Neotuberostemonine   中文名称: 新对叶百部碱

Natural antitussive alkaloids

体外实验表明，Neotuberostemonine (NTS)显著降低了M2标记物精氨酸酶-1 (arginase-1)的表达，呈剂量依赖性，但仅在100μM时下调了M1标记物iNOS的表达。总之，我们的研究首次证明NTS通过抑制巨噬细胞的募集和M2极化对blm诱导的肺纤维化具有显著的保护作用[1]。

---

Neotuberostemonine (NTS)可显著减轻博来霉素诱导的肺纤维化[1]
NTS显著减轻博来霉素诱导的肺组织巨噬细胞浸润[1]
在体内和体外，NTS主要抑制M2极化，而非M1极化。[1]

---

在小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞系中，MTT实验表明，新对叶百部新碱 在浓度高达100 μM时未显示细胞毒性。[1]
新对叶百部新碱 (1, 10, 100 μM) 降低了LPS刺激诱导的一氧化氮（NO）产生，抑制率分别为8.6%、10.4%和14.6%。[1]
Western印迹分析显示，100 μM的 新对叶百部新碱 显著下调了LPS刺激的RAW 264.7细胞中iNOS（M1型巨噬细胞标志物）的表达。[1]
新对叶百部新碱 (1, 10, 100 μM) 以剂量依赖的方式显著抑制了IL-4诱导的RAW 264.7细胞中精氨酸酶-1（Arg-1，M2型巨噬细胞标志物）的表达。[1]
ELISA结果表明，新对叶百部新碱 (1, 10, 100 μM) 显著抑制了IL-4诱导的RAW 264.7细胞中TGF-β1水平的升高。[1]

NTS降低blm诱导的小鼠体重减轻、死亡率和肺指数[1]
在小鼠中使用BLM是最常见的实验性肺纤维化模型。如图1B所示，与假手术小鼠相比，blm损伤小鼠的体重明显下降。以40 mg/kg剂量的NDN处理小鼠，体重适度增加，与文献结果相似。NTS浓度为40 mg/kg (NTS-40)的处理在整个处理期内均能减轻BLM引起的体损，终末体重为…
neotuberostemonine(NTS)是tuberosa Lour根中主要的止咳生物碱之一。本研究旨在探讨NTS对博来霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化的影响及其机制。在BLM给药后，小鼠从第8天到第21天以每天20和40mg/kg的剂量口服NTS，尼达尼布为阳性对照。采用HE、Masson三色染色检测组织病理学，免疫组化染色检测TGF-β1水平及巨噬细胞募集，western blot检测原纤维化介质表达及M1/M2极化，观察NTS对blm诱导小鼠的影响。采用RAW 264.7细胞评价NTS(1、10、100μM)是否直接影响巨噬细胞。结果显示，NTS治疗可显著改善肺组织病理学改变，减少支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞计数。NTS可降低胶原蛋白、α-SMA和TGF-β1的过表达。此外，NTS显著降低了MMP-2和TIMP-1的表达，提高了MMP-9的表达。进一步分析表明，NTS能够减少巨噬细胞的募集，抑制小鼠肺组织M2极化。

---

肺纤维化可能部分是由于对慢性缺氧反应的组织修复失调的结果。在这项研究中，我们探讨了缺氧对肺成纤维细胞的影响，以及从tuberona tuberosa中分离的天然生物碱neotuberostemonine (NTS)对体外和体内成纤维细胞活化的影响。暴露于1% O2或CoCl2 (100 μmol/L)处理后，原代小鼠肺成纤维细胞(PLFs)被激活并分化，HIF-1α、TGF-β、FGF2、α-SMA和Col-1α/3α的蛋白或mRNA表达明显增加，而HIF-1α沉默后被阻断，表明成纤维细胞的激活依赖于HIF-1α。NTS (0.1 ~ 10 μmol/L)剂量依赖性地抑制缺氧诱导的PLFs的活化和分化，而NTS与蛋白酶体抑制剂MG132共处理可消除其抑制作用。由于脯氨酸羟基化是HIF-1α降解起始的关键步骤，我们进一步发现NTS处理逆转了缺氧或cocl2诱导的脯氨酸羟基化HIF-1α表达的减少。通过低氧探针免疫荧光染色，我们发现NTS治疗直接逆转了缺氧暴露的PLFs中较低的氧张力。在肺纤维化小鼠模型中，口服NTS (30 mg·kg-1·d-1，持续1或2周)通过抑制HIF-1α及其下游促纤维化因子(TGF-β、FGF2和α-SMA)的水平，有效地减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化。综上所述，这些结果表明NTS抑制缺氧暴露的成纤维细胞和blm处理小鼠肺组织中HIF-1α及其下游因子TGF-β、FGF2和α-SMA的蛋白表达。具有抗hif -1α活性的NTS可能是一种有前景的治疗肺纤维化的药物。Reference: Acta Pharmacol Sin. 2018 Sep;39(9):1501-1512. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29645000/

---

在博来霉素（BLM）诱导的小鼠肺纤维化模型中，与模型组相比，口服给予 新对叶百部新碱 (20 和 40 mg/kg/天，BLM给药后第8至21天) 显著减轻了体重下降并提高了累积存活率。[1]
新对叶百部新碱 治疗（40 mg/kg）显著降低了BLM攻击小鼠的肺指数（肺重/体重比）。[1]
组织病理学检查（H&E染色）显示，新对叶百部新碱 治疗减少了肺组织中的炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚和结构破坏，从而降低了炎症评分。[1]
新对叶百部新碱 治疗显著降低了BLM诱导小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的总白细胞计数，以及巨噬细胞/单核细胞和淋巴细胞的计数。[1]
Masson三色染色显示，新对叶百部新碱 (20 和 40 mg/kg) 显著减少了BLM诱导小鼠肺中的胶原沉积。[1]
免疫组织化学染色和Western印迹分析证明，新对叶百部新碱 治疗下调了肺组织中促纤维化标志物TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。[1]
Western印迹分析表明，新对叶百部新碱 治疗调节了细胞外基质调节因子的表达：它降低了BLM诱导的MMP-2和TIMP-1的过表达，增加了MMP-9的表达，从而提高了肺组织中的MMP-9/TIMP-1比值。[1]
针对F4/80（巨噬细胞标志物）的免疫组织化学染色显示，新对叶百部新碱 治疗减少了纤维化肺组织中的巨噬细胞浸润。[1]
肺组织的Western印迹分析表明，新对叶百部新碱 治疗显著降低了精氨酸酶-1（M2标志物）的表达，对iNOS（M1标志物）的影响较弱。[1]

免疫荧光检测:Hypoxyprobe™-1是一种取代的2-硝基咪唑，命名为吡咪唑。如果po2水平低于10毫米汞柱，它就会与细胞结合，因此常被用作检测细胞缺氧的探针。plf培养至80%汇合度。空腹12 h后，用200 μmol/L的hypoxyprobe和10 μmol/L 的Neotuberostemonine (NTS)分别在缺氧、缺氧(1% O2)或100 μmol/L CoCl2条件下于37℃孵育12 h，用3%牛血清白蛋白(BSA)固定plf，阻断后用抗hypoxyprobe和DAPI处理。空白对照以同样方式处理。在共聚焦扫描显微镜下检查所有处理过的plf。Reference: Acta Pharmacol Sin. 2018 Sep;39(9):1501-1512. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29645000/

---

细胞活性（MTT实验）： 将RAW 264.7细胞以2 × 10⁵ 细胞/mL的密度接种于96孔板中。孵育6小时后，用不同浓度的 新对叶百部新碱 处理细胞24或48小时。随后，向每孔加入MTT溶液并孵育4小时。形成的甲臜晶体用DMSO溶解，使用酶标仪在570 nm波长下测量吸光度以评估细胞活性。[1]
一氧化氮（NO）产生： RAW 264.7细胞用 新对叶百部新碱 预处理1小时，然后用LPS (1 μg/mL) 刺激24小时。使用Griess试剂测量培养上清液中NO的浓度。[1]
M1/M2标志物的Western印迹分析： RAW 264.7细胞用 新对叶百部新碱 预处理1小时，随后用LPS (1 μg/mL 刺激24小时) 诱导M1极化或用IL-4 (20 ng/mL 刺激48小时) 诱导M2极化。然后裂解细胞。测定蛋白浓度，等量蛋白通过SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜上，并用针对iNOS（M1标志物）或精氨酸酶-1（Arg-1，M2标志物）的一抗进行孵育。使用HRP标记的二抗和ECL试剂显示蛋白条带。[1]
TGF-β1的ELISA检测： 使用商业ELISA试剂盒，按照制造商说明书，测定经 新对叶百部新碱 和IL-4处理的RAW 264.7细胞上清液中TGF-β1的浓度。[1]

将ICR雄性小鼠随机分为5组（n=20），分别为假手术组、模型组、新块茎碱（NTS）组、PND组和地高辛（Dig）组。禁食12小时后，小鼠经4%水合氯醛（10 mL/kg）麻醉，然后经气管内注射博来霉素（BLM，3.5 U/kg，溶于0.9%氯化钠溶液）或0.9%氯化钠溶液（假手术组）。造模7天后，BLM处理组小鼠分别灌胃给予新块茎碱（NTS，30 mg/kg）、PDN（6.5 mg/kg）及等体积的生理盐水（假手术组和模型组），或腹腔注射地高辛（1 mg/kg），每日一次，连续7天或14天。在博来霉素（BLM）治疗后第15天和第22天切除肺组织。参考文献：Acta Pharmacol Sin. 2018 Sep;39(9):1501-1512. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29645000/

---

博来霉素诱导的肺纤维化模型：雄性C57BL/6小鼠麻醉后，通过单次气管内滴注博来霉素（BLM，5 U/kg，溶于0.9%氯化钠溶液）诱导肺纤维化。BLM给药当天记为第0天。假手术对照组小鼠接受等体积的0.9%氯化钠溶液。[1]
药物处理：将新块茎碱悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液中。从博来霉素（BLM）灌注后第8天开始，每天一次通过灌胃给予20和40 mg/kg剂量的药物，持续至第21天。阳性对照组按相同方案接受尼达尼布（40 mg/kg，口服）。模型组和假手术组的小鼠仅接受赋形剂（0.5% CMC-Na）。[1]
样本采集：第22天，处死小鼠。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）用于炎症细胞分析。取出肺组织，称重后分成两份：一份用福尔马林固定用于组织学检查，另一份冷冻保存用于蛋白质分析。[1]

[1]. Neotuberostemonine attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis by suppressing the recruitment and activation of macrophages. Int Immunopharmacol. 2016 Jul;36:158-164.

新块茎碱是一种生物碱，具有代谢产物的作用。
据报道，新块茎碱存在于百部（Stemona japonica）、百部（Stemona phyllantha）以及其他有相关数据的生物体中。

---

新块茎碱是从百部（Stemona tuberosa Lour.）的根中分离得到的生物碱，百部是一种用于治疗咳嗽、哮喘等呼吸系统疾病的传统中药。[1]
本研究首次证实，新块茎碱对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化具有保护作用。该机制涉及抑制巨噬细胞向肺部的募集，并抑制其向促纤维化M2表型的极化，从而减少TGF-β1等促纤维化介质的产生。[1]
在该模型中，新块茎碱（40 mg/kg）的抗纤维化疗效与阳性对照药物尼达尼布（40 mg/kg）相当。[1]

C22H33NO4

375.509

375.24

C, 70.37; H, 8.86; N, 3.73; O, 17.04

143120-46-1

11667940

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

554.2±50.0 °C at 760 mmHg

289.0±30.1 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.556

Roots of Stemona tuberosa Lour; Stemona japonica; Stemona phyllantha

2.28

55.84

0

5

2

27

636

10

O1C([C@@]([H])(C([H])([H])[H])[C@]2([H])[C@@]1([H])[C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N3[C@]([H])([C@]4([H])C([H])([H])[C@]([H])(C([H])([H])[H])C(=O)O4)C([H])([H])[C@]2([H])[C@]31[H])=O

GYOGHROCTSEKDY-UEIGSNQUSA-N

InChI=1S/C22H33NO4/c1-4-13-14-7-5-6-8-23-16(17-9-11(2)21(24)26-17)10-15(19(14)23)18-12(3)22(25)27-20(13)18/h11-20H,4-10H2,1-3H3/t11-,12-,13+,14+,15-,16-,17-,18-,19+,20+/m0/s1

(2S,7aR,8R,8aR,11S,11aR,11bS,11cR)-8-ethyldodecahydro-11-methyl-2-[(2S,4S)-tetrahydro-4-methyl-5-oxo-2-furanyl]-furo[2,3-h]pyrrolo[3,2,1-jk][1]benzazepin-10(2H)-one

Neotuberostemonine; Tuberostemonine LG; CHEBI:69386; (1S,3S,9R,10R,11R,14S,15R,16R)-10-ethyl-14-methyl-3-[(2S,4S)-4-methyl-5-oxooxolan-2-yl]-12-oxa-4-azatetracyclo[7.6.1.04,16.011,15]hexadecan-13-one; CHEMBL479493; SCHEMBL19197265; DTXSID501316122; (+)-Neotuberostemonine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~133.16 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。