NBD-PE

别名: NBD-PE [N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)-1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolaMine, triethylaMMoniuM salt]
目录号: V42315 纯度: ≥98%
NBD-PE 是一种有效的脂质荧光探针(激发/发射:465/535 nm;颜色:绿色)。
NBD-PE CAS号: 178119-00-1
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
NBD-PE 是一种高效的脂质荧光探针(激发/发射波长:465/535 nm;颜色:绿色)。NBD-PE 在膜生物学和细胞生物学领域有着广泛的应用。
NBD-PE(N-(7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑-4-基)-1,2-二十六烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)是一种细胞渗透性绿色荧光磷脂探针,用于研究膜脂混合、脂质分选和运输以及双层膜到六方相的转变。其激发/发射波长最大值分别为 465/535 nm 或 463/536 nm。分子式为 C49H90N5O11P,分子量为 956.24 g/mol。NBD-PE 可用于研究细胞膜内的脂质组织和动态变化。
生物活性&实验参考方法
靶点
NBD-PE is a fluorescent lipid probe that integrates into cellular membranes. It does not have a traditional pharmacological target but rather serves as a tool for studying membrane biophysics. The NBD fluorophore is environment-sensitive, with fluorescence properties that change based on the local lipid environment. By incorporating into membranes, NBD-PE enables studies of lipid organization, membrane dynamics, lipid trafficking, and membrane fusion events.
体外研究 (In Vitro)
建议(以下是我们建议的实验方案,仅供参考,请根据您的具体情况进行调整)。磷脂转移活性测定[3]:1. 反应混合物中包含2 mg线粒体蛋白、0.02 μmol NBD-PE、0.5 mmol Tris-HCl(pH 7.4)和0-200 μg pH 5.1的上清液蛋白。2. 将样品置于37°C培养箱中轻轻搅拌1小时。3. 为终止反应,将样品置于冷水浴中10分钟,然后以15,000 g离心5分钟。4. 倒出上清液,待混合物恢复至室温后,测量460 nm处的吸光度和535 nm处的相对荧光强度(激发波长为465 nm)。 5. 为排除NBD-PE与交换蛋白之间潜在的相互作用,同时进行仅含NBD-PE和交换蛋白的空白对照实验。6. 通过比较含交换蛋白和不含交换蛋白的上清液组分的吸光度或相对荧光强度,计算NBD-PE的交换百分比。
在体外,NBD-PE可用作荧光探针,用于研究细胞膜内的脂质组织和动态变化。它可用于通过荧光共振能量转移(FRET)研究膜融合。该探针的绿色荧光(激发波长463-465 nm,发射波长535-536 nm)适用于荧光显微镜和光谱学应用。它也用于脂质体研究,以探索细胞膜相互作用、内吞作用和其他膜相关现象。
体内研究 (In Vivo)
在体内,NBD-PE主要用于离体实验,研究分离细胞或组织中的膜动力学。它可以整合到细胞膜中,用于成像和追踪研究。由于潜在的毒性和清除问题,该探针在活体动物中的应用受到限制。然而,它可用于斑马鱼或其他模式生物,研究发育生物学中的膜动力学。其主要应用是在体外进行生物物理学和细胞生物学研究。
酶活实验
在膜标记实验中,NBD-PE通常溶解于甲醇或氯仿中,并添加到脂质混合物或细胞悬液中。在脂质体研究中,NBD-PE以占总脂质0.5-2 mol%的比例掺入脂质囊泡中。在细胞标记实验中,将细胞与含有NBD-PE的脂质体或NBD-PE与BSA的复合物在37°C下孵育30-60分钟。标记后的细胞经洗涤后,通过荧光显微镜成像或流式细胞术进行分析。
细胞实验
对于基于荧光共振能量转移(FRET)的膜融合实验,膜用NBD-PE(供体)和合适的受体荧光染料(例如罗丹明-PE)标记。标记膜的融合会导致荧光染料稀释,从而改变FRET效率。在适当的激发和发射波长下,随时间测量荧光强度。该实验可以使用脂质体或基于细胞的融合系统进行。对于脂质转运研究,细胞用NBD-PE标记,并通过荧光显微镜追踪探针随时间的分布。
动物实验
对于体内应用,NBD-PE可注射到斑马鱼胚胎或其他小型生物体内,用于标记细胞膜以进行成像研究。或者,可将NBD-PE标记的细胞移植到动物体内进行追踪研究。组织切片也可使用NBD-PE染色,用于膜结构的组织学分析。然而,该探针通常不会全身性地用于哺乳动物体内成像。
药代性质 (ADME/PK)
NBD-PE可溶于甲醇和其他有机溶剂。为防止光漂白,该化合物在操作和储存过程中应避光保存。建议在-20°C下储存以获得长期稳定性。该化合物仅供研究使用,不得用于人类或兽医用途。操作该化合物时应遵循标准的实验室安全操作规程。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
由于NBD-PE是一种荧光脂质探针而非治疗药物,因此其毒理学数据尚未得到广泛报道。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。该化合物不适用于人体,仅供研究用途。
参考文献

[1]. 19F-NMR and fluorescence polarization of yeast plasma membrane and isolated lipids. Biochem Biophys Res Commun. 1981 Jul 16;101(1):306-11.

[2]. Resonance energy transfer microscopy: visual colocalization of fluorescent lipid probes in liposomes. Methods Enzymol. 1989;171:850-7.

[3]. Synthesis and properties of a highly fluorescent derivative of phosphatidylethanolamine. J Lipid Res. 1978 Feb;19(2):222-8.

其他信息
NBD-PE 是一种细胞可渗透的绿色荧光磷脂探针,用于研究膜脂混合、脂质分选和运输以及双层到六方相的转变(激发/发射波长:465/535 nm 或 463/536 nm)。它用于研究细胞膜内的脂质组织和动态变化。NBD-PE 是一种膜生物学研究工具,尚未获准用于临床。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C43H75N4O11P.C6H15N
分子量
956.24
精确质量
955.637
CAS号
178119-00-1
PubChem CID
165412512
外观&性状
Brown to black solid powder
LogP
14.038
tPSA
218.18
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
15
可旋转键数目(RBC)
44
重原子数目
66
分子复杂度/Complexity
1160
定义原子立体中心数目
1
SMILES
CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(=O)(O)OCCNC1=CC=C(C2=NON=C12)[N+](=O)[O-])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC.CCN(CC)CC
InChi Key
LEJHDNAGUHKMLR-GKEJWYBXSA-N
InChi Code
InChI=1S/C43H75N4O11P.C6H15N/c1-3-5-7-9-11-13-15-17-19-21-23-25-27-29-40(48)54-35-37(57-41(49)30-28-26-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-2)36-56-59(52,53)55-34-33-44-38-31-32-39(47(50)51)43-42(38)45-58-46-43;1-4-7(5-2)6-3/h31-32,37,44H,3-30,33-36H2,1-2H3,(H,52,53);4-6H2,1-3H3/t37-;/m1./s1
化学名
N,N-diethylethanamine;[(2R)-2-hexadecanoyloxy-3-[hydroxy-[2-[(4-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-7-yl)amino]ethoxy]phosphoryl]oxypropyl] hexadecanoate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.0458 mL 5.2288 mL 10.4576 mL
5 mM 0.2092 mL 1.0458 mL 2.0915 mL
10 mM 0.1046 mL 0.5229 mL 1.0458 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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