/California/7/2009 (H1N1)的细胞病变效应(CPE)保护实验中,ML303的EC50为0.7 µM,EC90 >50 µM。其在MDCK细胞中的CC50为25.3 µM,选择性指数(SI50)为38。 ML303在基于酵母的实验中,能够逆转NS1诱导的缓慢生长表型,在50 µM浓度下恢复酵母生长,表明其具有功能性NS1拮抗作用,且在酵母中无急性毒性。 在感染A/PR/8/34的MDCK细胞中,ML303(20 µM)能显著恢复通过RT-PCR检测到的IFN-β mRNA水平,效果与阳性对照poly(I:C)相当。这种恢复作用具有感染特异性,因为该化合物在未感染细胞中不诱导IFN-β mRNA。 在293细胞的荧光素酶报告基因实验中,ML303(20 µM)能够恢复被共转染的NS1所抑制的、由poly(I:C)诱导的IFN-β启动子活性,证实其阻断NS1功能的能力。该化合物在无NS1表达时对荧光素酶活性无影响。 蛋白质印迹分析证实,ML303不影响感染细胞中NS1蛋白的稳态水平,表明其通过功能性作用而非降解NS1来发挥作用。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型: MDCK 细胞用 A/PR/8/34 以 MOI 2 感染 6 小时。 测试浓度:20μM。 孵化持续时间:6 小时。 实验结果:MDCK细胞中IFN-β mRNA水平恢复。 病毒复制抑制实验: MDCK细胞以0.1的感染复数(MOI)感染甲型流感病毒A/PR/8/34。加入化合物并孵育48小时。收集上清液,使用血凝实验和标准TCID50分析测定病毒滴度。相对于DMSO对照计算降低倍数。[1] 细胞毒性实验: 在未感染的MDCK细胞中使用基于ATP含量的细胞活力测定法(如CellTiter-Glo)测试化合物的细胞毒性。确定CC50值。[1] CPE保护实验: MDCK细胞感染不同流感病毒株。加入化合物,孵育一段时间后,测量细胞活力以确定化合物保护细胞免受病毒致死作用的能力。EC50、EC90和CC50值从剂量反应曲线中得出。[1] 酵母生长恢复实验: 表达流感NS1蛋白的酵母菌株表现出缓慢生长表型。在化合物或DMSO存在下培养酵母。在22、42和60小时监测生长(OD600nm)。缓慢生长表型的逆转表明NS1拮抗作用。[1] IFN-β mRNA恢复实验(RT-PCR): MDCK细胞以MOI为2感染A/PR/8/34,并用化合物处理6小时。提取总RNA,通过RT-PCR分析IFN-β mRNA水平,β-肌动蛋白作为内参对照。[1] IFN-β荧光素酶报告基因实验: 将受人类IFN-β启动子控制的萤火虫荧光素酶报告质粒与NS1表达质粒共转染至293细胞。16小时后,用poly(I:C)诱导启动子,并加入测试化合物。24小时后测量荧光素酶活性,以评估化合物对抗NS1介导的抑制的能力。[1] NS1蛋白免疫印迹实验: 裂解感染并经化合物处理的MDCK细胞。蛋白质通过SDS-PAGE分离,转移至膜上,用抗NS1和α-微管蛋白(内参对照)的抗体进行检测,以评估NS1蛋白水平。[1] |
| 动物实验 |
药代动力学研究:雄性 C57BL/6 小鼠(每种化合物 3 只)单次腹腔注射 30 mg/kg 的 ML303。文中未明确说明给药所用的制剂/溶剂。分别于给药后不同时间点采集血液(用于血浆分析)、肝脏和肺组织。测定这些组织中 ML303 的浓度,以计算药代动力学参数。[1]
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| 药代性质 (ADME/PK) |
体外ADME:ML303在小鼠肝微粒体(MLM)中表现出良好的稳定性,孵育15分钟和30分钟后,母体化合物的残留量分别为66%和45%。其水溶性为3.1 µM。在Caco-2单层细胞渗透性测定中,其从顶端到基底外侧方向的表观渗透率(Papp,AB)为0.10 × 10⁻⁶ cm/s,从基底外侧到顶端方向的表观渗透率(Papp,BA)为0.22 × 10⁻⁶ cm/s,外排比为2.29。低渗透性归因于其低溶解度。 [1]
体内药代动力学(小鼠,腹腔注射):单次腹腔注射 30 mg/kg ML303 后,血浆中 Cmax 为 2457 ng/mL,肝脏中为 49,600 ng/mL,肺中为 18,567 ng/mL,达峰时间 (Tmax) 为 0.25 小时。 末端半衰期 (t₁/₂) 在血浆中约为 4.6 小时,在肝脏中约为 4.7 小时,在肺中约为 4.5 小时。 血浆中浓度-时间曲线下面积 (AUC) 为 53,894 hng/mL。肝脏(AUC 比值约为 10.5)和肺(AUC 比值约为 7.0)中的暴露量显著高于血浆。 该化合物在肺部(流感病毒感染的主要部位)的浓度维持在 1 µM 以上超过 12 小时。 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在MDCK细胞活力测定中,ML303在浓度高达100 µM时未显示细胞毒性,这使其具有较高的选择性指数(SI50 >100)。在酵母生长恢复测定中,该化合物在50 µM浓度下未显示急性毒性。在单剂量小鼠药代动力学研究(30 mg/kg,腹腔注射)中,未观察到不良反应或毒性迹象。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ML303 属于一类新型吡唑并吡啶类小分子,经酵母系统中的定量高通量筛选 (qHTS) 鉴定为流感病毒 NS1 拮抗剂。其作用机制被认为是抑制甲型流感病毒 NS1 蛋白的功能,从而逆转 NS1 介导的宿主先天免疫反应抑制,特别是 IFN-β 的诱导。该化合物定位为研究 NS1 功能的工具,并有望在未来的体内概念验证研究中验证 NS1 作为流感治疗靶点的有效性。[1]
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| 分子式 |
C21H16F3N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
399.36585521698
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| 精确质量 |
399.119
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| CAS号 |
1638211-04-7
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| PubChem CID |
136141525
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5
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| tPSA |
60.2
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
556
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
FC(C1C=CC(=CC=1)N1C2C(C(C)=N1)=C(C=CN=2)C1C=CC(=C(C=1)OC)O)(F)F
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| InChi Key |
YBRHGNCGFMRGSV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H16F3N3O2/c1-12-19-16(13-3-8-17(28)18(11-13)29-2)9-10-25-20(19)27(26-12)15-6-4-14(5-7-15)21(22,23)24/h3-11,28H,1-2H3
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| 化学名 |
2-methoxy-4-[3-methyl-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]pyrazolo[3,4-b]pyridin-4-yl]phenol
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5039 mL | 12.5197 mL | 25.0394 mL | |
| 5 mM | 0.5008 mL | 2.5039 mL | 5.0079 mL | |
| 10 mM | 0.2504 mL | 1.2520 mL | 2.5039 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。