| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Mdm2-MdmX RING domain interaction. MMRi64 disrupts the Mdm2-MdmX RING-RING interaction, inhibiting the E3 ligase activity of the Mdm2-MdmX heterodimer complex toward Mdm2 and p53 substrates. It does not inhibit Mdm2 RING domain homodimer E3 activity or NEDD4-1 autoubiquitination [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性： 在生化实验中，MMRi64（10 μM）有效抑制MdmX刺激的Mdm2自身泛素化和Mdm2-MdmX介导的p53多聚泛素化，与MMRi6类似。使用重组FLAG-MdmX和HA-Mdm2 RING蛋白的pull-down实验证明，MMRi64有效抑制了体外Mdm2-MdmX相互作用 [1]。
在HCT-8结肠癌细胞中，MMRi64（0.31-5 μM）以时间和浓度依赖性方式诱导p53积累和Mdm2诱导，并显著下调MdmX。在前B急性淋巴细胞白血病NALM6细胞中，MMRi64（1-10 μM）以时间和浓度依赖性方式激活p53，并强烈降低Mdm2表达（与HCT-8细胞相反）和MdmX水平 [1]。 在NALM6细胞中，MMRi64（1 μM）诱导强效的PUMA表达，但p21仅瞬时诱导，24小时时降至基础水平以下。PARP裂解在8小时时明显，并在24小时时进一步增加，表明内在凋亡通路被激活。相比之下，相同浓度的Nutlin3a诱导更强的p53积累和PUMA诱导，但p21表达也更强，且24小时时几乎检测不到PARP裂解 [1]。 在wt-p53 Emu-myc小鼠淋巴瘤细胞中，MMRi64（0.1-2 μM）在0.1 μM的低浓度下即可诱导p53积累，并在约0.5 μM时诱导PARP裂解，而p53-null Emu-myc细胞未显示PARP裂解。流式细胞术显示，MMRi64在0.5和1 μM处理48小时分别诱导7.3%和20%的sub-G1群体，而Nutlin3a在0.5、1和2 μM仅诱导0.4%、0.8%和3.0%的sub-G1群体 [1]。 在生长抑制实验中，与HCT116-p53-/-细胞相比，p53对MMRi64在HCT116细胞中的生长抑制贡献最大约10%。MMRi64（0.2-0.4 μM）与Nutlin3a（2 μM）联合使用协同诱导凋亡，将sub-G1群体从单独MMRi64的2.5%和单独Nutlin3a的1.3%分别提高至8.7%和16% [1]。 |
| 酶活实验 |
酶学实验： 基于FRET的体外泛素化实验用于测量MdmX刺激的Mdm2自身泛素化。预混液含有40 mM Tris-HCl（pH 7.5）、5 mM MgCl2、2 mM DTT、5 mM ATP、20 nM E1、350 nM E2（UbcH5）、25 nM HA标记的Mdm2、200 nM MdmX。加入MMRi64（10 μM），通过加入HA-泛素和泛素cryptate启动反应。在37°C孵育1.5小时后测量FRET信号。对于验证实验，在10 μM化合物存在下，于30°C进行体外泛素化实验1小时（含100 nM HA-Mdm2、200 nM MdmX，p53实验含100 nM p53），然后进行SDS-PAGE和WB。NEDD4-1自身泛素化（200 nM）作为特异性对照 [1]。
对于pull-down实验，将HA-Mdm2 RING结构域（500 nM）和Flag-MdmX（250 nM）与10 μM MMRi64在NP40缓冲液中孵育30分钟，然后稀释并用抗FLAG M2珠子进行pull-down。结合的蛋白用3×Flag肽洗脱，并用抗HA抗体通过WB检测 [1]。 使用DOCK6程序和Mdm2-MdmX RING结构域的3-D结构进行对接分析，表明MMRi64结合到MdmX RING结构域，干扰其与Mdm2 RING结构域的相互作用 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验： 对于生长抑制实验，用指定浓度的MMRi64处理HCT116和HCT116-p53-/-细胞72小时，通过MTT法测量生长抑制 [1]。
对于Western blot分析，用指定浓度和时间的MMRi64处理HCT-8、NALM6和Emu-myc细胞。使用特异性抗体分析全细胞裂解物中的p53、Mdm2、MdmX、PUMA、p21、PARP、裂解的caspase 3和微管蛋白（上样对照）[1]。 对于流式细胞术凋亡分析，用MMRi64或Nutlin3a单独或联合处理NALM6细胞48小时，固定，碘化丙啶染色，进行流式细胞术分析以定量sub-G1群体 [1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MMRi64是MMRi6的类似物，MMRi6是通过基于FRET的E3连接酶活性实验对55,230个化合物的多样性文库进行高通量筛选鉴定出的小分子抑制剂。两种化合物都特异性靶向Mdm2-MdmX RING-RING相互作用，这是一个此前未被探索的药物开发界面。与Nutlin3a（Mdm2-p53结合抑制剂）不同，MMRi64选择性激活p53通路的凋亡臂（PUMA诱导），而生长阻滞效应因子p21的诱导极少。MMRi64还在白血病细胞中下调Mdm2和MdmX，这有助于其促凋亡作用。该化合物与Nutlin3a协同诱导淋巴瘤细胞凋亡。MMRi64的化学结构见原论文图3d [1]。
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| 分子式 |
C22H17CL2N3O
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|---|---|
| 分子量 |
410.295882940292
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| 精确质量 |
409.07
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| 元素分析 |
C, 64.40; H, 4.18; Cl, 17.28; N, 10.24; O, 3.90
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| CAS号 |
430458-66-5
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| PubChem CID |
2907163
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
5.9
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| tPSA |
58
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
510
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C(=CC=CC=1C(C1C=CC2=CC=CN=C2C=1O)NC1C=C(C)C=CN=1)Cl
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| InChi Key |
HQICAVDTVBACIN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H17Cl2N3O/c1-13-9-11-25-18(12-13)27-21(15-5-2-6-17(23)19(15)24)16-8-7-14-4-3-10-26-20(14)22(16)28/h2-12,21,28H,1H3,(H,25,27)
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| 化学名 |
7-[(2,3-dichlorophenyl)-[(4-methylpyridin-2-yl)amino]methyl]quinolin-8-ol
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| 别名 |
MMRi64; MMRi-64; MMRi 64;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4372 mL | 12.1862 mL | 24.3724 mL | |
| 5 mM | 0.4874 mL | 2.4372 mL | 4.8745 mL | |
| 10 mM | 0.2437 mL | 1.2186 mL | 2.4372 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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