| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mdm2-MdmX RING domain interaction. MMRi64 disrupts the Mdm2-MdmX RING-RING interaction, inhibiting the E3 ligase activity of the Mdm2-MdmX heterodimer complex toward Mdm2 and p53 substrates. It does not inhibit Mdm2 RING domain homodimer E3 activity or NEDD4-1 autoubiquitination [1].
MMRi64 targets the Mdm2-MdmX E3 ligase complex, which negatively regulates the tumor suppressor p53 by promoting its ubiquitination and degradation. By inhibiting the E3 ligase activity, MMRi64 stabilizes p53 and activates the p53 pathway. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验：在生化分析中，MMRi64 (10 μM) 能有效抑制 MdmX 刺激的 Mdm2 自泛素化和 Mdm2-MdmX 介导的 p53 多聚泛素化，与 MMRi6 的作用相似。在使用重组 FLAG-MdmX 和 HA-Mdm2 RING 蛋白的 pull-down 实验中，MMRi64 能有效抑制体外 Mdm2-MdmX 的相互作用 [1]。在 HCT-8 结肠癌细胞中，MMRi64 (0.31-5 μM) 能诱导 p53 的积累和 Mdm2 的诱导，且这种诱导呈时间和浓度依赖性，同时还能显著下调 MdmX 的表达。在pre-B急性淋巴细胞白血病NALM6细胞中，MMRi64（1-10 μM）以时间和浓度依赖的方式激活p53，并显著降低Mdm2表达（与HCT-8细胞相反）和MdmX水平[1]。在NALM6细胞中，MMRi64（1 μM）诱导PUMA强烈表达，但仅短暂诱导p21表达，且在24小时内降至基础水平以下。PARP裂解在8小时时即可观察到，并在24小时进一步增强，表明内源性凋亡途径被激活。相比之下，相同浓度的 Nutlin3a 诱导了更强的 p53 积累和 PUMA 诱导，但 p21 表达也更强，并且在 24 小时时几乎检测不到 PARP 裂解 [1]。在 wt-p53 Emu-myc 小鼠淋巴瘤细胞中，MMRi64 (0.1-2 μM) 在低至 0.1 μM 的浓度下即可诱导 p53 积累，并在 ~0.5 μM 时诱导 PARP 裂解，而 p53 缺失的 Emu-myc 细胞则未显示 PARP 裂解。流式细胞术显示，MMRi64 在 0.5 和 1 μM 浓度下处理 48 小时后，分别诱导了 7.3% 和 20% 的亚 G1 期细胞群，而 Nutlin3a 在 0.5、1 和 2 μM 浓度下仅分别诱导了 0.4%、0.8% 和 3.0% 的亚 G1 期细胞群 [1]。在生长抑制实验中，与 HCT116-p53-/- 细胞相比，p53 使 HCT116 细胞中 MMRi64 的生长抑制作用最多提高了约 10%。 MMRi64 (0.2-0.4 μM) 与 Nutlin3a (2 μM) 联合使用可协同诱导细胞凋亡，使亚 G1 期细胞比例分别从单独使用 MMRi64 时的 2.5% 和单独使用 Nutlin3a 时的 1.3% 增加到两种联合用药时的 8.7% 和 16% [1]。体外实验表明，MMRi64 可破坏 Mdm2-MdmX 相互作用，下调白血病细胞中 Mdm2 和 MdmX 的表达，并诱导 p53 的积累。它能有效诱导淋巴瘤细胞发生 p53 依赖性和 p53 非依赖性凋亡。
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| 体内研究 (In Vivo) |
MMRi64 的体内研究有限。作为一种研究工具，它被用于研究 p53 通路和癌症生物学。详细的体内疗效数据尚未发表。
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| 酶活实验 |
酶活性测定：采用基于FRET的体外泛素化测定法检测MdmX刺激的Mdm2自泛素化。预反应混合物包含40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl₂、2 mM DTT、5 mM ATP、20 nM E1、350 nM E2（UbcH5）、25 nM HA标记的Mdm2和200 nM MdmX。加入MMRi64（10 μM），并通过加入HA-泛素和泛素隐蔽物启动反应。在37°C孵育1.5小时后，测定FRET信号。为了验证，我们进行了体外泛素化实验，使用 100 nM HA-Mdm2、200 nM MdmX 和 100 nM p53（用于 p53 实验），在 10 μM 化合物存在下于 30°C 孵育 1 小时，然后进行 SDS-PAGE 和 WB 分析。NEDD4-1 自泛素化 (200 nM) 作为特异性对照 [1]。
在下拉实验中，将 500 nM HA-Mdm2 RING 结构域和 250 nM Flag-MdmX 与 10 μM MMRi64 在 NP40 缓冲液中孵育 30 分钟，然后稀释并用抗 FLAG M2 磁珠进行下拉。结合蛋白用3×Flag肽洗脱，并用抗HA抗体进行Western blot检测[1]。 利用DOCK6程序对Mdm2-MdmX RING结构域的三维结构进行分子对接分析表明，MMRi64与MdmX RING结构域结合，干扰其与Mdm2 RING结构域的相互作用[1]。 MMRi64的体外活性测定包括测量其破坏Mdm2-MdmX RING-RING相互作用的能力。这可以通过表面等离子共振（SPR）或AlphaScreen等生物物理方法进行评估。该化合物抑制Mdm2-MdmX E3连接酶活性的能力也可以通过泛素化测定在体外进行测定。 |
| 细胞实验 |
细胞实验：在生长抑制实验中，将 HCT116 和 HCT116-p53-/- 细胞用指定浓度的 MMRi64 处理 72 小时，并采用 MTT 法测定生长抑制率 [1]。
在蛋白质印迹分析中，将 HCT-8、NALM6 和 Emu-myc 细胞用指定浓度和时间的 MMRi64 处理。使用特异性抗体分析全细胞裂解液中的 p53、Mdm2、MdmX、PUMA、p21、PARP、cleaved caspase 3 和微管蛋白（上样对照）[1]。 对于流式细胞术凋亡分析，将 NALM6 细胞单独或联合用 MMRi64 或 Nutlin3a 处理 48 小时，固定后用碘化丙啶染色，并进行流式细胞术分析以定量亚 G1 期细胞群[1]。 MMRi64 的细胞检测包括用该化合物处理白血病或淋巴瘤细胞，并通过 Western blot 检测 p53 水平。通过检测 caspase 激活、Annexin V 染色或 DNA 片段化来评估凋亡的诱导。同时评估 Mdm2 和 MdmX 的下调。 |
| 动物实验 |
MMRi64的体内动物研究数据尚不充分。作为一种研究化合物，它可在白血病或淋巴瘤的异种移植模型中进行评估。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
MMRi64的药代动力学性质尚未得到充分表征。其分子量与其结构（C24H20Cl2N4O）和在DMSO中的溶解度相符。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
MMRi64的毒性数据有限。它是一种研究级化合物，尚未发表全面的毒理学评估结果。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MMRi64 是 MMRi6 的类似物，MMRi6 是一种小分子抑制剂，它是通过对包含 55,230 个化合物的多样性库进行高通量筛选而发现的，筛选采用基于 FRET 的 E3 连接酶活性检测方法。这两种化合物均特异性靶向 Mdm2-MdmX RING-RING 相互作用，这是一个此前未被探索的药物开发界面。与 Nutlin3a（一种 Mdm2-p53 结合抑制剂）不同，MMRi64 可选择性地激活 p53 通路的凋亡分支（PUMA 诱导），而对生长停滞效应因子 p21 的诱导作用极小。MMRi64 还能下调白血病细胞中的 Mdm2 和 MdmX 表达，从而增强其促凋亡作用。该化合物与 Nutlin3a 具有协同作用，可诱导淋巴瘤细胞凋亡。 MMRi64的化学结构如图3d所示（原文[1]）。
MMRi64是一种用于研究p53-Mdm2-MdmX轴及癌症治疗的在研化合物，尚未进入临床试验阶段。其作用机制涉及抑制Mdm2-MdmX E3连接酶活性，从而激活p53并诱导癌细胞凋亡。 |
| 分子式 |
C22H17CL2N3O
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|---|---|
| 分子量 |
410.295882940292
|
| 精确质量 |
409.07
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| 元素分析 |
C, 64.40; H, 4.18; Cl, 17.28; N, 10.24; O, 3.90
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| CAS号 |
430458-66-5
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| PubChem CID |
2907163
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.9
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| tPSA |
58
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
510
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(=CC=CC=1C(C1C=CC2=CC=CN=C2C=1O)NC1C=C(C)C=CN=1)Cl
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| InChi Key |
HQICAVDTVBACIN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H17Cl2N3O/c1-13-9-11-25-18(12-13)27-21(15-5-2-6-17(23)19(15)24)16-8-7-14-4-3-10-26-20(14)22(16)28/h2-12,21,28H,1H3,(H,25,27)
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| 化学名 |
7-[(2,3-dichlorophenyl)-[(4-methylpyridin-2-yl)amino]methyl]quinolin-8-ol
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| 别名 |
MMRi64; MMRi-64; MMRi 64;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4372 mL | 12.1862 mL | 24.3724 mL | |
| 5 mM | 0.4874 mL | 2.4372 mL | 4.8745 mL | |
| 10 mM | 0.2437 mL | 1.2186 mL | 2.4372 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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